水稻黑条矮缩病毒RT-LAMP快速检测方法的建立

【目的】建立一种快速、灵敏的逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)检测寄主植物和传毒介体体内的水稻黑条矮缩病毒(Rice black-streaked dwarf virus,RBSDV)。【方法】合成4条针对RBSDV S10核苷酸序列6个位点的特异性引物。分别对引物浓度、MgSO4浓度、反应温度和时间进行优化。将感病水稻总RNA梯度稀释后进行灵敏性检验并与RT-PCR比较分析。选择RBSDV和南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)验证该方法的特异性。用本RT-LAMP方法检测田间病株。【结果】RT-LAMP检测方法可排除SRBSDV的干扰而特异地检测植物和飞虱体内的RBSDV,与RT-PCR灵敏性基本一致。检测结果易于判定。【结论】RT-LAMP检测方法适合寄主植物和介体体内RBSDV的快速检测。

酵母双杂交筛选灰飞虱体内水稻黑条矮缩病毒p10的互作蛋白

为获取灰飞虱体内传播RBSDV相关介体因子,以RBSDV编码的外层外壳蛋白p10为诱饵,采用酵母双杂交方法从灰飞虱cDNA文库中筛选与RBSDV p10互作的蛋白。将RBSDVp10基因构建至pGBKT7载体获得诱饵表达载体pGBKT7-p10。自激活实验结果表明,p10蛋白对酵母细胞无毒性,也不具有自激活活性。通过pGADT7-cDNA文库质粒转化含有pGBKT7-p10的酵母AH109筛选获得灰飞虱cDNA文库中与p10互作的蛋白。文库筛选共获得326个阳性克隆。测序结果表明这些阳性克隆编码14种不同的互作蛋白,包括Actin 1,GAPDH,RACK等。这些互作蛋白参与胞吞胞吐作用和膜融合等过程,可能与病毒在介体内的循回和增殖相关。

灰飞虱从离体病叶快速获得水稻条纹病毒的方法

水稻条纹病毒（Rice stripe virus,RSV）引起的条纹叶枯病是水稻的重要病害之一,目前已广泛分布于中国17个省（市）,给水稻生产带来巨大的经济损失[1-2].RSV隶属纤细病毒属（Tenuivirus）,在田间存在着广泛的寄主,不仅能侵染水稻,还能侵染大麦、小麦、看麦娘等80多种禾本科作物和杂草[3].大多数植物病毒依靠昆虫作为介体进行传播,进而造成某种病害的大面积流行,所以要控制植物病毒病,必须切断昆虫传毒[4].RSV主要由介体灰飞虱[Laodelphax striatellus Fall＆#233;n（Small brown planthopper,SBPH）]以循回增殖方式传播,灰飞虱一旦获毒便可终生带毒并经卵持久性传毒[5].