小干扰RNA下调乳腺癌扩增基因3表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞转化生长因子-β通路的影响

目的观察小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)特异性干扰乳腺癌扩增基因3(amplifiedin breast cancer 3,AIB3)对乳腺癌细胞转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)通路关键分子smad2、smad3及转移相关分子基质金属蛋白-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的影响。方法制备3组靶向AIB3的特异性siRNA分别转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,采用逆转录-聚合酶联反应检测siRNA干涉效果以及smad2、smad3与MMP-9的表达水平变化。结果与空白对照组相比,3组合成的靶向特异性siR-NA均可有效抑制AIB3基因表达;干涉AIB3可同时显著下调smad2、smad3及MMP-9的表达水平。结论成功设计有效干扰AIB3的siRNA序列,在乳腺癌细胞中应用siRNA干扰AIB3可有效抑制TGF-β通路和转移相关通路关键分子的表达,干扰AIB3基因表达有可能成为临床治疗乳腺癌转移的有效策略。

蛇床子素对低分化鼻咽癌CNE2干细胞增殖、放疗敏感性的影响

目的探讨蛇床子素对低分化鼻咽癌CNE2干细胞增殖、放疗敏感性的影响及其机制。方法采用无血清培养基分离培养低分化鼻咽癌CNE2细胞的干细胞;流式细胞仪检测干细胞表面标记物CD44+/CD24-low的表达和乙醛脱氢酶(ALDH)活性;MTT检测不同质量浓度(0、20、40、80μg/m L)蛇床子素处理后,CNE2干细胞增殖能力的差异;克隆形成实验检测蛇床子素(40μg/m L)联合放疗后(0、2、5 Gy),CNE2干细胞克隆形成能力的差异;Western blotting法检测不同质量浓度蛇床子素处理、蛇床子素联合不同放射剂量放疗后,鼻咽癌CNE2干细胞中p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达水平。结果在无血清培养基中可分离培养稳定传代的低分化鼻咽癌CNE2干性细胞。细胞CD44+/CD24-low、ALDH+的表达高于亲本细胞(P<0.05);MTT结果显示,与对照组相比,不同质量浓度的蛇床子素作用不同时间后,干细胞增殖抑制率明显增加(P<0.05),且随着蛇床子素质量浓度的增加及作用时间的延长,其抑制作用增强(P<0.05);克隆形成实验结果显示,与对照组相比,各给药组干细胞克隆形成率均明显降低,蛇床子素+放疗组显著低于蛇床子素组及放疗组(P<0.05);Western blotting检测结果显示,随着蛇床子素质量浓度的增加,放射剂量的增加,与对照组相比,干细胞p-GSK-3β、β-catenin、Cyclin D1的蛋白表达水平均明显降低,蛇床子素+放疗组显著低于蛇床子素组及放疗组(P<0.05);结论蛇床子素能有效抑制低分化鼻咽癌CNE2干细胞的增殖并促进其放疗敏感性,其机制可能是蛇床子素抑制肿瘤干细胞p-GSK-3、β-catenin、Cyclin D1蛋白的表达,从而抑制了干细胞增殖,促进了放疗敏感性。

2,2′,4,4′-四溴联苯醚对人乳腺癌细胞MCF-7细胞生物学行为影响

目的乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤,生殖模式的改变和环境雌激素暴露增加导致女性乳腺癌发病率不断增高。本研究旨在探讨环境中广泛存在的内分泌干扰物2,2′,4,4′-四溴联苯醚(2,2′,4,4′-tetrabromodiphenyl ethers,BDE-47)对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭等细胞生物学行为的影响及可能机制。方法体外培养MCF-7细胞,以梯度浓度BDE-47分别处理细胞,采用MTT法和Transwell实验分别检测细胞增殖及迁移侵袭能力,并通过蛋白质印迹法检测间质上皮转化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)相关标志物和β-catenin的蛋白表达水平。结果与无BDE-47暴露亲代细胞株比较,MTT实验结果显示,BDE-47暴露<72h对细胞无明显促增殖作用,F=2.002,P=0.233。迁移试验结果显示,2.5、5和10μmol/L浓度组与对照组比较,迁移细胞数差异均有统计学意义,t值分别为-12.901、-5.250和-12.799,P值分别为<0.001、0.006和0.001。侵袭实验结果显示,2.5、5和10μmol/L浓度BDE-47处理组与对照组比较,侵袭细胞数差异均有统计学意义,t值分别为-4.281、-10.056和-12.331,P值分别为0.013、0.001和<0.001;且均呈浓度依赖性。蛋白质印迹法结果表明,不同浓度BDE-47处理48h后,MCF-7细胞E-cadherin蛋白表达均下降,N-cadherin、Vimentin和β-catenin表达上调。结论 BDE-47暴露对乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖无明显影响,可能通过β-catenin信号通路诱导细胞EMT促进乳腺癌细胞MCF-7的迁移和侵袭。