嗜麦芽窄食单胞菌对肺腺癌A549细胞系转录组基因表达的影响

目的探讨嗜麦芽窄食单胞菌对肺腺癌细胞转录组基因表达的影响,分析可能的目标基因。方法实验分为对照组和嗜麦芽窄食单胞菌组,嗜麦芽窄食单胞菌作用于A549细胞系4 h后利用转录组学测序分析基因表达,筛选差异表达的基因,通过基因本体(GO)富集分析及京都基因与基因组百科全书KEGG富集分析,并且使用Broad Institute开发的基因集富集分析(GSEA)算法进行分析,帮助识别所选择的样本中表达量变化最明显的基因集中在哪些通路、生物学过程或功能组分等。结果经过限定条件的筛选,共有2285个基因差异表达,其中上调的基因有1669个,下调的基因有616个,其中HDAC5在S.maltophilia中显著上调。KEGG富集分析发现丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路、p53信号通路等在S.maltophilia组与对照组之间差异有统计学意义,通过GSEA分析酪氨酸激酶(JAK)-信号转导与转录激活因子(STAT)信号通路、MAPK信号通路、Ras信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路等在S.maltophilia组中显著上调通过KDA分析,CXC型趋化因子配体8(CXCL8)在S.maltophilia组中显著上调通过。结论CXCL8可能通过上调PI3K-Akt信号通路发挥S.maltophilia促进肺腺癌A549细胞增殖的作用。

一种近红外光线响应的具有抗肝癌活性的一氧化氮纳米载药系统的研究

目的探讨一氧化氮(NO)供体和聚多巴胺复合纳米体系的制备方法以及其对肝癌细胞的抑制作用。方法采用化学合成法制备聚多巴胺(PDA)负载一氧化氮供体S-亚硝基半胱胺衍生物(SNO)得到纳米载药复合体系SNO@PDA,通过磁共振成像和质谱分析进行化学结构鉴定,通过动态光散射技术和透射电镜检测其粒径和形貌表征,分别通过电子温度计和Griess试剂盒检测光热稳定性以及NO的释放。最后通过噻唑蓝(MTT)实验检测纳米载药复合体系对肝癌细胞株Huh7的生长抑制作用。两组间均数比较用t检验,多组间均数比较用单因素方差分析。结果磁共振成像和质谱分析确认成功合成SNO,动态光散射技术测定SNO@PDA的粒径在190 nm左右,透射电镜显示为球形颗粒,形态均一,且在生理条件下可稳定存在。SNO@PDA的载药率为19.4%,包封率为71.4%。当浓度为35 mg/L时,近红外(Near-infrared,NIR)照射后温度可升高12℃左右。重复4个开/关循环后升温幅度没有变化。3个循环后NO的释放率达到86%。MTT法测定细胞存活率,当浓度为60 mg/L时,SNO@PDA+NIR组的细胞存活率为(37.2±2.2)%,低于SNO+NIR组(60.1±7.2)%,差异有统计学意义(t=6.500,P<0.01);低于空白材料PDA组(73.9±0.5)%,差异有统计学意义(t=5.900,P<0.01);低于PDA+NIR组(57.9±7.1)%,差异有统计学意义(t=6.400,P<0.01)。结论SNO@PDA可以发挥化疗-光热疗法的组合优势,有效抑制肝癌细胞的增殖。

人类无翅相关集合位点家族2号基因通过信号传导与转录激活因子3通路调控结直肠癌细胞中己糖激酶2的表达

目的:在体外研究结直肠癌细胞中人类无翅相关集合位点家族2号基因(Wnt2)对己糖激酶2(HK2)表达的影响,探讨其调控机制。方法:使用慢病毒构建高表达Wnt2的人结直肠腺癌细胞(Caco2)稳转株细胞(Caco2-Wnt2、Caco2-NC)和低表达Wnt2的人回盲肠癌细胞(HCT8)稳转株细胞及其对照组(HCT8-shWnt2、HCT8-shNC);通路富集分析(GSEA)探究Wnt2参与结直肠癌发生发展的可能机制,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测转染效率和稳转株中8种有氧糖酵解相关分子的表达;信号传导与转录激活因子3(STAT3)通路抑制剂酪氨酸磷酸化抑制剂(AG490)分别在50 mmol/L和100 mmol/L浓度下抑制STAT3磷酸化,固定化蛋白质印迹法(Western blot)检测Wnt2、HK2、STAT3、磷酸化信号转导与转录活化因子3(pSTAT3)的mRNA和蛋白表达水平。组间差异比较采用t检验。结果:Wnt2基因被富集到氨基糖和核苷酸糖代谢通路;Caco2-Wnt2组中HK2的mRNA表达水平高于Caco2-NC组(1.937±0.076比1.029±0.013,t=11.789,P<0.01),差异有统计学意义,HCT8-shWnt2组中HK2的mRNA表达水平低于HCT8-shNC组(0.375±0.029比1.064±0.016,t=20.920,P<0.01),差异有统计学意义;Western blot结果显示,Caco2-Wnt2组中的pSTAT3蛋白表达水平高于Caco2-NC组(0.350±0.004比0.170±0.008,t=19.068,P<0.01),差异有统计学意义,HCT8-shWnt2组中的pSTAT3蛋白表达水平低于HCT8-shNC组(0.275±0.014比0.530±0.035,t=6.829,P<0.01),差异有统计学意义;同时,Caco2-Wnt2+50 mmol/L组中的HK2的蛋白表达水平低于Caco2-Wnt2+DMSO组(0.362±0.013比1.524±0.023,t=44.703,P<0.01),差异有统计学意义;Caco2-Wnt2+100 mmol/L组中的HK2的蛋白表达水平低于Caco2-Wnt2+二甲基亚砜(DMSO)组(0.405±0.018比1.524±0.023,t=38.749,P<0.01),差异有统计学意义。结论:Wnt2通过STAT3通路调控结直肠癌细胞Caco2和HCT8中HK2的表达。