免疫衰老及其免疫学预警指标

增龄导致胸腺萎缩,成为免疫衰老的直接原因。免疫衰老是免疫系统全方位多系统的并由基因严格控制的循序渐进的自然过程,在这一过程中,免疫系统发生了许多明显的变化,细胞免疫、体液免疫以及天然免疫均有不同程度的改变。免疫学预警指标(immunologicalriskphenotypes,IRP),不仅可以评价机体的免疫状态,而且可以提前预知疾病的发生,为免疫干预提供客观数据。

GD患者外周血CD4^+CD28-T细胞亚群的表型特征及临床意义

检测Graves病(GD)患者外周血CD4^+CD28-T细胞水平及其表面CD45RO/CD45RA及ICOS的表达,探讨CD4^+ CD28-T细胞亚群在GD免疫致病机制中的作用。采用三色荧光抗体染色及流式细胞术检测了42例初发GD患者和30例健康者外周血中CD4^+CD28-T细胞的百分率及其表面CD45RO/CD45RA和ICOS表达水平,同时检测其甲状腺功能并进行相关性分析。结果GD患者外周血中CD4^+CD28-T细胞百分率明显高于健康对照组,并高表达ICOS分子,与FT3水平显著正相关;与健康对照组相比,GD患者CD4^+CD28^-CD45RO^+T细胞百分率也显著增高,而CD4^+CD28^-CD45RA^+T细胞呈下降趋势,FT3、FT4水平与CD4^+CD28-T细胞表面CD45RO的表达率呈正相关,而FT3水平与CD45RA表达呈负相关。结论GD患者外周血CD4^+CD28^-T细胞异常增高,表面高表达ICOS分子,具有记忆性细胞的表型特征,与甲状腺功能异常有一定的相关性,CD4^+CD28-T细胞可能是参与GD免疫病理反应的自身反应性T细胞。

凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗治疗肺癌的实验研究

目的用凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞(dendritic cells,DCs)激发肿瘤抗原特异性的细胞毒T细胞(cytotoxic Tlymphocytes,CTL)活性,观察其体内外抗肺癌的特性。方法常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs,采用或不采用凋亡肿瘤细胞负载DCs,并利用激发型CD40单克隆抗体(CD40mAb)诱导DCs成熟;成熟DCs与自体T细胞共育,分别获得Ag-CTL及non-Ag-CTL,流式细胞仪检测Ag-CTL细胞表型的变化;3H-TdR掺入法测定DNA片段形成率;建立人肺癌细胞株A549荷瘤裸鼠模型,过继回输Ag-CTL和non-Ag-CTL,评价其在体内的抗肿瘤活性。结果CD40mAb激发可使DCs上调CD1a、CD80、CD86、CD83、HLR-DR的表达;凋亡肿瘤细胞负载联合CD40mAb激发可进一步促进DCs的成熟;成熟DCs和自体的T细胞共育活化后CD8+T细胞明显上调;Ag-CTL对A549具有高效特异的杀伤力,明显强于Ag-CTL对肝癌细胞株HepG2的作用(P<0.01),且Ag-CTL对A549的杀伤力明显强于non-Ag-CTL(P<0.01),而non-Ag-CTL对A549及HepG2细胞的杀伤力无显著性差异;体内实验表明,Ag-CTL可有效抑制裸鼠皮下移植瘤的生长,与生理盐水组(NS组)、non-Ag-CTL组相比在统计学意义上有显著差异(P<0.05),non-Ag-CTL组与NS组相比在统计学意义上有差异(P<0.05)。结论凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞疫苗激发的Ag-CTL在体内外均呈现抑制肺癌细胞的特性。

可溶性B7-H3(sB7-H3)在急性白血病中的检测及临床意义

目的:检测sB7-H3在急性白血病病人脑脊液中的不同表达,以及分析该分子的表达与急性白血病的亚型的相关性。方法:采用ELISA的方法来检测sB7-H3在176位白血病病人脑脊液中的表达。依据国际公认的FAB(French-Amer-ican-British)分类系统将急性白血病病人分型。结果:sB7-H3在急性淋系白血病与急性髓系白血病中的表达差异显著(P=0.0381),这与人白血病细胞株的检测结果一致;在急性淋系白血病的亚型中,sB7-H3的表达没有显著性差异;在急性髓系白血病的亚型中,sB7-H3的表达在M3与M5和M4与M5之间存在显著性差异(分别为P=0.024 3和P=0.022 3)。结论:sB7-H3的表达与白血病的分型具有一定的相关性,同时也进一步证实B7-H3参与了人体免疫平衡的调节,可能会为今后急性白血病的临床诊断提供依据。

协同刺激分子B7-H3在非小细胞型肺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨非小细胞型肺癌组织中协同刺激分子B7-H3的表达及其与患者的病理参数、预后及CD3+T淋巴细胞的浸润程度的相关性。方法:收集2005年1月至2005年9月在苏州大学附属第四人民医院行手术切除术的非小细胞型肺癌患者组织标本87例,免疫组织化学的方法检测非小细胞型肺癌中协同刺激分子B7-H3的表达和CD3+T淋巴细胞的浸润程度。结果:协同刺激分子B7-H3在非小细胞型肺癌组织中高表达,该分子的表达与患者的年龄、性别、淋巴结的转移情况、肿瘤的大小、病理分型无相关性(P>0.05),但与患者的生存期呈负相关。且该分子在肺癌中的表达水平与浸润的T细胞呈负相关。结论:协同刺激分子B7-H3的表达在非小细胞型肺癌组织中诊断和预后判断中具有潜在的临床应用价值。

老年原发性非小细胞肺癌患者外周血T淋巴细胞Fas/FasL的表达及临床意义

目的探讨T细胞表面凋亡分子Fas及其配体与老年原发性非小细胞肺癌(NSCLC)发生发展之间的联系。方法应用五色免疫荧光标记流式细胞术对63例老年NSCLC患者外周血T细胞表面Fas及FasL的表达进行检测,并与老年良性病变组(老年非癌组)、老年健康组以及年轻健康组进行比较,同时分析它们与临床病理特征之间的关系。结果Fas及FasL在老年健康组外周血T细胞上的表达明显高于年轻健康组(P<0.01);两者在老年非癌组中表达与老年健康组比较无统计学意义;Fas在老年肺癌组中表达显著高于老年健康组及老年非癌组(P<0.01),而FasL在老年肺癌组中表达与老年健康组及老年非癌组比较无统计学意义;T细胞Fas的表达水平与老年肺癌的临床TNM分期、细胞分化程度以及淋巴结转移状态密切相关(P<0.05或P<0.01),而与病理类型无关。结论呈增龄性上调的T细胞表面Fas抗原在老年人原发性肺癌的形成和演变过程中发挥着重要作用。

共刺激分子在小鼠叶酸性肾病组织中的表达及其免疫病理意义

观察共刺激分子在小鼠叶酸性肾病组织中的动态表达并分析叶酸肾病的免疫病理的可能机制。以小鼠叶酸性肾病为研究对象,采用免疫组织化学方法检测肾脏组织中CD40/CD40L、B7-1/CD28和4-1BB等共刺激分子的表达,免疫荧光标记和流式细胞术分析脾脏T淋巴细胞及其亚群,并行肾功能等常规检测。实验结果表明,病变先后涉及两个时期即急性期和慢性期。在早期,小鼠免疫应答增强,肾脏组织呈现CD40、B7-1、4-1BB的异常表达,CD28、CD40L在浸润淋巴细胞中表达,同时伴有炎症细胞浸润,表现为急性肾功能衰竭;在晚期,表现为慢性肾功能衰竭。同时肾脏组织呈现共刺激分子的异常表达和脾脏T淋巴细胞数量明显下降。这些均表明共刺激分子在小鼠叶酸性肾病不同阶段的发生发展中起着重要的作用。

ICOS/GL50信号在T细胞依赖性体液免疫应答中的作用

研究ICOS/GL5 0信号在T细胞体外增殖、细胞因子分泌以及B细胞抗体分泌中的作用 ,进一步探讨该信号途径在机体体液免疫应答中的作用机制。采用3 H TdR检测GL5 0 L92 9转染细胞和特异性鼠抗人GL5 0单抗对T细胞体外增殖的作用 ;ELISA法检测GL5 0 L92 9转染细胞和抗人GL5 0单抗对T细胞分泌IL 2、IL 10以及ICOS L92 9转染细胞和特异性鼠抗人GL5 0单抗对PWM介导的B细胞分泌抗体的效应。结果提示GL5 0 L92 9转染细胞能够促进经抗CD3单抗活化的T细胞增值和分泌IL 10 ,而抗GL5 0单抗可以阻断这些效应。ICOS分子与B细胞上GL5 0分子的结合上调PWM介导的B细胞分泌抗体而抗GL5 0单抗则下调这一效应。这些表明 ,ICOS/GL5

B7-H6 mRNA在结肠癌中的表达和临床意义

目的探讨B7-H6 mRNA在结肠癌中的表达水平和临床意义。方法以65例结肠癌组织和15例癌旁组织为研究对象,使用q PCR检测B7-H6 mRNA表达水平,并结合临床资料,利用卡方检验分析B7-H6 mRNA表达水平与病理参数的相关性。采用Kaplan-Meier法(生存期分析)比较不同B7-H6 mRNA表达水平和患者预后的关系。结果通过确切概率法发现,不同B7-H6 mRNA表达水平的癌组织具有不同的肿瘤浸润程度,差异具有统计学意义(P=0.042),B7-H6 mRNA高表达组更倾向于外膜外浸润,而低表达组则倾向于深肌层浸润。而不同的B7-H6 mRNA表达水平与其他的病理参数(性别、年龄、肿瘤外形、病理类型、N分期以及临床分期)指标之间则差异无统计学意义(P值均>0.05)。生存期分析发现,与B7-H6 mRNA低表达组相比,B7-H6 mRNA高表达组结肠癌患者预后生存期显著降低,差异具有统计学意义(P=0.008)。结论高表达B7-H6 mRNA的患者的肿瘤更易于浸润到外膜外并累及其他组织器官,且高表达水平的患者更倾向于预后不良。

B7-H5在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的研究乳腺癌中B7-H5的表达及其临床意义。方法收集2020年6月至2021年4月苏州大学附属第一医院48例乳腺癌患者的癌组织、正常乳腺组织及血液标本,进行流式细胞学分析B7-H5表达。整理并分析了相关临床数据及病理特征。使用Kaplan-Meier绘图仪数据库,对B7-H5不同表达程度的乳腺癌患者进行预后分析。结果乳腺癌组织中的B7-H5表达高于正常乳腺组织(P<0.001);B7-H5的表达与患者淋巴结转移情况及乳腺癌TNM分期呈负相关。Kaplan-Meier绘图仪数据库分析显示,B7-H5 mRNA高表达乳腺癌患者的生存率高于低表达者(P=0.019);B7-H5高表达组的根治性治疗到复发的时间(RFS)明显高于低表达组(P<0.001)。结论B7-H5在乳腺癌组织中显著高表达,其与乳腺癌患者疾病预后相关,B7-H5高表达预示着较好的预后及生存期。

1型糖尿病患者的B细胞及B细胞亚群中程序性死亡受体配体1的表达

目的探讨1型糖尿病(T1DM)患者循环B细胞中程序性死亡受体配体1(PD-L1)的表达情况。方法采集健康对照者(n=25)和T1DM患者(n=25)的外周血标本。流式细胞术检测B细胞及其表面PD-L1的表达。结果T1DM患者B细胞亚群频率与健康对照者比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与健康对照者相比,T1DM患者CD19^(+)细胞、CD19^(+)CD27^(+)细胞和CD19^(+)CD27^(+)细胞上PD-L1的表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。健康对照者与T1DM患者的PD-L1在B10细胞、边缘区B细胞(MZB)和滤泡B细胞(FoB)上的表达比较,差异无统计学意义(P>0.05)。T1DM患者的PD-L1在过渡性T2-边缘区前体B细胞(T2-MZP)上的表达低于健康对照者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论PD-L1在T1DM发病中可能起保护作用。PD-L1高表达的B细胞可能为自身免疫性糖尿病患者的治疗提供新策略。

血清超敏C反应蛋白和前白蛋白在老年COPD患者中的变化

目的探讨血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)、前清蛋白(PA)水平在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者、老年慢性阻塞性肺疾病急性发作期(AECOPD)患者中的变化及与预后的关系。方法分别检测健康老年组(年龄≥60岁)、老年COPD稳定期组、老年AECOPD死亡组、老年AECOPD存活组患者血清hs-CRP、PA水平的变化,将检测结果进行组间对照研究。结果老年AECOPD组、老年COPD稳定期组hs-CRP均明显高于老年健康组(P<0.05);老年AECOPD组hs-CRP明显高于老年COPD稳定期组(P<0.05);老年AECOPD死亡组hs-CRP明显高于老年AECOPD存活组(P<0.05)。而PA水平与hs-CRP呈负相关,在各组间比较也均具有统计学差异。结论 hs-CRP及PA可能参与老年COPD的发病过程,并在AECOPD发生、发展中起重要作用,hs-CRP、PA可作为评估AECOPD病情及预后的指标。

可溶性B7-H4在食管癌患者血清中的表达分析

目的分析评价血清中可溶性B7-H4(soluble B7-H4,sB7-H4)在食管癌患者血清中的表达及其诊断价值。方法采用ELLISA法检测分析46例食管癌患者和35例健康对照者血清中sB7-H4含量,利用受试者工作特性曲线(ROC),根据曲线下面积(AUC)分析sB7-H4作为食管癌诊断标记分子的诊断价值。同时检测上述标本中CEA的含量,将两者的诊断效率进行比较。结果与健康对照相者比,食管癌患者血清中sB7-H4显著升高(P<0.001),其在食管癌诊断中的灵敏度(93%)和准确性(87%)均高于CEA。结论sB7-H4是一个有临床应用前景的食管癌诊断血清标记分子。

人B7-H3基因转染及其生物学功能的研究

B7 H3是新近发现的B7家族新成员。为探讨其体外生物学功能及单克隆抗体的研制构建了B7 H3基因转染细胞。利用PCR的方法扩增出B7 H3基因 ,继而插入逆转录病毒载体pGEZ Term ,重组逆转录病毒载体与两个辅助病毒载体脂质体法共转染包装细胞 2 93T ,经用含有完整病毒颗粒的 2 93T细胞的培养上清感染L92 9细胞 ,Zeocin筛选获得B7 H3的基因转染细胞。RT PCR、Westernblot和流式细胞仪表型分析等方法鉴定表明 ,B7 H3/L92 9基因转染细胞能稳定表达人B7 H3蛋白。继而基因转染细胞对T细胞体外培养试验显示该基因转染细胞与T细胞共培养可抑制其体外增殖。ELISA法分析表明该基因转染细胞抑制活化T细胞IFN γ及IL 10的分泌。CD2 8信号可以逆转B7 H3对活化T细胞的抑制效应。综上结果证实 ,B7 H3对体外活化的T细胞具有负性调控作用。

聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林对慢性丙型肝炎患者疗效的观察

目的探讨聚乙二醇干扰素α-2a(派罗欣)联合利巴韦林对慢性丙型肝炎(CHC)的治疗效果。方法43例CHC患者均接受派罗欣(180μg/周)联合利巴韦林(900 mg/d)治疗,疗程6个月。于治疗前、后分别检测其HCV基因型、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及HCV RNA量。结果43例CHC患者中只检出了两种基因型,以HCV-Ⅰ型为主(38例,占88.3%),HCV-Ⅱ型少见(5例,占11.7%)。43例CHC患者中,除1例治疗12周无效停药外,其他患者HCV RNA均转阴。5例HCV-Ⅱ型患者中4例(80.0%)为完全应答,1例(20.0%)无应答;38例HCV-Ⅰ患者中,30例(81.6%)患者为完全应答,6例(15.8%)部分应答,2例(5.3%)无应答。低水平组完全应答率较高(90%)、高水平组完全应答率较低(54.5%),两组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论对CHC治疗,早期、及时地应用干扰素可取得较好的疗效。

4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用

目的研究4-1BBL分子在人急性单核细胞白血病细胞系U937和SHI-1的表达及促生长作用。方法用流式细胞术(FCM)和RT-PCR法检测4-1BBL分子在U937、SHI-1细胞系的表达;将激发型4-1BBL单抗(1F1)与U937、SHI-1细胞系分别进行培养,细胞计数分析2个细胞系的生长情况;收集U937细胞的培养上清,ELISA法检测细胞因子。结果FCM测得U937和SHI-1细胞有4-1BBL分子表达,RT-PCR法测得4-1BBLmRNA;细胞计数表明,1F1明显促U937、SHI-1细胞系生长(P<0·01);ELISA示1F1与U937细胞共培养48h,其上清液中IL-6含量(55·91±10·23)pg/ml,显著高于IgG1同型对照组的(12·14±3·8)pg/ml(P<0·01)。结论U937和SHI-1细胞系组成性表达4-1BBL分子;1F1与U937、SHI-1细胞的4-1BBL分子交联后,可促进U937、SHI-1细胞系生长,诱导U937细胞分泌细胞因子IL-6。

小鼠角膜碱烧伤后前炎性因子、趋化因子及其受体的表达

目的检测前炎性因子、趋化因子及其受体在小鼠角膜碱烧伤后表达的动态变化。方法建立小鼠碱烧伤模型,用RT-PCR法检测角膜碱烧伤后不同时间点前炎性因子、趋化因子及其受体mRNA的表达。结果RT-PCR检测显示,角膜碱烧伤后角膜组织中前炎性因子IL-1α、IL-1β及IL-6表达增强;调控单核细胞迁移的CCR1-CCL2、CCL3、CCL4、CCR2-CCL2以及调控中性粒细胞迁移的CXCR2-CXCL2表达增强。结论角膜碱烧伤后前炎性因子以及参与调控白细胞迁移的趋化因子及其受体明显上调,提示其参与角膜碱烧伤后白细胞向局部的迁移。

CD40配基化对肺癌细胞肿瘤坏死因子受体及其相关因子表达的影响

目的 探讨CD40配基化(CD40 ligation)对肺癌细胞株NCI-H460、A549、SPC-A-1的增殖以及对细胞肿瘤坏死因子受体(TNFR)和肿瘤坏死因子受体相关因子(TRAF)表达谱的影响。方法 采用四氮唑盐(MTT)比色法检测CD40配体(CD40 ligand,CD40L)对肺癌细胞增殖的影响,免疫荧光标记和流式细胞术测定细胞表面CD40的表达以及CD40配基化后细胞TNFR和TRAF表达的改变。结果(1)肺癌细胞株NCI-H460、A549和SPC-A-1表面CD40表达分别为(89.2±3.2)％、(42.2±4.5)％、(2.3±0.3)％。(2)CD40配基化后能显著抑制NCI-H460、A549细胞的增殖(P<0.05),而不抑制SPC-A-1的增殖(P>0.05)。(3)CD40配基化可上调NCI-H460、A549细胞TNFRⅠ的表达,下调TNFRⅡ的表达(P<0.05),而不影响SPC-A-1细胞TNFR的表达。(4)CD40配基化可下调NCI-H460、A549细胞中TRAF2、3、5、6的表达(P<0.05),而不影响SPC-A-1中TRAFs的表达。结论 CD40配基化可抑制CD40表达阳性细胞株NCI-H460、A549细胞的增殖,并可引起细胞TNFR、TRAF表达谱的改变,提示CD40信号对CD40表达阳性的肺癌细胞生物学行为具有重要调节作用。

CD 40激发肿瘤抗原特异性DCs对CIK细胞生物学活性的影响

目的:研究CD40激发凋亡肿瘤细胞致敏的树突状细胞(dendritic cells,DCs)对细胞因子诱导杀伤(cytokine-inducedkiller,CIK)细胞的细胞表型、增殖活性及细胞毒活性的影响。方法:常规方法从健康人外周血单个核细胞中诱导DCs和CIK细胞,采用凋亡肿瘤细胞负载DCs,并用或不用激发型CD40单克隆抗体(CD40mAb)激活DCs成熟;成熟DCs与同源的CIK细胞共育5d,分别获得DC40Ag-CIK细胞及DCAg-CIK细胞;观察细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞表型;酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assays,ELISA)法检测细胞培养上清液中IFN-γ的含量;[3H]-TdR掺入法测定细胞杀伤活性。结果:凋亡肿瘤细胞负载激发可使DCs上调表达CD1a、CD80、CD86、CD83、HLR-DR,联合CD40mAb激发可进一步促进DCs成熟;培养至第14天时,DC40Ag-CIK细胞、DCAg-CIK细胞、CIK细胞分别扩增(18.2±1.7)倍、(15.0±1.2)倍、(9.3±1.8)倍;DC40Ag-CIK细胞中的CD3+CD56+比例较DCAg-CIK细胞和CIK细胞明显上调(P<0.05);DC40Ag-CIK细胞、DCAg-CIK细胞对A549杀伤活性强于CIK细胞(P<0.05),并且DC40Ag-CIK细胞强于DCAg-CIK细胞(P<0.05);CIK细胞、DCAg-CIK细胞、DC40Ag-CIK细胞培养上清液中IFN-γ的含量递增,分别为(1494.7±246.3)pg/mL、(2706.3±197.0)pg/mL、(3676.3±335.0)pg/mL。结论:与单独凋亡肿瘤细胞负载的DCs相比,CD40激发的凋亡肿瘤细胞负载的DCs可进一步提高CIK细胞的增殖活性及细胞毒活性。