C-jun与视神经元存活和轴突再生关系研究

哺乳动物中枢神经系统损伤为不可逆性损伤,引发一系列复杂病理生理过程,体内许多生物分子表达会随之发生变化,从而影响细胞存活和轴突再生,导致神经纤维退化和神经元的死亡。在此过程中,c-jun即刻早期转录因子一类,与损伤后神经元的凋亡和轴突的再生有密切关系。C-jun属于核内转录因子bZip超家族成员之一,与DNA特殊区域结合,调节下游基因的转录,但其表达变化对神经元的存活和再生作用尚存在争议。本文对近年来关于c-jun对损伤后视神经元的存活和轴突再生的影响加以综述。

汕头市石风景区及其周边地区蚊虫种类及生境调查(Diptera:Culicidae)

对汕头市主要旅游景点石风景区进行蚊虫调查 ,采集到 1 1种蚊虫 ,分别为伊蚊属中复蚊亚属的白纹伊蚊 ,纷蚊亚属的东乡伊蚊 ;库蚊属中路蚊亚属的贪食库蚊和褐尾库蚊 ,库蚊亚属二带喙库蚊、三带喙库蚊、致倦库蚊、拟态库蚊 ,真黑蚊亚属的马来库蚊 ,库状蚊亚属白胸库蚊。按蚊属中按蚊亚属的嗜人按蚊。其中白纹伊蚊为登革热的重要媒介 ,嗜人按蚊为疟疾和马来丝虫病的重要媒介 ,致倦库蚊为班氏丝虫病的重要媒介 ,三带喙库蚊为日本乙型脑炎的重要媒介。其它蚊种是鸟类和野生动物疾病的媒介或可能媒介。由于汕头地区蚊虫资料甚少 。

金黄地鼠腹侧前列腺来源蛋白结合精子表面的实验研究

目的:探讨前列腺分泌蛋白是否可结合于精子表面。方法:以金黄地鼠作为研究对象,应用间接免疫荧光和亲和素标记的蛋白转印方法检测前列腺分泌蛋白是否可结合于精子。制备的抗前列腺粗提取物多克隆抗体,间接免疫荧光技术检测体外与前列腺分泌物孵育的附睾精子,以及体内分别与含前列腺及去除前列腺雄鼠交配后收集的子宫腔内和输卵管腔内精子的前列腺成分抗原。前列腺提取物经电泳分离转膜后和生物素标记附睾精子膜蛋白作用,测定在体外前列腺分泌蛋白能否与附睾精子膜结合。实验分为对照组、附属性腺全去组、腹侧前列腺组、去除腹侧前列腺组。结果:前列腺抗原成分的免疫反应局限在精子体中部表面,而精子头、颈部未见阳性反应。在体外(80±5)%附睾精子与前列腺分泌蛋白结合,在体内与对照组雄鼠交配后收集的子宫腔内精子与前列腺分泌蛋白结合精子阳性率为(30.0±4.6)%,与去除腹侧前列腺组(3.6±1.4)%比较差异有显著性(P<0.01),在体内与对照组雄鼠交配后收集的输卵管腔内精子与前列腺分泌蛋白结合精子阳性率为(16.0±3.6)%,与去除腹侧前列腺组精子(3.2±1.4)%比较差异有显著性(P<0.01)。前列腺分泌蛋白的电泳印记膜与生物素标记附睾精子膜蛋白孵育后显色分析结果可见5条阳性反应带。结论:金黄地鼠的前列腺分泌蛋白可结合于精子体中部表面,前列腺分泌蛋白中至少有5个组分可与精子膜蛋白结合。

金黄地鼠腹侧前列腺在体修饰精子膜蛋白作用研究

【目的】在整体水平探讨前列腺分泌蛋白对金黄地鼠精子膜蛋白的影响。【方法】雄性鼠手术分为4组,分别为附属性腺全去组,腹前列腺摘除组,去除其他附属性腺仅保留腹前列腺组和假手术组,每组动物6只。收集与保留前列腺及去除组的雄性鼠交配后的子宫腔精子,抽提精子膜蛋白,膜蛋白经聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)和二维电泳凝胶分析,比较前列腺存在与否精子膜蛋白组分的异同。【结果】与不同组雄鼠交配后收集的子宫腔精子膜蛋白SDS-PAGE电泳谱主要条带类似,含腹前列腺组的精子膜组分中相对分子质量15k、29k、38k、55k和91k多肽的量较去除腹前列腺组的子宫腔精子膜相应组分增加。二维电泳结果示与含腹前列腺组雄鼠交配后收集的子宫腔精子膜蛋白较无腹前列腺组的精子膜蛋白多出10个蛋白斑点(MM/IP分别为16k/8.60、16.5k/9.2、28k/5.88/6.10、29k/5.98、32k/6.35/6.50/7.20、61k/5.90、83k/6.40),另外蛋白斑点量增加有11个。【结论】腹前列腺可修饰和调节精子膜蛋白,进而这些蛋白可能对雄性生殖力及胚胎的发育起作用。

人真皮原代成纤维细胞的培养、鉴定及蛋白酶活性受体的表达

目的探索和建立人真皮原代成纤维细胞培养并鉴定纯度,检测蛋白酶活性受体在该细胞的表达状态。方法用胰酶消化法分离人包皮成纤维细胞并培养人真皮原代成纤维细胞,用免疫细胞化学法鉴定纯度;用RT-PCR、流式细胞分析和免疫细胞化学染色法检测蛋白酶活性受体的表达。结果胰酶消化法成功培养出人真皮原代成纤维细胞,纯度达99%;人真皮成纤维细胞高表达PAR1、PAR3 mRNA及蛋白,微弱表达PAR2 mRNA及蛋白,不表达PAR4 mRNA及蛋白。结论用胰酶消化法成功培养高纯度原代人真皮成纤维细胞;蛋白酶活性受体1、3在人真皮成纤维细胞上高表达,提示可能存在于炎症及损伤修复功能作用,为进一步研究打下基础。

三种库蚊核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)序列测定与系统进化分析

对广东省野外采集的库蚊属中2个亚属中的3种库蚊,褐尾库蚊Culex fuscanus(Lutzia、路蚊亚属)、二带喙库蚊Cx.bitaeniorhynchus和致倦库蚊Cx.pipiens quinquefasciatus(Culex、库蚊亚属)进行核糖体DNA第二内转录间隔区(ITS2)序列测定,并与GenBank中已知库蚊属中路蚊亚属、库蚊亚属、新库蚊亚属和黑蚊亚属的11种和伊蚊属1种蚊虫的ITS2进行序列分析。结果表明:褐尾库蚊与同亚属的非洲蚊种(Culex tigripes)亲缘关系最近,基因同源性为65.27%;库蚊亚属的二带喙库蚊与伪杂鳞库蚊基因同源性为75.87%;致倦库蚊与尖音库蚊复合组内淡色库蚊的基因同源性97.13%。在所选库蚊中,黑蚊亚属与伊蚊最接近,其次是新库蚊亚属和路蚊亚属的蚊虫。在库蚊属4个亚属中,路蚊亚属与库蚊亚属有更近的亲缘关系,这也印证了库蚊亚属某些幼虫与路蚊亚属幼虫具有相似习性的遗传基础。系统进化关系分析结果与经典分类学分类系统接近一致,但库蚊亚属的进化可能更具多样性。

前列腺精子结合蛋白的二维凝胶电泳及质谱分析

【目的】应用精子膜蛋白亲和层析柱分离金黄地鼠前列腺精子结合蛋白,并用二维电泳和质谱对金黄地鼠前列腺精子膜结合蛋白进行初步分析。【方法】应用附睾精子膜亲和层析柱纯化前列腺精子结合蛋白,采用二维凝胶电泳对纯化的前列腺精子膜结合蛋白进行蛋白分离和图像分析,并结合基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱分析及数据库搜索从而鉴定部分蛋白质斑点;RT-PCR检测已鉴定蛋白在前列腺及未受精卵子中的mRNA的表达。【结果】附睾精子膜蛋白亲和层析柱可纯化出前列腺结合蛋白,前列腺附睾精子膜蛋白结合蛋白的二维凝胶电泳蛋白图谱。分离的蛋白质斑点为30个,质谱鉴定出2个蛋白点,一为热休克蛋白105,另一羰基还原酶(NADPH)-3。前列腺和未受精卵中均表达热休克蛋白105和羰基还原酶-3的mRNA。【结论】自前列腺分泌物中分离出精子膜结合蛋白,金黄地鼠前列腺中精子结合蛋白经双向电泳及飞行质谱分析鉴定出蛋白热休克蛋白和羰基还原酶。

金黄地鼠前列腺分泌蛋白对输卵管液糖蛋白的影响

目的:在整体水平探讨前列腺分泌蛋白对金黄地鼠输卵管液中糖蛋白的影响。方法:金黄地鼠雄鼠依据手术方式的不同分为3组,分别为假手术组(SH)、附属性腺全去组(TX)和腹前列腺组(VP)(仅存前列腺)。收集与各手术组交配后不同时间点(交配后0.5、2、4、6h)的输卵管液(每一时间点及每一组,n=3),输卵管液蛋白经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,考马斯亮蓝或阿仙蓝染色分析,应用蛋白电泳印迹后与系列某一种特异性糖基专一性结合凝集素反应,分析糖蛋白的变化。结果:不同组雄鼠交配及不同时间点收集输卵管液蛋白电泳谱类似,约15条主要条带。凝集素结合谱示,麦胚凝集素(WGA)结合的相对分子质量(Mr)为32000、35500、47000、52000糖蛋白见于6h VP组输卵管液,而6h TX组可见Mr为81000、128000条带;与豌豆凝集素(PSA)结合Mr为37500、32000糖蛋白仅见于6h VP组,而6h TX组缺乏;仅6h VP组可见与双花扁豆凝集素(DBA)结合Mr为52000、47000糖蛋白,而6h TX组缺乏。而0.5、2、4h时间点收集的输卵管液各凝集素结合谱相似。结论:前列腺分泌蛋白可影响修饰交配6h后的输卵管液中含乙酰氨基葡萄糖、N-乙酰半乳糖胺/半乳糖和甘露糖糖链的糖蛋白。这些糖蛋白可能在胚胎的发育过程中起作用。

不同种属来源明胶及其他因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶的影响

金属蛋白酶12（MMP-2，明胶酶A）与金属蛋白酶-9（MMP-9，明胶酶B）在多种生理过程中起作用，病理状态下如肿瘤、心血管疾病和呼吸系统疾病，则这些酶的表达和活性增加。明胶酶谱法多用于检测血浆、细胞培养上清及组织中的金属蛋白酶-2和9的活性，我们先前的实验发现不同来源的明胶直接影响明胶酶谱法结果，不同方式处理样本对酶的活性检测有影响，本研究就明胶的来源（自猪、牛皮肤提取）是否影响金属蛋白酶活性的检测，以及不同样本量、样本储存温度、反复冻融等因素对明胶酶谱法检测金属蛋白酶活性的影响进行探讨。