针对NFAT信号途径的新型免疫抑制剂

免疫抑制剂cyclosporin A和FK-506通过抑制依赖钙调蛋白的磷酸酶calcineurin(CaN)的活性,阻断了活化T细胞核因子(NFAT)的活化,最终抑制了机体的免疫应答.然而,这种直接对CaN酶活性的破坏,使得这类药物具有严重的临床毒副作用.随着对NFAT调节机制的研究深入,近年来,人们运用各种试验方法、手段筛选了一些天然的以及合成的抑制剂,它们针对NFAT信号通路的下游靶点发挥作用,从而选择性更强,毒性更小,为临床抗移植排斥反应、自身免疫性疾病的治疗奠定了基础.本文综述了这方面的进展,并就这些抑制剂的特点进行了简单的分析,另提出了一些新的有治疗潜力的靶点.

强力霉素调节大鼠骨髓来源树突状细胞免疫功能的初步研究

目的:探讨强力霉素(Doxycycline,Dox)对大鼠骨髓来源树突状细胞(rat bone marrow-derived dendriticcells,RBM-DCs)表型和功能的影响。方法:无菌分离SD大鼠骨髓细胞,经重组大鼠GM-CSF(recombinated rat GM-CSF,rrGM-CSF)4 ng/ml+重组大鼠IL-4(recombinated rat IL-4,rrIL-4)4 ng/ml+Dox 100 ng/ml,500 ng/ml和1 000ng/ml诱导8天,同时设立rrGM-CSF 4 ng/ml+rrIL-4 4 ng/ml为对照组。于激光共聚焦显微镜下观察Dox对RBM-DCs形态学变化的影响;采用流式细胞仪分析RBM-DCs表面标志的变化;最后用同种异体混合淋巴反应检测RBM-DCs对同种异体T淋巴细胞的刺激能力。结果:激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞形态未发现各组与对照组之间有明显差别;流式细胞术分析表明:不同剂量的Dox均可下调未成熟RBM-DCs表面CD11c,OX62,MHC-Ⅱ,CD86和CD80分子的表达;经Dox处理的RBM-DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力下降。结论::Dox可能通过调节RBM-DCs表面分子的表达,来调节RBM-DCs的免疫功能。

核转录因子-κB信号通路的激活与阻断

核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)是广泛存在于二细胞内的一种重要的核转录因子。它参与机体的炎症反应、免疫应答、细胞凋亡及其他应激反应。NF-κB过度激活与人类许多疾病如类风湿性关节炎、肿瘤和移植排斥反应等直接相关,因此通过药物或者分子生物学方法来抑制或者阻断NF-κB信号转导途径可能会成为治疗某些疾病的重要手段。该文介绍NF-κB的生物学特性及各种阻断NF-κB活化的策略。

人GITR基因的克隆和序列分析

目的:克隆人GITR基因全长编码区的cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从正常人外周血单个核细胞获得GITR基因的cDNA,克隆至pGEM-T载体,选择阳性克隆并进行序列测定。结果:扩增得到的人GITR基因编码区cDNA的全长726 bp,编码241个氨基酸残基,与GeneBank注册的序列完全一致。结论:获得人类GITR基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

抗人DC和抗大鼠DC单抗杂交瘤的细胞特异性鉴定

目的:进一步鉴定在以往研究中所获得的抗人树突状细胞(dendritic cells,DCs)单抗和抗大鼠单抗。方法:通过对GM-CSF和IL-4诱导人外周血获得人的DC和各种来源的造血系统肿瘤细胞系的直接和间接荧光染色,采用流式细胞仪分析这些单抗所识别的表位在人DC上的表达情况以及与其他细胞表达表位的交叉情况。结果:D5B10所识别的表位仅与K562细胞有较大的交叉性,而与其他来源的白血病细胞均无明显的交叉。72%左右的人外周血成熟DC存在D5B10和H1E11识别的表位;WZD3识别的表位与人DC交叉较少,仅24.44%。三种单抗所识别的表位在MTDC上均有,大约有一半的MTDC表达三种单抗所识别的表位。结论:本实验室所制备的抗人DC单抗和抗大鼠DC单抗所识别的表位在人和小鼠间存在着交叉,这意味着这些单抗在小鼠DC的研究中也可使用。此外抗大鼠DC单抗所识别的表位与人DCs间存在着交叉。由于以往在制备抗人DCs单抗时是采用外周血分离的DCs,因此本次研究的结果也表明外周血分离的DC和由GM-CSF,IL-4诱导的DC可能在成熟程度和表达的各类分子水平存在区别。

FATE/BJ-HCC-2基因转染对肿瘤细胞生物学行为的影响

目的:观察FATE/BJ-HCC-2基因对肿瘤细胞生物学行为的影响,探讨FATE/BJ-HCC-2与肿瘤进展之间的关系。方法:将FATE/BJ-HCC-2基因转染肝癌细胞系Bel-7402细胞,3H-TdR掺入法和Transwell实验对转染细胞的增殖和侵袭能力进行检测;PCR方法检测细胞内的骨桥蛋白(OPN)和整合素连接激酶(ILK)基因的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示FATE/BJ-HCC-2转染肿瘤细胞的3H-TdR掺入值显著高于Mock细胞的掺入值,统计学分析二者差别有显著性意义(P<0.01)。FATE/BJ-HCC-2基因表达促进肝癌细胞系Bel-7402细胞的增殖,并且这种增殖效应可被特异性抗-FATE/BJ-HCC-2抗体所阻断。Transwell实验显示,转染FATE/BJ-HCC-2的细胞,其穿膜数量明显比对照组多,差别有显著的统计学意义(P<0.01)。对肿瘤细胞转移相关的细胞信号分子进行检测发现,骨桥蛋白(OPN)和整合素连接激酶(ILK)基因的表达水平上调。结论:肿瘤细胞获得FATE/BJ-HCC-2基因表达后其增殖和侵袭能力增强,FATE/BJ-HCC-2基因表达可能与肿瘤细胞的转移有一定关系。提示CT抗原的表达不仅仅是肿瘤发生中的伴随产物,它可能在肿瘤的发生发展过程中起到一定作用。

血液透析患者肝素诱导的血小板减少症发病机制及诊治研究进展

慢性肾功能不全逐渐发展进入尿毒症期后，患者肾功能衰竭的临床表现和血液生化指标异常已十分明显，而维持性血液透析（maintenance hemodialysis）是其主要的治疗方法。由于患者每次行血液透析均需使用肝素（hepafin），故肝素引起的并发症如肝素诱导的血小板减少症（heparininduced thrombocytopenia，HIT）正日益受到国内外学者高度关注。