外周致密纤维1在人精子中的表达差异及其意义

目的:比较外周致密纤维1(ODF1)在健康男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:根据WHO标准,收集正常男性和弱精子症患者的精液标本各20份,Percoll非连续梯度离心法分离精子,收集95%Percoll以下和57%与76%Percoll层之间的精子,以排除生精细胞和白细胞的污染;采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测ODF1的表达。结果:RT-PCR结果表明,与正常男性组相比,ODF1在弱精子症患者精子中的mRNA表达水平显著降低(2.79±0.28vs1.35±0.25,P<0.05);免疫印迹与RT-PCR结果一致,与正常男性组相比,弱精子症患者精子中的ODF1蛋白的表达亦显著降低(3.64±0.34vs1.44±0.26,P<0.05)。结论:ODF1在弱精子症患者精子中的表达显著降低,提示其可能与精子活动力低下有关。

精子相关抗原SPAG9在人精液精子中的表达及定位

目的:SPAG9作为MAPK家族中的成员,在精卵融合过程中发挥着重要的作用。本研究检测SPAG9在人精液精子中的表达情况。方法:取人不同组织(肌肉、肝、食管、肺、胃、肾、前列腺、子宫、睾丸、附睾)标本及健康男性的精液精子,为了排除圆形细胞的污染,精液标本经非连续性Percoll梯度离心、分离纯化;采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)和间接免疫荧光方法,从mRNA和蛋白水平检测SPAG9在精子中的表达。结果:RT-PCR结果显示,SPAG9mRNA不仅在各种不同的组织中有表达,而且在人精液精子中也有表达;间接免疫荧光结果显示,SPAG9蛋白主要定位于人精液精子头部的赤道板和精子尾部鞭毛上。结论:SPAG9在人精液精子中有表达,可能在精子获能和运动中有一定作用。

Ropporin在正常男性和弱精子症患者精液精子中的表达差异

目的比较Ropporin在健康男性和弱精子症患者精液精子中的表达差异。方法收集健康男性和弱精子症患者的精液精子,为了排除生精细胞和白细胞的污染,精液标本经非连续性Percoll梯度离心和分离纯化。采用荧光定量RT-PCR和免疫细胞化学方法,从基因和蛋白水平检测精子Ropporin的表达。结果荧光定量RT-PCR显示,Ropporin mRNA在正常男性和弱精子症患者精液精子中均有表达。与正常男性相比, Ropporin在弱精子症患者精子中的表达显著降低。免疫细胞化学结果显示,Ropporin蛋白在正常男性精子的表达水平明显高于弱精子症患者,该结果与荧光定量RT-PCR结果相一致。结论Ropporin在弱精子症患者精子中的表达显著降低,可能是导致精子运动能力低下的原因之一。

Ropporin基因在人精子中的表达和意义

目的检测ropporin基因在人精子中的表达。探讨Ropporin抗体对人精子运动的影响,评价Ropporin蛋白在精子运动中的功能。方法收集正常男性精子,非连续梯度离心法分离精子,用RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光方法检测ropporin基因在精子中的表达和蛋白定位;将纯化精子分别在含不同浓度Ropporin抗体的培养液中孵育(0,0.8,4和20μg/mL),在不同时间点(1,2,6h)用精子计算机辅助分析系统(computer-assisted sperm analysis,CASA)检测精子活动力。结果RT-PCR、免疫印迹和免疫荧光方法均检测出ropporin基因在精子中表达;免疫荧光表明Ropporin主要定位在精子鞭毛的主段和末段;抗体实验显示抗体孵育1h、2h、6h后精子的快速前向运动(a级)和慢速前向运动(b级)均明显受到抑制,并显示剂量依赖性。结论Ropporin在精子鞭毛的主段和末段上的表达与精子的运动密切相关。