磷脂酰肌醇蛋白多糖-3对Hippo信号通路的调控机制及其对肝癌Huh7细胞生物学行为的影响

目的探讨磷脂酰肌醇蛋白多糖-3(GPC3)对Hippo信号通路的调控机制及其对人肝癌Huh7细胞生物学行为的影响。方法分别构建4种靶向GPC3和YAP1基因的sh RNA序列,然后转染入肝癌Huh7细胞,并筛选稳定表达的细胞株。采用荧光定量PCR法和蛋白印迹法检测转染后的Huh7细胞中GPC3和YAP1的表达,以筛选有效沉默GPC3和YAP1的sh RNA。观察沉默GPC3和YAP1以及人重组YAP1(rh YAP1)对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。GPC3 sh RNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、GPC3-714-sh RNA组、GPC3-647-sh RNA组、GPC3-1718-sh RNA组、GPC3-2134-sh RNA组。YAP1 sh RNA转染实验分为6组:未转染组、空载体组、YAP1-906-sh RNA组、YAP1-1363-sh RNA组、YAP1-1666-sh RNA组、YAP1-2895-sh RNA组。GPC3对YAP1的调控实验分为5组:未转染组、空载体组、GPC3-1718-sh RNA组、GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组、YAP1-1666-sh RNA组。结果 1成功构建了可有效沉默GPC3和YAP1表达的GPC3-1718-sh RNA和YAP1-1666-sh RNA质粒。2 GPC3sh RNA各转染组细胞中GPC3 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P<0.05)和空载体组(P<0.05),而GPC3-1718-sh RNA组又明显低于其他转染组(P<0.05)。YAP1 sh RNA各转染组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P<0.05)和空载体组(P<0.05),而YAP1-1666-sh RNA组又明显低于其他转染组(P<0.05)。3 GPC3-1718-sh RNA组和YAP1-1666-sh RNA组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达均明显低于未转染组(P<0.05)和空载体组(P<0.05);而GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组细胞中YAP1 m RNA和蛋白表达明显高于GPC3-1718-sh RNA组(P<0.05)和YAP1-1666-sh RNA组(P<0.05)。4与未转染组和空载体组比较,GPC3-1718-sh RNA组和YAP1-1666-sh RNA组的细胞增殖和侵袭能力明显降低(P<0.05),细胞凋亡明显增加(P<0.05);而GPC3-1718-sh RNA+rh YAP1组细胞增殖、侵袭和凋亡均得到明显改善(P<0.05)。结论 GPC3很有可能通过对Hippo信号通路YAP1的调控,实现其对人肝癌细胞Huh7生物学行为的影响。