干扰ski基因对视网膜色素上皮细胞增生和周期的影响

目的观察siRNA干扰c—ski对视网膜色素上皮（RPE）细胞增生和周期的影响。方法RPE细胞分为3组：空白对照组（转染时加脂质体）、阴性对照组（无关序列非特异性siRNA转染）和ski—siRNA转染组，另设阳性对照转染组（采用B—actinsiRNA转染）。采用蛋白电泳检测转染24h和48h时的c．ski和CyclinD1蛋白表达变化；比色法检测转染1、2、3、4d时细胞的增生速率；流式细胞术检测转染24h和48h细胞周期的变化。结果与空白对照组和阴性对照组相比，siRNA转染hRPE细胞增生在各个时间点均受到明显抑制（P〈0．05）；3组间RPE细胞c—ski和CyclinD1蛋白表达比较，差异有统计学意义（P〈0．05），与空白对照组和阴性对照组相比，c—skisiRNA转染组c—ski、CyclinD1蛋白表达下降（P〈0．05）。各组GO／G1、S和G2／M期RPE细胞比例比较，差异有统计学意义（P〈0．01），c-skisiRNA组GO／G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组siRNA组（P〈0．05），S期细胞比例低于空白对照组和阴性对照组siRNA组（P〈0．05）。结论c—ski基因干扰可以有效地抑制RPE细胞增生，该分子机制可能是抑制RPE细胞G1期的调节子cyclinD，造成G0／G1期阻滞，不能进入S期。