硒化合物与EGFR/MAPK信号传导相关性的初步研究

目的 :比较研究亚硒酸钠 (Na2 SeO3 )及硒 -甲基硒代半胱氨酸 (MSC )与EGFR/MAPK信号传导的相关性 ,初步探索这两种硒化合物可能的与MAPK信号传导相关的抗肿瘤作用机制。方法 :利用细胞形态学、丫啶橙 (acridineorange ,AO)荧光染色、免疫组化及免疫蛋白印迹等方法 ,观察分析Na2 SeO3和MSC在不同作用浓度与时间对人食管癌EC10 9细胞的细胞形态学改变以及EGFR、MAPK、act ERK1/2蛋白的表达。结果 :Na2 SeO3 及MSC这两种硒化合物对人食管癌EC10 9细胞EGFR及act ERK1/2蛋白表达均有低浓度 ( 1μg/mL)激活、高浓度抑制的作用 ;并均呈明显的时间和浓度的依赖性。但其区别表现在 :1)细胞形态学观察 :Na2 SeO3主要表现为细胞肿胀 ,出现胞质空泡及颗粒状物质增多等毒性改变 ,并随剂量增加毒性改变愈明显 ;MSC则主要呈现细胞固缩、凋亡小体形成 ,未见明显细胞毒性作用。 2 )MSC组对EC10 9细胞EGFR/act ERK1/2信号传导的抑制作用均明显高于相应浓度的Na2 SeO3组 ,P <0 0 1,但MSC 16μg/mL作用 2 4、48h时EGFR及act ERK1/2蛋白表达有很微弱回升。结论 :1)Na2 SeO3 和MSC对EC10 9细胞系细胞形态学影响与MAPK信号传导相关 ,且对EGFR/MAPK信号通路有抑制作用。 2 )与Na2 SeO3 比较 。

外周血白细胞核基质蛋白检测在造血系统恶性肿瘤中的应用

采用高盐抽提方法制备正常人、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病及恶性组织细胞病患者外周血白细胞核基质蛋白，经SDS—PAG电泳分析，发现不同来源的白细胞，其核基质蛋白表达存在显著差异，主要表现在分子量为210KD、135KD、110KD、46Kn和21KD的条带上。该方法简便，对于研究造血系统恶性肿瘤外周血白细胞核基质蛋白有显著意义。

慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病白细胞核基质蛋白研究

采用高盐抽提方法制备正常人、慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病患者外周血白细胞核基质蛋白，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，发现不同来源的白细胞，其核基质蛋白表达存在显著差异，主要表现在分子量为１１０ＫＤ、１２０ＫＤ和１３５ＫＤ的条带上。该发现对于进一步研究慢性粒细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病的发病机制有一定意义。

HDV核酶对乙型肝炎病毒抑制作用的研究

目的研究HDV核酶在细胞内对乙型肝炎病毒(HBV)复制及其抗原表达的抑制作用。方法1)以HBV前基因组mRNA为靶基因,体外筛选出HDV核酶有效作用位点,构建HDV核酶并进行体外测活;2)分别选用tRNA-Val、U6和hCMV 3种真核启动子,重组构建HDV核酶真核表达载体ptVHRz、pSURz和pcDHRz,分别用3种载体转染HepG2.2.15细胞;3)用点杂交、ELISA和实时荧光定量PCR方法分别检测核酶在细胞内的表达及对HBV的抑制作用。结果在HBV C基因区筛选到一位点,所构建的HDV核酶在体外条件下对该位点能产生有效切割。3种核酶表达载体在细胞内均能高效表达,在转染48 h后,ptVHRz和pcDHRz对HBeAg的表达产生了明显的抑制作用,而对HBsAg没有抑制作用。三者对HBV的复制均未产生明显影响。结论HDV核酶在细胞内对HBV抗原的表达能产生特异性抑制作用,但未能有效抑制HBV的复制,对其原因需进一步深入研究。

食管癌p53基因突变的研究

应用非同位素PCR－SSCP方法分析30例食管瘤患者癌组织及相应癌旁组织p53基因第5～9外显子，结果发现8例癌组织存在p53基因突变；其中的4例为p53基因杂合性丢失（LOH）。部分癌旁组织亦检测到p53基因突变。实验结果表明，p53基因突变可能是食管癌癌变的早期遗传学损害，对食管癌的发生起重要作用。

细胞粘附分子与肝脏疾病

细胞粘附分子（cell adhesion molecule，CAM）是一组介导细胞与细胞、细胞与基质问相互作用的分子，它包括钙粘素、整合素、选择素、免疫球蛋白超基因家族和高分子碳水化合物等几大类。近年来，关于细胞粘附分子与肝脏疾病的研究越来越多，如CAM在肝脏癌症的侵袭和转移、肝脏炎症细胞的浸润、肝纤维化和肝硬化等的发生、发展中起着重要的作用。现就粘附分子在肝脏疾病方面的进展作一综述。

苦瓜蛋白的药用价值

苦瓜为葫芦科苦瓜属植物,从中提取的蛋白质成分包括蛋白酶抑制剂、核糖核酸酶、核糖体失活蛋白等,具有比较广泛的药理学作用。MAP30等可以通过使核糖体失活,抑制肿瘤细胞蛋白质的合成,抑制肿瘤细胞的生长;通过抑制T细胞的增长,抑制HIV病毒的复制,达到治疗艾滋病的目的。笔者着重对其抗肿瘤作用及抗艾滋病作用进行了综述,认为苦瓜蛋白成分的开发和应用给恶性肿瘤和艾滋病的治疗提供了新的思路,具有潜在的开发应用前景。

大肠癌IGF2基因的印迹丢失

胰岛素样生长因子 2 (IGF2 )基因属于印迹基因 ,它的表达产物IGF2对促进正常生长发育具有重要作用。IGF2印迹丢失 (lossofimprinting ,LOI)与肿瘤发生密切相关。在大肠癌中 ,IGF2印迹丢失尤其明显。最近的研究证实 ,IGF2印迹丢失可以作为大肠癌发生危险性的分子标记。

恙虫病东方体Karp株47kDa蛋白成熟肽的克隆与表达

目的 :克隆表达恙虫病东方体 (Orientiatsutsugamushi,Ot)Karp株 4 7kDa表面蛋白的成熟肽 ,探索其作为疫苗及诊断抗原的可能性。方法 :采用PCR方法 ,从 OtKarp株菌种基因组DNA中扩增出 4 7kDa成熟蛋白基因片段 ,将该片段克隆于原核表达载体pQE30 ,构建成重组质粒pQE30 4 7,转化大肠杆菌 (E coli) ,经IPTG诱导表达 ,SDS_PAGE和Western_blotting检测目的蛋白的表达。结果 :①获得长约 12 72bp的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因 ;②SDS_PAGE和免疫印迹显示该重组质粒转化的E coli有一相对分子量约为 4 3× 10 4 的独特蛋白带 ;③重组表达质粒序列分析结果显示pQE30 4 7中插入的基因片段的序列与已报告的OtKarp株 4 7kDa外膜蛋白基因序列基本一致 ,并与已知序列相同。结论 :获得了OtKarp 4 7kDa蛋白基因 ,并在E coli中实现了表达 。

EGF对体外培养食管癌细胞增殖及迁徙能力的影响

目的：观察不同浓度表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）对食管癌细胞株EC109和EC-1增殖及漫润能力等生物学特性的影响。方法：观察细胞形态，MTT检测细胞增殖活性，单克隆扩散实验和划痕损伤实验检测细胞的浸润迁徒能力，免疫荧光观察细胞骨架的组分微丝的改变。结果：高浓度组2株食管癌细胞形态发生上皮细胞-间叶样变（epithelial-mesenchymal transition，EMT）；0．01～0．1μg／LEGF对EC109和EC-1食管癌细胞株均有轻微的抑制增殖效应，1～100μg／LEGF能明显卿制EC109和EC-1细胞的增殖，其中EGF的最大抑制效应浓度为10μg／L；单克隆扩散实验和划痕损伤实验表明，高浓度组均有细胞迁出；免疫荧光提示，高浓度EGF能诱导β-actin重新分布，细胞的长极出现较长的应力纤维束。结论：高浓度EGF对食管癌细胞株EC109和EC-1的增殖有一定的抑制作用，并且能促进食管癌细胞发生迁徒，诱导微丝发生明显重组。