虫草素通过调节CD4^+T淋巴细胞PD-1受体促进肿瘤免疫及机制研究

目的探讨虫草素体外对肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞肿瘤杀伤作用及其内在机制。方法通过移植瘤分离得到肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞,运用MTS法研究虫草素对肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞增殖作用的影响,运用LDH法研究虫草素处理后的肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞对于其共孵育肿瘤细胞的杀伤作用,运用ELISA法对CD4^+T淋巴细胞与肿瘤细胞共孵育后的细胞上清中的细胞因子进行检测,同时运用Western blot法对虫草素处理后的CD4^+T淋巴细胞中的相关蛋白进行研究。结果虫草素能够促进肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞的增殖和杀伤作用且呈现出一定的剂量依赖性,虫草素能够降低肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞的PD-1蛋白表达,增强PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达且促进IL-2、IFN-γ的表达。结论虫草素能够促进肿瘤相关CD4^+T淋巴细胞的增殖和杀伤作用,其机制可能与抑制肿瘤免疫检查点PD-1有关。

银杏叶功效群组分及其功效的研究进展

该文综述银杏叶提取物中4种主要功效群,介绍银杏黄酮、银杏内酯、原花青素和有机酸等主要功效成分,并对银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,EGB)其功效组分在其抗氧化、抗疲劳、降血脂、降血压,预防和治疗抗肿瘤、改善老年人记忆力和心血管类疾病等方面的辅助治疗和保健功效方面进行综述,展望银杏叶提取物的开发和应用前景.

柚皮素通过激活凋亡信号抑制肝星状细胞活化

目的研究柚皮素对肝星状细胞活化的体外抑制作用及可能机制。方法以人正常肝细胞LO2为参照,在MTT法筛选药物干预浓度的基础上,考察柚皮素(Western blot实验和台盼蓝染色实验浓度为10、20、40μmol/L,免疫荧光实验浓度为40μmol/L)对人肝星状细胞LX2肝纤维化标志物蛋白[胶原纤维Ⅰ(collagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]及mRNA(collagenⅠ前体α1-pro collagenⅠ、α-SMA)表达、细胞凋亡及凋亡相关蛋白[Bcl-2、Bax、剪切的胱天蛋白酶3(cleaved caspase-3)]表达的影响;选择凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK,FMK)、铁死亡通路抑制剂ferrostatin-1、程序性死亡通路抑制剂necrostatin-1对上述作用机制进行验证。结果柚皮素可显著下调LX2细胞中collagenⅠ(柚皮素10μmol/L除外)、α-SMA蛋白及α1-pro collagenⅠ(柚皮素10μmol/L除外)、α-SMA mRNA的表达(P<0.05),可诱导LX2细胞凋亡并提高其凋亡比例,可显著下调Bcl-2蛋白的表达并上调Bax(柚皮素10μmol/L除外)、cleaved caspase-3(柚皮素10μmol/L除外)蛋白的表达;FMK可逆转柚皮素对LX2细胞的上述作用(P<0.05)。结论柚皮素可通过激活肝星状细胞LX2的凋亡信号来抑制其活化,从而发挥对肝纤维化的改善作用。

去氧地胆草素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移和糖酵解的影响

目的研究去氧地胆草素对肝癌HepG2细胞增殖、迁移及糖酵解的影响。方法用不同剂量去氧地胆草素分别处理HepG2细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,划痕和Transwell小室实验检测细胞迁移情况,试剂盒检测细胞葡萄糖摄取、乳酸生成水平及关键酶HK2、PFK1、PKM2活性,RT-qPCR法检测关键酶mRNA表达,Western blot法检测关键酶及相关信号通路的蛋白表达。结果去氧地胆草素浓度为5、2.5μmol/L时,分别在24、48 h抑制HepG2细胞增殖和迁移(P<0.05),10μmol/L时能抑制细胞迁移,5~20μmol/L时对细胞葡萄糖的摄取减少(P<0.05),10~20μmol/L时减少乳酸生成(P<0.05),5~20μmol/L时降低糖酵解关键酶HK2、PFK1、PKM2活性(P<0.05),5~20μmol/L时抑制关键酶HK2、PFK1、PKM2 mRNA及蛋白表达,同时也抑制了PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路的活化。结论去氧地胆草素能够抑制HepG2细胞增殖和迁移,降低HepG2细胞的糖酵解水平,可能与抑制PI3K/Akt/mTOR/HIF-1α信号通路活化有关。

银杏叶中总黄酮、总内酯同步提取工艺的优化

目的优化银杏叶中总黄酮、总内酯同步提取工艺。方法在单因素试验基础上,以提取时间、料液比、乙醇体积分数、提取时间为影响因素,总黄酮、总内酯含有量为评价指标,正交试验优化提取工艺。结果最佳条件为提取时间为1.5 h,料液比1∶25,乙醇体积分数60%,提取次数1次,总黄酮、总内酯质量分数分别为0.561%、0.315%。结论该方法稳定可行,可为工业化提取、分离、纯化银杏叶功效成分提供思路。

环黄芪醇对四氯化碳致小鼠肝纤维化及糖酵解的影响

目的研究环黄芪醇(CAG)对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化(HF)及糖酵解的影响。方法将雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组和CAG低、中、高剂量组(60、120、240 mg/kg),每组6只。除空白组小鼠腹腔注射橄榄油外,其余各组小鼠均腹腔注射10%CCl4-橄榄油溶液(5 mL/kg),每周3次,持续8周以复制HF模型。自造模第4周起,各药物组小鼠灌胃相应药液(10 mL/kg),空白组和模型组小鼠灌胃0.5%羧甲基纤维素钠溶液(10 mL/kg),每天1次,持续4周。实验过程中,称定小鼠的体质量;末次灌胃后,称定小鼠的肝脏质量并计算其肝脏指数,检测其肝损伤指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)]、HF相关指标[苏木精-伊红(HE)染色评分、Masson和天狼星红染色胶原容积分数、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)]和糖酵解相关指标[乳酸(LD)、己糖激酶(HK)、磷酸果糖激酶(PFK)、丙酮酸激酶(PK)]的变化情况。结果与模型组比较,各药物组小鼠胶原沉积和纤维化病变程度均有所减轻,体质量(CAG低剂量组除外)均有所升高(P<0.05),肝脏指数,血清ALT、AST水平,肝组织病理学HE染色评分、Masson和天狼星红染色胶原容积分数,collagenⅠ、α-SMA蛋白的表达水平,血清LD含量,以及血清、肝组织中HK、PFK、PK水平(CAG低剂量组肝组织除外)均显著降低(P<0.05)。结论CAG对CCl4诱导的小鼠HF有改善作用,同时降低了其体内糖酵解关键酶和产物水平。

PAICS基因促进乳腺癌细胞生长及其可能分子机制

目的:揭示PAICS基因对乳腺癌细胞生长的促进作用及其可能分子机制。方法:利用癌症多组学和临床数据库LinkedOmics平台访问TCGA数据库,分析PAICS基因表达水平与乳腺癌临床特征之间的关联性,利用癌症细胞生长依赖基因数据库DepMap分析PAICS基因敲除对乳腺癌细胞系生长的影响。通过信号通路KEGG和基因本体GO分析PAICS基因促癌功能的可能分子机制。结果:PAICS基因表达与乳腺癌患者的肿瘤纯度、分子亚型、组织学类型和总生存率等临床指标相关联,敲除PAICS基因可显著抑制乳腺癌细胞MCF7、CLA-51、MDA-MB-415的增殖。GO分析表明PAICS共表达基因参细胞分裂,DNA复制启动,ATP结合等多种生物过程,KEGG富集结果显示PAICS可能通过调节细胞周期、P53信号通路、RNA聚合酶、同源重组等生物学过程促进乳腺癌细胞增殖。结论:PAICS基因可促进乳腺癌细胞MCF7、CLA-51、MDA-MB-415的增殖,可能成为乳腺癌新的潜在治疗靶点。