抗菌肽buforin Ⅱ衍生物抑制细菌核酸合成的机制研究

目的探究抗菌肽buforin Ⅱ的衍生物buforin Ⅱ-A(BF2-A)和buforin Ⅱ-B(BF2-B)对细菌的胞内抑菌作用机制。方法体外用原子力显微镜观察抗菌肽与基因组DNA的结合情况,荧光光谱分析肽与基因组DNA的结合方式。体内用透射电镜观察抗菌肽作用后金黄色葡萄球菌细胞膜超微结构的变化,流式细胞仪分析肽对金黄色葡萄球菌细胞周期的影响。最后通过凝胶阻滞实验推测肽与金黄色葡萄球菌DNA合成相关基因的结合引起了细胞周期的改变。结果肽与基因组DNA发生了结合,与溴化乙锭(EB)竞争性嵌入基因组DNA;BF2-A/BF2-B与金黄色葡萄球菌作用后几乎在不破坏细胞膜的情况下渗透进入胞内,与DNA合成相关基因发生了结合,特异性阻滞细胞周期中的DNA合成阶段;肽与DNA合成相关基因发生了结合。另外,所有的实验结果显示了BF2-B穿透细胞、与DNA结合的能力及对细胞周期的影响强于BF2-A。结论 BF2-A/BF2-B与DNA穿过金黄色葡萄球菌细胞膜后在细胞内通过与DNA结合,特异性的将细胞阻滞在了细胞周期的DNA合成期而发挥了抑菌作用,而且BF2-B的上述作用强于BF2-A。

蛋氨酸羟基类似物对小鼠营养物质消化和肌肉生长的影响

本研究旨在研究蛋氨酸(MET)和蛋氨酸羟基类似物(HMTBA)对饲喂高脂饲粮小鼠自由基水平、料重比、营养物质消化率和肌肉生长的影响。选用60只昆明种雄性小鼠分成4组,分别是正常+0.2%MET组、正常+0.1%MET+0.1%HMTBA组、高脂+0.2%MET组、高脂+0.2%HMTBA组。饲喂4周,测定自由基、腿肌率、基因相对表达量等指标。结果显示:与正常+0.2%MET组相比,高脂+0.2%MET组血液和组织的自由基水平显著提高(P<0.05),导致小鼠氧化应激,而高脂+0.2%HMTBA组自由基水平下降,与正常+0.2%MET组接近;高脂组中HMTBA的添加,显著提高了小鼠的粗蛋白质、粗脂肪消化率,降低了料重比(P<0.05);同时提高了肝脏、空肠组织胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGFⅠ-)基因的相对表达量,显著提高了小鼠的腿肌率和肌肉组织Myogegin基因的相对表达量,降低了Myostatin基因的相对表达量(P<0.05)。结果表明:适量的HMTBA能够有效清除体内的自由基,降低料重比,提高营养物质消化率,促进动物肌肉生长,提高与肌肉生长正相关基因的表达量。

蛋氨酸羟基类似物对小鼠组织自由基和抗氧化作用研究

目的:研究蛋氨酸(MET)和蛋氨酸羟基类似物(HMTBA)对饲喂高脂日粮小鼠自由基水平、抗氧化作用及其血脂代谢的影响。方法:50只昆明种雄性小鼠分成5组,分别是正常+0.2%MET组、正常+0.1%MET+0.1%HMTBA组、高脂+0.2%MET组、高脂+0.2%HMTBA组、高脂+0.1%MET+0.1%HMTBA组。结果:与正常+0.2%MET组相比,高脂+0.2%MET可导致小鼠氧化应激,升高血液和组织的自由基水平,降低机体抗氧化能力,使血脂水平和动脉粥样硬化指数升高;而高脂+0.2%HMTBA能显著降低机体自由基水平,增强血清及组织中GSH-Px及CAT活性,显著升高T-AOC水平,显著降低MDA水平,与高脂+0.2%MET组相比,HDL升高,LDL、TG、TC、AI显著降低。结论:两种蛋氨酸源中,HMTBA有较好地抗氧化作用,能够更好地清除体内的自由基,提高机体的抗氧化能力,降低血脂。

葡寡糖对LPS诱导小鼠氧化应激与炎症反应调节作用的研究

本文研究了低、中、高三种不同聚合度葡寡糖(LGOS、MGOS、HGOS)对小鼠氧化应激与炎症反应的调节,并探讨其可能的作用机制。在采食正常日粮基础上,各组小鼠每日分别灌胃生理盐水、低聚果糖(FOS)、LGOS、MGOS、HGOS。21 d后,腹腔注射脂多糖(LPS)诱导小鼠建立氧化应激与炎症反应模型,分别测定LPS刺激后4 h和18 h时血清和肝脏中活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平、总抗氧化能力(total antioxidant ca-pacity,T-AOC)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量、肝脏中一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)活性、血清中白细胞介素1(Interleukin-1,IL-1)和肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-a)含量。结果表明:三种聚合度葡寡糖均能显著降低LPS刺激小鼠血清、肝脏中ROS水平(P<0.05),降低肝脏中NO含量、T-NOS、iNOS活性、血清中炎性细胞因子(IL-1、TNF-a)含量(P<0.05),显著提高总抗氧化能力(T-AOC)和抗氧化酶(CAT、GSH-Px)活性(P<0.05)。葡寡糖具有保护机体免受氧化损伤,减缓炎症反应的作用,并随着平均聚合度(degree ofpolymerization,DP)的增加,其调节功能逐渐增强。

色氨酸对应激小鼠抗氧化能力和免疫功能的影响

探讨色氨酸对应激小鼠5-HT及抗氧化和免疫功能的影响。将80只小鼠随机分为空白组(NC组),应激模型组(CTX组),应激模型组-低剂量色氨酸组(CTX-L组),应激模型组-高剂量色氨酸组(CTX-H组)。以腹腔注射环磷酰胺(100mg/kg·bw)3d制造应激模型,并灌胃生理盐水和色氨酸(100、200mg/kg·bw)2周。结果:与对照组相比,模型组血浆MDA无变化,组织MDA含量显著上升;血浆及组织SOD活性显著下降;脾脏GSH-Px显著下降;胸腺指数下降,脾脏指数上升;IFN-γ、IL-6含量有不同程度下降;下丘脑5-HT显著下降;与模型组相比,CTX-L组可显著降低组织MDA含量,CTX-L、CTX-H组血浆SOD活性部分恢复,但对组织SOD无作用;CTX-L及CTX-H组均能显著提高血浆GSH-Px,显著降低心肌的GSH-Px,而对脾脏GSH-Px不显著;CTX-H组可显著提高IFN-γ、IL-6含量;CTX-L,CTX-H组下丘脑5-HT含量显著上升。结论:Trp有助于提高小鼠血浆和组织的抗氧化水平,且在一定程度上增强了机体免疫功能。

血管紧张素转化酶抑制肽的设计与抗酶解研究

设计了血管紧张素转换酶抑制肽(angiotensin converting enzyme inhibitory peptides,ACE抑制肽),并对设计的ACE抑制肽进行抗酶解研究。选取静电荷和疏水性这两个重要的结构参数,设计了一系列的ACE抑制肽。采用反相高效液相色谱(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HPLC)来检测37℃下胃蛋白酶和胰蛋白酶对ACE抑制肽的酶解后的保留量,以研究静电荷和疏水性与肽的抗酶解之间的关系。结果表明,肽中疏水性氨基酸含量及蛋白质的平均疏水性均与ACE抑制肽的抗酶解活性呈正相关,而静电荷对ACE抑制肽抗酶解的影响较小。

褪黑素对小鼠抗氧化作用的影响

目的:研究小鼠在受到脂多糖(LPS)刺激时,褪黑素的抗氧化作用,并探讨其可能机制。方法:用脂多糖建立氧化应激模型,检测血清、小肠、肝脏和脾组织中的ROS含量,肝脏、脾组织中的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的变化。结果:在LPS刺激后的4h和16h,褪黑素均能降低血清、小肠、肝脏、脾组织中的ROS含量,提升肝脏和脾组织中的GSH-PX、SOD活性,降低MDA含量。结论:褪黑素有助于增强氧化应激小鼠的抗氧化能力,降低组织中NO含量与NO合成酶活性,增加了SOD、GSH-PX等抗氧化酶的活性,保护机体免受氧化损伤。

植物甾醇对肉鸡肠道氧化还原状态的影响

目的:研究植物甾醇(phytosterols)对肉鸡肠道氧化还原状态的影响。方法:选用105只1日龄雄性罗斯肉鸡(44g)随机分为对照组(基础日粮)和实验组(在基础日粮中分别添加0.015‰、0.020‰、0.025‰的低羟基值植物甾醇和0.025‰、0.050‰、0.075‰的高羟基值植物甾醇),共7个处理组,每组3个重复,每个重复5只鸡。结果:与对照组相比,0.015‰、0.050‰和0.075‰植物甾醇添加组使肉鸡回肠总抗氧化能力(T-AOC)提高。各植物甾醇添加组使反映机体氧化还原状态的还原型与氧化型的谷胱甘肽的比值(GSH/GSSG)显著升高(p<0.05),使肉鸡十二指肠、空肠脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的水平降低但不显著。结论:植物甾醇能通过清除自由基、恢复氧化还原平衡、解除慢性氧化应激,从而保护机体免受氧化损伤。

猪骨胶原蛋白肽缓解高脂饮食诱导小鼠肝脏氧化应激的基因芯片分析

本研究探讨猪骨胶原蛋白肽降血脂作用和抑制高脂饮食诱导肝脏抗氧化应激的作用机理。40只小鼠分为5组,分别饲喂6 w正常日粮、高脂日粮、添加1.6%钙的高脂日粮、添加1%胶原蛋白肽的高脂日粮和添加1.6%钙+1%胶原蛋白肽的高脂日粮。研究发现:与正常组相比,高脂日粮小鼠血脂和体重明显升高。1.6%钙处理可抑制体重过度升高,1%胶原蛋白肽和高钙可协同抑制调节血脂,防止体重升高。高脂主要通过影响肝脏生理节律和过氧化物酶体增生物激活受体信号通路引起脂代谢异常,高钙和骨胶原蛋白肽可显著抑制肝脏氧化应激,抑制生理节律紊乱。

蛋氨酸羟基类似物对肉鸡肠道氧化还原状态的影响

目的:研究蛋氨酸(DLM)、蛋氨酸羟基类似物(HMTBA)及其钙盐(HMTBA-Ca)对肉鸡肠道氧化还原状态的影响。方法:1日龄罗斯肉鸡(44g)随机分为对照组(基础日粮)和实验组(在基础日粮中分别添加0.1%和0.2%的DLM、HMTBA及HMTBA-Ca),共7个处理组。结果:与对照组相比,0.1%HMTBA组和0.1%HMTBA-Ca组可显著降低全血ROS水平,提高肠道GSH/GSSG和T-AOC,降低血浆及组织MDA含量。0.2%HMTBA组和0.2%HMTBA-Ca组可显著提高血浆和组织CAT活性。基础日粮中添加HMTBA和HMTBA-Ca均可使肠绒毛高度升高、隐窝深度下降、V/C升高。此外,0.1%HMTBA组和0.1%HMTBA-Ca组ROS水平及MDA含量均低于0.1%DLM组,肠绒毛高度和V/C则高于0.1%DLM组。结论:与DLM相比,HMTBA及HMTBA-Ca能更好地提高肠道抗氧化能力,降低ROS水平,维持肠道氧化还原稳态,促进肠道健康发育。

马鹿茸血疏水性肽的分离及组分3的免疫活性

采用大孔吸附树脂和凝胶色谱等方法,从马鹿茸血蛋白酶解产物中分离纯化获得免疫活性肽。通过体外试验研究其免疫活性。结果表明:大孔吸附树脂可依据氨基酸的疏水性对肽段进行分离,经梯度洗脱后,其中用75%乙醇洗脱所得的组分促脾淋巴细胞增殖活性最高。纯化所得的产物中组分3具有较高的DPPH自由基清除能力,可刺激白介素-1的分泌、促进巨噬细胞的吞噬活性。

干燥方法对乳蛋白氧化及机体氧化还原状态的影响

目的:研究乳蛋白经过干燥后,乳蛋白氧化及对机体氧化还原状态的影响。方法:通过不同进风温度(160、170、180℃)对全脂乳和脱脂乳进行喷雾干燥及全脂乳的冷冻干燥处理,测定其羰基、巯基含量。小鼠分为6组,分别灌胃原奶、喷雾干燥不同温度乳粉、脱脂乳粉及冷冻干燥乳粉,测定0、30、60、90、120min血液中自由基水平,测定60、90min后小鼠肝脏、空肠、十二指肠、胃组织抗氧化能力指标(丙二醛MDA、总抗氧化能力T-AOC、GSH/GSSG)。结果:乳蛋白经过喷雾干燥及冷冻干燥处理后,羰基含量随温度的上升及脂肪含量的增多显著上升(p<0.05),巯基含量呈下降趋势。冷冻干燥组羰基含量比全脂喷雾干燥组低,巯基与之相比呈上升趋势。小鼠血液自由基的最高峰出现在灌胃90min时,灌胃喷雾干燥乳粉自由基含量显著高于其他组(p<0.05),并随温度的升高而增高。小鼠喷雾干燥组中组织总抗氧化能力T-AOC和谷胱甘肽比值GSH/GSSG均低于其他各组,丙二醛(MDA)含量高于别组。结论:喷雾干燥等加工方法会导致乳蛋白发生不同程度的氧化,导致乳蛋白理化性质的变化,短期灌胃氧化蛋白会引起机体的氧化应激,降低组织抗氧化的防御能力。

白藜芦醇对高脂饲养小鼠脂肪组织氧化还原状态及血脂的影响

本研究旨在探索白藜芦醇(RSV)对不同程度肥胖小鼠脂肪氧化应激状态和血脂的影响。高脂日粮(HFD)处理12周的昆明小鼠分为3类:肥胖抵抗(DIO-R)、中体重(Med)和肥胖(DIO),分别饲喂HFD、HFD+0.3 g/kg RSV和HFD+0.6 g/kg RSV日粮18周,并以正常日粮小鼠为对照。结果表明,0.6 g/kg RSV处理可显著降低DIO小鼠体重、腹脂率,显著提高脂肪组织抗氧化能力,改善血脂。0.3 g/kg RSV处理对DIO-R小鼠也有类似趋势,但0.6 g/kg RSV处理引起DIO-R小鼠脂肪组织抗氧化能力下降、血脂紊乱。总之,RSV在不同程度肥胖小鼠具有剂量特异性的氧化应激调控作用。

微波辅助合成半乳聚糖及其结构分析

目的:研究半乳聚糖的快速、高效制备方法,并对产物进行结构分析。方法:在微波辐照下,以半乳糖为底物,氯化钠溶液为引发剂,杂多酸为反应催化剂,催化底物脱水缩合生成半乳聚糖,并通过乙醇沉淀去除催化剂和引发剂,Sephadex G-25葡聚糖凝胶柱分级纯化,高效凝胶渗透色谱分析半乳聚糖的纯度及聚合度,高效阴离子交换色谱分析单糖组成,最后通过红外光谱分析半乳聚糖的构型。结果:半乳聚糖的最优合成条件为引发剂浓度0.25 mol/L、催化剂添加量1.1%、反应温度130℃、微波辐照4.5 min,半乳糖转化率为97.22%。半乳聚糖的平均分子质量为2.853 k D,平均聚合度为17。单糖组成为半乳糖及微量葡萄糖。红外光谱及氢核磁共振波谱(1H-nuclear magnetic resonance,1H-NMR)分析表明半乳聚糖残基以β-构型为主。结论:可以通过微波辐照杂多酸催化的方法快速、高效制备半乳聚糖。

蛋氨酸羟基类似物钙盐缓解肉仔鸡的热应激作用

比较研究DL-蛋氨酸(DLM)和蛋氨酸羟基类似物钙盐(HMTBA-Ca)对肉仔鸡32℃下的抗热应激作用。252只1日龄雄性罗斯肉鸡(约49 g)随机分成6组,分别饲喂添加0.1%DLM、0.2%DLM、0.3%DLM、0.1%HMTB-Ca、0.2%HMTB-Ca、0.3%HMTB-Ca的日粮,每组3个重复。结果表明,日粮中添加0.3%HMTB-Ca的肉鸡终末体质量和平均日增质量显著高于0.3%DLM组;添加0.2%HMTB-Ca和0.3%HMTB-Ca的腿肌质量和胸肌质量显著高于相应剂量的DLM组;添加0.3%HMTB-Ca的处理组与其他5组相比全血自由基(ROS)含量显著降低;添加0.3%HMTB-Ca的处理组较0.3%DLM组肌肉、十二指肠中还原型谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽的比率(GSH/GSSG)显著提高,血浆、肝脏、肌肉、十二指肠、回肠中过氧化氢酶(CAT)活力显著提高;添加0.3%HMTB-Ca组较0.3%DLM组血浆和肌肉的总抗氧化能力(T-AOC)显著提高。以上结果显示,HMTB-Ca相对于DLM能够改善肉仔鸡在热应激条件下的平均日采食量、平均日增质量、料重比和胴体品质,促进肌肉生长;HMTB-Ca可在一定程度上更好地缓解氧化应激,降低机体自由基水平,保证机体氧化还原状态的平衡。

三种重要甘露糖衍生物的合成方法改进及微波辅助合成

对1,2,3,4,6-五-O-乙酰基-β-D-甘露糖、2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-溴-α-D-甘露糖、3,4,6-三-O-乙酰基-1,2-O-烯丙氧基亚乙基-β-D-甘露糖这三种重要的甘露糖衍生物现有合成方法改进。同时首次通过微波辅助的方法合成了这三种产物,并在单因素实验的基础上,采用正交实验优化最佳合成工艺。结果表明微波辅助条件下,这三种物质的最佳合成工艺分别为:微波功率800W、反应时间20min、反应温度70℃、甘露糖与乙酸酐摩尔比1∶11;微波功率400W、反应时间50min、反应温度25℃、乙酸酐与溴化氢乙酸溶液体积比1∶3;微波功率500W、反应时间40min、反应温度30℃、2,6-二甲基吡啶与2,3,4,6-四-O-乙酰基-1-溴-α-D-甘露糖摩尔比1∶1。

奥曲肽对高脂诱导不同程度肥胖小鼠自由基和血糖的影响

目的:研究奥曲肽对高脂诱导不同程度肥胖小鼠自由基(ROS)和血糖(BG)的影响。方法:雄性C57BL/6小鼠80只,分为正常(control)、高脂(HFD)两组,饲喂5w后将HFD组分为肥胖(Obesity,OB)、高脂中体重(Middle Weight,MW)、肥胖抵抗(Obesity Resistance,OR)三组,每组各取8只分别腹腔注射奥曲肽(OCT,20μg/kg)和0.9%生理盐水0.1mL,注射10min后小鼠断尾取血测ROS和BG。小鼠称重后处死,取腹部脂肪称重并计算腹脂率。结果:饲喂5w后,与正常组相比,OB组小鼠体重显著增加,OR组显著降低(p<0.05),OB、MW、OR组小鼠腹脂重、腹脂率均显著增加(p<0.05);OR组小鼠血ROS与正常组相比显著升高(p<0.05),注射OCT之后,各组小鼠血ROS与注射NS相比均有所降低(p>0.05);OR、MW、OB组小鼠BG与正常组相比显著升高(p<0.05),注射OCT之后,OB、MW、OR组小鼠BG与注射NS相比均显著下降(p<0.05)。结论:饲喂5w的高脂饲料后小鼠出现了肥胖和肥胖抵抗,血ROS升高,其中肥胖抵抗组ROS显著升高,BG显著升高,OCT通过降低血ROS水平而显著降低高脂饲养组小鼠BG。

蛋白质氧化及其对机体氧化还原状态的影响

蛋白质的氧化会造成其结构、理化性质、功能性质发生变化。食物蛋白质氧化在加工贮藏过程中普遍存在,其对机体氧化还原状态造成的影响引起越来越多的关注。本文就蛋白质的氧化机制、氧化后发生的主要转变及食物蛋白质氧化对生物体细胞、体内外消化、体内氧化还原状态的研究进行阐述,旨在进一步探究氧化蛋白质的吸收机理及其对生物体的作用和影响。

低聚糖对乳酸菌抗氧化胁迫能力的影响

目的:研究GOS(低聚半乳糖)和XOS(低聚木糖)对乳酸菌(L.bulgaricus Fn009)耐H2O2胁迫能力的影响。方法:利用H2O2建立氧化应激模型,以MTT法(四甲基偶氮唑盐比色法)检测GOS和XOS对乳酸菌存活率影响,以流式细胞技术检测GOS和XOS对乳菌细胞膜完整性的影响,并测定GOS和XOS对乳酸菌抗氧化酶活力和应激蛋白基因表达水平的影响。结果:H2O2胁迫条件下,GOS和XOS干预组乳酸菌存活率提高了1.83～1.96倍,细胞膜完整率分别提高了17%和13%,T-SOD和GSH-Px酶活力均显著上升(p<0.05),Dnak、GroEL和Gsp65应激蛋白基因的表达水平显著下调(p<0.05)。结论:GOS和XOS能够提高乳酸菌自身的抗氧化活力,降低H2O2胁迫对菌体细胞膜的损伤程度,增强乳酸菌对氧化胁迫的抗性。

单糖构成及比例变化对低聚糖清除自由基及促进肠道乳杆菌增殖的影响

目的:研究单糖构成种类及单糖比例变化对低聚糖功能的影响。方法:以人体结肠内菌群为研究对象,采用荧光原位杂交(FISH-FC)技术,研究低聚糖单糖构成种类及单糖比例变化对促进肠道乳杆菌增殖及提高短链脂肪酸含量的影响。结果:DPPH自由基清除实验表明,低聚糖对自由基的清除能力随着单糖构成种类的增加而提高;而低聚糖构成中半乳糖比例的增加,使低聚糖对DPPH自由基的清除能力提高。乳杆菌增殖实验表明,单糖构成种类的增加显著提高低聚糖促进乳杆菌的增殖(p<0.05)。短链脂肪酸含量测定显示,低聚糖单糖构成种类增加,发酵液中乙酸、丙酸、丁酸含量显著提高(p<0.05),而半乳糖比例增加,发酵液中乙酸、丁酸含量显著提高(p<0.05);丙酸含量也提高,但差异不显著(p>0.05)。结论:低聚糖单糖构成种类增加及半乳糖比例提高有助于增强低聚糖的抗氧化性;低聚糖单糖构成种类增加,乳杆菌群增殖,短链脂肪酸含量提高,半乳糖比例的提高增强了短链脂肪酸中乙酸、丙酸含量。