CD4^+ CD25+~ Foxp3^+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达及其功能

目的探讨肿瘤患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)诱导过程中CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞的变化及其功能。方法应用血细胞分离机采集22例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),诱导培养CIK细胞,用流式细胞仪动态监测其CD4^+CD25^+Foxp3^+表型,并分析Tregs细胞负性调控分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和IL-10的表达水平,采用细胞增殖抑制试验测定Tregs细胞免疫学功能。结果诱导的CIK细胞中存在CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs,其表达量分别为第1天(0.30±0.15)%、第3天(4.48±1.72)%、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%。诱导第14天时的Tregs细胞免疫调控负性分子TGF-β1的表达水平为(97.2±2.1)%、CTLA-4为(96.2±3.5)%、IL-10为(4.2±2.3)%。细胞增殖抑制试验中空白对照组、条件对照组以及实验组的增殖细胞表达量分别为(8.55±2.38)%、(42.66±7.32)%、(57.04±7.49)%。结论 CD4^+CD25^+Foxp3^+Tregs细胞可作为潜在的CIK细胞质量评价指标。

人间充质干细胞来源外体诱导胃癌细胞恶性转化

目的探讨人间充质干细胞(MSCs)能否通过外体(exosome)促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化。方法提取不同细胞来源的exosome(HFL-ex和MSC-ex),并用可视型纳米颗粒分析仪及western blot进行鉴定;Transwell实验检测不同处理因素下对照组、HFL-ex组和MSC-ex组细胞的迁移、侵袭能力;构建免疫缺陷小鼠模型,处理7 d后分别检测对照组、5-FU组、HFL-ex组和MSC-ex组小鼠的肿瘤体积。结果可视型纳米颗粒分析仪结果表明,HFL-ex和MSC-ex的直径约为(110±49)nm,western blot证实其表面均表达CD63蛋白;Transwell实验结果表明,与HFL-ex比较,MSC-ex可促进SGC-7901细胞的迁移与侵袭(P均<0.05);荷瘤实验结果显示,MSC-ex组小鼠肿瘤体积大于5-FU组和HFL-ex组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MSCs可通过旁分泌exosome的方式促进胃癌细胞迁移、侵袭和化疗抵抗,诱导胃癌的恶性转化。

PEG诱导间充质干细胞与胃癌细胞融合的研究

目的探讨聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)1500诱导人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesechymal stem cell,huc MSC)与胃癌细胞系(HGC-27)融合的可能性及融合细胞(hybrids)的活力。方法荧光染料DIO、DID分别标记HGC-27与huc MSC;细胞计数法观察标记前后细胞增殖情况;PEG1500诱导细胞融合后,用荧光显微镜观察双色的融合细胞;CCK-8法检测融合细胞的活性;流式细胞术分析融合细胞的细胞周期。结果 DIO与DID荧光染料可分别标记HGC-27(表达绿色荧光)与huc MSC(表达红色荧光),且标记对细胞增殖无明显影响;荧光显微镜可观察到双色双核的融合细胞;流式细胞术结果表明,与HGC-27细胞相比,融合细胞活性增强,细胞周期中G1期比例降低,S期比例升高(P<0.01)。结论 PEG可诱导huc MSC与HGC-27细胞融合,且融合后的细胞表现很强的体外增殖活性。

胃癌间质干细胞活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖及迁移作用的探讨

目的探讨胃癌间质干细胞(gastric-cancer-derived mesenchymal stem cells,GC-MSCs)活化Wnt/β-catenin信号通路促进胃癌细胞增殖、迁移的作用。方法采用贴壁培养法从胃癌组织中分离GC-MSCs,成骨、成脂培养基诱导GC-MSCs分化。收集GC-MSC上清,胃癌细胞系HGC-27分别经L-DMEM培养液(Control组)、GC-MSC上清(GC-MSC组)、GC-MSC上清及20μmol/L ICG001(GC-MSC+ICG001组)处理24 h,克隆形成试验和Transwell迁移试验分别检测细胞增殖、迁移能力,免疫荧光染色或western blot检测Wnt/β-catenin信号相关蛋白(β-catenin、CD44、CyclinD3)的表达水平。结果 GC-MSC上清处理组HGC-27细胞增殖形成的克隆数[(203.700±8.762)个]显著高于Control组[(33.670±1.856)个](t=18.98,P<0.01),且其迁移细胞数[(349.700±7.881)个]较Control组[(145.000±3.712)个]亦显著增多(t=23.46,P<0.01)。GC-MSC上清可促进HGC-27细胞β-catenin入核,诱导Wnt/β-catenin信号下游蛋白CD44、CyclinD3的表达。Wnt/β-catenin信号抑制剂ICG001可下调上述分子的表达,逆转GC-MSC上清对HGC-27细胞的促增殖、促迁移作用。与GC-MSC组[(203.000±3.606)个]相比,GC-MSC+ICG001组的克隆细胞数[(70.667±2.603)个]显著减少(q=39.24,P<0.01),且迁移细胞数[(166.000±3.215)个]较GC-MSC组[(352.700±4.096)个]显著降低(q=47.73,P<0.01)。结论 GC-MSCs活化Wnt/β-catenin信号并促进胃癌细胞增殖及迁移。