FAM3C表达对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和调控机制

目的分析序列相似家族3成员C(FAM3C)在胰腺癌中的表达以及对胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭等影响和相关机制。方法收集2022年7月至2023年6月在江南大学附属医院手术切除的4例胰腺癌患者的癌组织和癌旁组织。聚合酶链反应和Western印迹检测组织和胰腺癌细胞PANC-1、MIA PaCa-2中FAM3C的表达。选取PANC-1、MIA PaCa-2细胞(FAM3C高表达)设置FAM3C-siRNA干扰组和甲基转移酶样蛋白3(METTL3)-siRNA干扰组,予以相应干扰小RNA处理,同时设置阴性对照组。细胞计数检测增殖能力,Transwell检测细胞迁移及侵袭。免疫共沉淀甲基化抗体检测FAM3C是否发生甲基化以及METTL3是否介导此甲基化。结果4例胰腺癌患者癌组织中FAM3C的mRNA相对表达为(1.29±0.19),高于癌旁组织(0.47±0.17),差异有统计学意义(t=-6.48,P=0.001)。与阴性对照A组相比,FAM3C-siRNA干扰组增殖能力下降,迁移和侵袭细胞数减少,差异均有统计学意义(均P<0.05)。在PANC-1细胞阴性对照B组中,IgG处理的细胞FAM3C mRNA相对表达为(1.05±0.53),低于甲基化抗体处理组的(30.57±1.09),差异有统计学意义(t=-42.04,P=0.001)。PANC-1细胞经甲基化抗体处理后,阴性对照B组FAM3C mRNA相对表达高于METTL3-siRNA干扰组(30.57±1.09)比(18.17±0.50),差异有统计学意义(t=17.89,P=0.001)。与阴性对照B组相比,METTL3-siRNA干扰组PANC-1细胞增殖能力、迁移和侵袭细胞数降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。MIA PaCa-2与PANC-1细胞检测结果一致。结论FAM3C在胰腺癌中高表达,且促进胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭,METTL3通过甲基化修饰FAM3C影响其表达,进一步影响胰腺癌细胞增殖、迁移和侵袭。

猪肝脱细胞基质制备方法研究

目的:对比分析不同方法制备的猪肝脱细胞基质中蛋白的保留情况,进一步优化制备工艺。方法:分别采用聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)、十二烷基硫酸钠(SDS)两种表面活性剂并结合胰酶酶解等手段制备猪肝ECM。再以H&E染色、免疫组化、生物质谱分析等检测方法对比分析两种ECM的成分及含量,进而优化ECM的制备工艺并探讨其中的机制。结果:Triton X-100和SDS两组都可以制备符合国际标准的ECM,其中Triton X-100组对胶原蛋白和生长因子的保留优于SDS组;但GAG流失较多。结论:综合运用胰蛋白酶+氨水+Triton X-100的脱细胞策略可以制备符合国际标准的ECM,同时减少了ECM蛋白的流失。