鸡贫血病毒vp3基因的克隆及其体外凋亡诱导效应的研究

用 PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的 vp3基因 ,并将其克隆于真核表达载体 pc DNA3上 ,构建了重组体pc DNA- vp3。经酶切鉴定及测序分析表明 ,该片段和预期相符。在体外利用 L ipofect AMINETM介导的基因转染 ,将 pc D-NA- vp3、 pc DNA3分别转入肝癌细胞系 Hep G2和二倍体肝细胞系 L- 0 2中 ,转染后的 RT- PCR结果证实 vp3基因在细胞中得到了表达。同时利用筛选稳定表达细胞株的技术和原位细胞凋亡检测法 ,证明了鸡贫血病毒是以凋亡的方式诱导细胞死亡 ,并且只诱导癌细胞的凋亡 ,而不诱导正常或二倍体细胞死亡。表明鸡贫血病毒

鸡贫血病毒VP3基因的克隆及在H22细胞中的凋亡诱导状况

目的 :观察CAV、VP3基因在H2 2细胞中的凋亡诱导情况。方法 :用PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的VP3基因 ,并将其克隆于真核表达载体pcDNA3上 ,构建含VP3基因的重组体 ;在体外 ,利用LipofectAMINETM 介导的基因转染法 ,将pcDNA VP3、pcDNA3分别转入小鼠腹水型肝癌细胞系H2 2中 ,RT PCR法检测VP3基因在细胞中的表达状况。同时利用流式细胞检测术验证VP3基因诱导死亡的方式。结果 :酶切鉴定及测序分析表明 ,插入片段和预期相符 ,阳性重组体被命名为pcDNA VP3;RT PCR结果表明 ,转染后 ,VP3基因在细胞中得到了表达 ;同时DNA直方图也证实鸡贫血病毒的VP3基因确以凋亡的方式诱导细胞死亡。