低氧微环境对脑胶质瘤细胞增殖、凋亡及HIF-1α表达的影响

目的观察低氧微环境对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响;探索不同时间梯度和细胞密度在低氧微环境下对HIF-1α表达的影响。方法(1)构建脑胶质瘤细胞(T98G)生长的缺氧微环境,将细胞设为低氧组(1%氧气含量)和常氧组(21%氧气含量),在不同氧浓度下培养4~72 h后观察细胞生长情况;利用western blot印迹法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达情况;(2)将低氧组T98G细胞设计为四组不同细胞密度,在1%O2的低氧浓度下培养24 h,通过Western blot检测四组细胞HIF-1α表达情况。结果(1)倒置显微镜和Hoechest染色均未见低氧组和常氧组细胞发生明显的细胞凋亡,MTT法检测二组细胞均呈增殖状态。与常氧组相比,低氧组细胞HIF-1α蛋白明显高表达(P<0.001)。低氧组细胞在4、6、12、24 h(<24 h)HIF-1α蛋白表达量快速升高(P<0.05),24、48、72 h(>24 h)HIF-1α蛋白表达量逐渐下降;(2)低氧微环境下四组不同细胞密度中,24 h后高密度组(8.5万个细胞/cm^2)细胞的HIF-1α表达最高,细胞的过高密度或过低密度生长都会导致HIF-1α表达降低(P<0.05)。结论低氧微环境(1%O2)不能诱导T98G胶质瘤细胞发生凋亡;在低氧微环境(1%O2)中,T98G细胞HIF-1α的蛋白表达不是恒定不变的,其表达量会随时间和细胞密度的变化而变化。低氧处理的T98G细胞24 h内HIF-1α蛋白表达量快速升高,24 h后逐渐降低。在缺氧环境下T98G细胞汇合度过高或过低均会降低HIF-1α的表达,在95%左右时其表达最高。