重组质粒pGEM-HERV-K gag的构建与鉴定

目的:构建pGEM-HERV-K gag重组质粒。方法:分离人外周血单核细胞,提取总RNA,逆转录得到cDNA,PCR扩增目的基因后回收并纯化目的基因,TA基因克隆方法构建重组质粒,并采用酶切和PCR进行鉴定。结果:以PBMC的cDNA为模板,PCR扩增获得446 bp的HERV-K gag目的基因,克隆到pGEM-T载体构建pGEM-HERV-K gag重组质粒,酶切及PCR结果证实重组质粒构建成功。结论:成功构建pGEM-HERV-K gag质粒,此方法可用于比较病人与健康人的gag基因的序列。