由一株青霉菌产生的聚乙烯醇降解酶

从纺织污水活性污泥中筛选得到一株新型聚乙烯醇(PVA)降解酶产生菌,根据形态学特征鉴定该菌属于青霉属(Penicillium sp.),实验室编号WStt02-21.这是由霉菌产生PVA降解酶的首例报道.在考察了菌株WSH02-21基本生长和产酶特性的基础上,研究了营养条件对PVA降解酶合成的影响.通过对营养条件的单因素考察和正交试验,确定了最优培养条件为PVA 40 g L-1、葡萄糖3.0 g L-1、NH4Cl 8.0 g L-1、KH2PO4 2.0 g L-1、酵母膏1.0 g L-1、:MgSO40.5 g L-1。、CaCl2 1.0 g L-1、NaCl 0.02 g L-1、FeSO4·7H2O 0.02 g L-1,初始pH 6.4.其中PVA浓度是影响Penicilliumsp.WSH02-21合成PVA降解酶的最重要因素.采用最优化条件进行验证试验,PVA降解酶酶活(4.4 U mL-1)略高于正交试验中的的最高酶活(4.3 U mL-1).

过表达csrB和tktA强化大肠杆菌生物合成L-色氨酸

L-色氨酸代谢合成中,增加芳香族氨基酸前体物质的供应是提高产量的关键因素之一.本研究在Escherichia coli KT1306中过表达碳贮存调控中心(Carbon storage regulator,CSR)中的非编码小RNA csrB和转酮醇酶基因tktA,分别来增加芳香族氨基酸合成前体磷酸烯醇式丙酮酸(PEP)及赤藓糖-4-磷酸(E4P)的供应.结果显示,2%的葡萄糖浓度下,过表达csr B及tkt A单基因分别使工程菌L-色氨酸产量提高7.5%和15.6%,csr B-tkt A双基因共表达使工程菌的产量提高24.7%.在低于3%的葡萄糖浓度下,重组菌株单位碳源的L-色氨酸产率均有提高,且csrB-tktA共表达的效果最佳,碳源越少,E.coli KT1306/p RSF-tac-csr B-tac-tkt A产酸率优势越明显;当葡萄糖浓度为0.1%时,csr B-tkt A共表达菌株的L-色氨酸产率达0.21g g-1,接近于大肠杆菌非生长状态下的最大理论产值.本研究结果表明,csr B与tkt A的组合能够增加芳香族氨基酸前体物质的供应,使更多碳流流向芳香族途径,对于提升大肠杆菌生物合成L-色氨酸的生产性能有明显的促进作用.