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题名PAX3在缺氧状态下调控滋养细胞铁死亡的机制研究
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作者
顾浩
顾颖
陈嘉颖
吴红琴
冯亚玲
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机构
江南大学附属妇产医院妇女保健科
江南大学附属妇产医院产科
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出处
《国际医药卫生导报》
2024年第14期2347-2354,共8页
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基金
江苏省妇幼保健科研项目(F202135)
江苏省妇幼健康重点学科项目(SFY3-FB2021)
无锡市卫生健康委科技成果和适宜技术推广项目(T202244)。
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文摘
目的探讨配对盒基因(PAX)3在缺氧状态下调控滋养细胞铁死亡的机制。方法该实验于2023年1月至12月在江南大学附属妇产医院优生优育医学研究所完成。分别在20%氧气的常氧状态下和2%氧气的缺氧状态下体外培养人绒毛膜滋养层细胞(HTR-8/SVneo),将HTR-8a/Svneo细胞按照不同的处理分为7组:常氧组、缺氧组、缺氧+NC质粒组、缺氧+PAX3(OE)组、缺氧+SLC40A1(OE)组、缺氧+VDAC3(OE)组、缺氧+PAX3(OE)+VDAC3(KD)组。运用质粒转染技术敲低电压依赖性阴离子通道亚型3(VDAC3)和过表达PAX3、SLC40A1、VDAC3来验证细胞中PAX3调控SLC40A1、VDAC3的表达。使用电子显微镜观察常氧状态、常氧+铁死亡诱导剂(Erastin)、缺氧状态下HTR-8/SVneo细胞线粒体情况。用活/死细胞双染色试剂盒检测细胞死亡率。采用免疫荧光细胞化学染色检测各组滋养细胞PAX3、SLC40A1、VDAC3的定位及表达。实时定量PCR法和Western blot法检测各组细胞PAX3、SLC40A1、VDAC3 mRNA和蛋白表达。使用独立样本t检验。结果(1)缺氧状态下的细胞线粒体结构与常氧状态+Erastin的线粒体结构相似,线粒体皱缩、体积减小,膜电子密度增高,内脊减少、模糊。(2)缺氧状态下,活/死细胞双染色试剂盒的结果显示细胞死亡率增加。免疫荧光结果显示细胞PAX3主要在胞核内表达,SLC40A1主要在胞浆内表达,VDAC3主要在线粒体中表达。(3)与常氧状态相比,缺氧处理组细胞死亡增多,HTR-8a/Svneo缺氧组中PAX3、SLC40A1 mRNA和蛋白表达量均降低;HTR-8a/Svneo缺氧组中VDAC3 mRNA和蛋白表达升高;敲低PAX3后,SLC40A1表达降低,细胞大量死亡;过表达PAX3后,SLC40A1表达增高,细胞存活率升高。结论缺氧会诱导滋养细胞铁死亡。PAX3通过调控滋养细胞铁死亡影响SLC40A1表达,但PAX3的敲除或过表达对VDAC3表达没有影响。
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关键词
子痫前期
铁死亡
PAX3
SLC40A1
VDAC3
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Keywords
Preeclampsia
Ferroptosis
PAX3
SLC40A1
VDAC3
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分类号
R714.244
[医药卫生—妇产科学]
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