重组葡萄糖脱氢酶基因的表达研究

目的:将重组的葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中表达,优化表达条件,以期获得较高活力的葡萄糖脱氢酶.方法:将枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶基因与表达载体pET22b连接后转化至大肠杆菌JM109(DE3)进行表达,经对发酵时间、诱导物浓度、诱导时间以及细胞破碎等条件的控制,实现葡萄糖脱氢酶的高表达.结果:重组质粒转化菌发酵2 h后进入对数生长期,诱导剂IPTG浓度为0.5 mmol/L,诱导2.5～3 h后用240 W超声破碎细胞,表达的粗提酶活力比诱导前提高了近千倍.SDS-PAGE电泳显示重组菌能表达单体分子量为31.5KD的特异性蛋白.结论:表达质粒的拷贝数、宿主菌培养条件、细胞破碎方式等均能影响酶的表达量.