医药类高职院校生物化学实验教学改革实践与思考

生物化学是医学类课程中一门重要的基础学科。生物化学实验是医药类高职院校各专业的必修课。当今生物化学实验不断翻新,教学改革迫在眉睫。针对当前高职院校生化实验基本情况,结合江苏医药职业学院的生物化学实验教学的改革情况,从所需物资设备、完善规章制度、实训内容安排等方面总结和提出相应的改革措施,以及具体问题和意见,可为同类院校生化实验教学改革提供借鉴。

乳腺癌中DEAH盒解旋酶16的表达及临床意义

目的揭示乳腺癌组织中DEAH盒解旋酶16 (DHX16)基因表达变化及其与乳腺癌患者预后的关系。方法利用c BioPortal分析DHX16基因突变、拷贝数变化、mRNA表达变化、m RNA差异表达与预后的关系,DHX16基因甲基化水平与其mRNA水平的关系。利用UALCAN数据平台分析乳腺癌组织与正常乳腺组织中DHX16基因的差异表达。利用LinkedOmics分析乳腺癌组织中DHX16表达与临床指标的相关性,DHX16基因拷贝数变化与mRNA水平的关系。结果 cBioPortal结果显示,16%(170/1 093)的乳腺癌患者发生了DHX16基因改变,包括基因突变、拷贝数变化、mRNA水平改变,其中DHX16 mRNA水平上调(超过对照组平均值2倍)的患者比例为12%,且DHX16高表达不利于患者预后(P <0.01);DHX16 mRNA表达水平与其基因甲基化水平呈负相关(r=-0.32,P <0.05)。UALCAN结果显示,乳腺癌组织中DHX16基因表达水平显著高于正常乳腺组织(P <0.001)。Linked Omics结果显示,乳腺癌患者中DHX16表达水平分别受PAM50分子分型、种族、病理分期、T分期和M分期影响(均P <0.05);DHX16 mRNA表达水平与其基因拷贝数变化呈正相关(r=0.56,P <0.01)。结论乳腺癌中DHX16基因拷贝数增加和低甲基化促进其高表达,DHX16高表达不利于预后,可作为乳腺癌预后的潜在标志物。

LSM3基因表达与卵巢癌细胞生长及预后关联性分析

目的探究LSM3基因表达变化与卵巢癌细胞生长及患者预后的关联性,寻找新的潜在标志物和治疗靶点。方法通过TCGA、GTEx、GEO等数据库分析LSM3基因在卵巢癌等组织中的差异表达及其预后关系;利用全基因组CRISPR-Cas9敲除文库筛选数据分析LSM3基因对卵巢癌细胞生长的影响;通过DepMap门户网站泛癌分析LSM3基因敲除或敲低对肿瘤细胞系生长的影响。组间比较采用t检验和Wilcoxon秩和非参数检验,生存期分析采用Kaplan-Meier法进行曲线描述并行Logrank检验。结果LSM3基因在卵巢癌(Z=-8.35,P<0.001)、胰腺癌(Z=-8.79,P<0.001)、胃腺癌(Z=-9.56,P<0.001)、淋巴样肿瘤弥漫性大b细胞淋巴瘤(Z=-6.23,P<0.001)和多形性成胶质细胞瘤(Z=-9.51,P<0.001)中高表达。LSM3基因高表达不仅与卵巢癌患者总体生存不良相关联(χ^2=11.84,P<0.001),还与无复发生存不良相关联(χ^2=10.23,P=0.005);LSM3基因敲除或敲低可以抑制ES-2、JHOS-4、OVCAR-8等卵巢癌细胞系的生长,还可以抑制多种其他癌症细胞系的生长。结论卵巢癌中LSM3基因高表达,促进卵巢癌细胞生长且与患者不良预后相关联,有望成为新的卵巢癌潜在预后标志物和治疗靶点。

Has-miR-9-5p对乳腺癌潜在不良预后标志物FAF2表达的影响

目的旨在探讨乳腺癌中FAS相关因子家族成员2(FAF2)基因表达与患者预后关联性以及has-miR-9-5p对FAF2基因表达的直接调控作用。方法基于肿瘤基因组图谱(TCGA)和基因表达综合数据库(GEO)数据分析并验证FAF2基因高表达与乳腺癌患者预后关联性;高表达has-miR-9-5p后,RT-qPCR和蛋白质印迹法检测FAF2表达变化;通过双荧光素酶报告系统验证has-miR-9-5p对FAF2的靶向抑制作用。利用GraphPad 7.0对数据进行统计学分析。结果 DNA芯片数据分析显示FAF2基因高表达与乳腺癌患者预后不良有关联(HR=1.44,95%CI为1.31~1.59,P<0.001),RNA测序数据分析也显示FAF2基因高表达与乳腺癌患者预后不良有关联(HR=1.40,95%CI为1.13~1.75,P=0.002);细胞转染实验中,has-miR-9-5p高表达组FAF2mRNA水平(0.25±0.08)较对照组(1.07±0.04)下降,差异有统计学意义,t=16.02,P<0.001,高表达组蛋白水平(0.19±0.02)较对照组(0.32±0.06)亦下降,差异有统计学意义,t=3.83,P=0.019。双荧光素酶报告实验中,转染FAF2野生型WT-pmiRGLO质粒后,hsa-miR-9-5p高表达组荧光相对强度(0.32±0.09)较对照组(1.22±0.09)降低,差异有统计学意义,t=12.03,P<0.001;转染FAF2突变型MT-pmiRGLO质粒后,hsa-miR-9-5p高表达组荧光相对强度(1.25±0.05)与对照组(1.14±0.08)比较,差异无统计学意义,t=0.76,P=0.489。结论乳腺癌中has-miR-9-5p可靶向抑制潜在预后不良标志物FAF2基因的表达。