基于IRDye800CW靶向荧光探针的胶质母细胞瘤术中导航研究

目的制备靶向表皮生长因子受体(EGFR)的荧光探针西妥昔单克隆抗体(Cetuximab)-IRDye800CW,探讨其在胶质母细胞瘤(GBM)手术导航中的应用价值。方法测定Cetuximab-IRDye800CW荧光性能;通过免疫印迹法(Western blot)验证Cetuximab-IRDye800CW与GBM细胞结合的特异性;通过酶联免疫吸附测定(ELISA)竞争结合法验证探针是否通过结合EGFR来实现肿瘤靶向性。将GBM裸鼠皮下模型按完全随机法分为实验组和对照组(各3只),分别注射荧光材料Cetuximab-IRDye800CW和IRDye800CW,并于注射后5 min、24 h、48 h、72 h成像,比较2组肿瘤平均荧光强度(MFI)和肿瘤与周围背景的信噪比(TBR)差异。构建GBM裸鼠原位模型(6只),行MRI及术中荧光导航,并与病理学分布对比。采用两独立样本t检验处理数据。结果Cetuximab-IRDye800CW的最大发射波长为820 nm,可被近红外荧光成像设备接收。Western blot证实Cetuximab-IRDye800CW仅与GBM细胞相结合。ELISA竞争结合法证实Cetuximab-IRDye800CW通过与EGFR结合实现肿瘤靶向性。注射荧光材料后5 min、24 h、48 h、72 h,实验组肿瘤MFI分别为109.00±3.81、73.36±9.93、55.24±8.82、37.71±6.11,对照组肿瘤MFI分别为91.32±4.17、42.91±5.39、25.08±6.05、8.33±1.00,实验组肿瘤MFI较高(t值:4.36~9.40,P值:0.011~0.049);注射后24 h及48 h,实验组肿瘤TBR高于对照组(24 h,2.40±0.28与1.57±0.07,t=4.94,P=0.039;48 h,2.07±0.12与1.22±0.08,t=9.85,P=0.010)。MRI证实GBM原位模型构建成功,在荧光设备导航下肿瘤可视化,HE染色肿瘤病理学分布与荧光成像相符。结论Cetuximab-IRDye800CW具备荧光显像能力,在GBM术中导航中可识别肿瘤边界,具有潜在的临床应用价值。