CCL21通过上皮间质转化促进胰腺癌Panc-1细胞的迁移

目的研究C-C趋化因子配体21(CCL21)促进胰腺癌细胞迁移的作用机制。方法 TranswellTM检测不同浓度CCL21对胰腺癌Panc-1细胞的趋化作用;实时定量PCR检测穿梭到下室的胰腺癌细胞C-C趋化因子受体7(CCR7)mRNA的表达水平;Western blot法和免疫荧光法检测穿梭至TranswellTM下室胰腺癌细胞CD133及上皮间质转化(EMT)的特定蛋白表达。以TranswellTM小室的上室细胞作为对照组。结果在(0、50、100、200)ng/m L CCL21的趋化作用下,穿梭到下室的Panc-1细胞数分别为(13.00±3.00、78.00±9.00、161.00±11.00、281.00±17.00),四组细胞数差异具有统计学意义;随着CCL21浓度增高,穿梭到下室的细胞数增多;CCL21趋化到下室的Panc-1细胞比未穿梭的上室Panc-1细胞CCR7 mRNA的表达水平增高。穿梭到下室的Panc-1细胞CD133、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、波形蛋白(vimentin)、上皮性钙黏素(E-cadherin)蛋白相对表达量分别为(0.46±0.03、0.42±0.04、2.94±0.15、0.12±0.02),与上室细胞相比,差异均具有统计学意义。结论 CCL21对高表达CCR7的胰腺癌干细胞具有趋化作用。CCL21通过EMT及上调MMP-9促进胰腺癌干细胞的转移。

血清游离与总前列腺特异性抗原、铁蛋白、嗜铬粒蛋白A测定在良性前列腺增生和前列腺癌诊断中的价值

目的观察血清总前列腺特异性抗原(t PSA)、游离前列腺特异性抗原(f PSA)及f PSA/t PSA比值、铁蛋白及嗜铬粒蛋白(Cg)A在前列腺癌症鉴别诊断中的价值。方法采用化学发光免疫技术、放射免疫技术、酶联免疫吸附试验检测良性前列腺增生(BPH)和前列腺癌症患者的血清t PSA、f PSA,并计算f PSA/t PSA比值。结果前列腺癌组与BPH组f PSA/t PS比值、铁蛋白、Cg A水平差异显著(P<0.01)。结论运用f PSA/t PSA比值,结合t PSA、铁蛋白、Cg A水平含量,可提高前列腺癌诊断的特异性。

负载GST抗原的树突状细胞疫苗联合CpG ODN抗日本血吸虫感染的保护性研究

目的研究负载GST抗原的树突状细胞(DC)疫苗联合非甲基化胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸寡脱氧核苷酸(CpGODN)免疫小鼠抗日本血吸虫感染的作用。方法将GST抗原纯化后负载树突状细胞株DC2.4,免疫荧光染色法检测GST的负载情况,并进行动物保护性实验。35只C57BL/6小鼠随机均分7组(每组5只),分别作免疫注射:A组为未处理的DC,B组为牛血清白蛋白(BSA)处理的DC,C组为GST负载的DC,D组为GST+CpGODN共刺激的DC,E组为CpGODN刺激的DC,F组为GST蛋白,G组为空白对照组。A～E各组DC经0.25%胰蛋白酶消化后用PBS调整密度至107/ml,每鼠皮下注射0.1ml,每次间隔2周,共免疫3次。F组首次每鼠免疫50μgGST蛋白加福氏完全佐剂,第2、3次分别免疫50μg、10μgGST蛋白加福氏不完全佐剂,均为皮下注射。各组于末次免疫后10d收集血清,ELISA方法分析血清中的特异性抗体。各组小鼠于末次免疫后2周每鼠经腹部感染尾蚴30±1条。6周后剖杀小鼠,计算减虫率。结果 DC经GST负载后可在荧光显微镜下观察到抗GST的特异荧光,表明抗原已被DC摄取。各组小鼠免疫后,F组抗体水平最高,为2.1270±0.4115,另外C组(0.5552±0.0789)和D组(0.7150±0.0523)的抗体水平均高于G组(0.2358±0.0889),差异有统计学意义(P<0.05)。免疫后攻击感染,D组小鼠的减虫率最高为53.3%,其次为F组(24.0%)和C组(21.3%),但D组与两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CpGODN联合GST抗原负载的树突状细胞疫苗具有一定的抗日本血吸虫感染作用。

有氧运动对衰老模型大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

目的探讨有氧运动对衰老模型大鼠心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响。方法建立衰老大鼠模型,随机分为对照组和两组运动组,运动组分别给予6次/w、3次(隔日)/w游泳训练,每次持续90min,训练12w,于末次训练48h后处死动物,TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫印迹法检测心肌Bcl-2、Bax的表达,并计算Bax/Bcl-2的比值。结果与对照组相比,两组运动组心肌细胞凋亡指数(AI)均显著降低(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.01),Bax蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2/Bax显著升高(P<0.01);与6次/w运动组相比较,3次/w运动组心肌AI降低(P<0.05),Bcl-2升高(P<0.05),Bax降低(P<0.05),Bcl-2/Bax升高(P<0.05)。结论长期有氧运动使Bcl-2/Bax比值优化,降低心肌细胞AI,促进心肌细胞存活,延缓心肌衰老;隔日有氧运动效果更佳。

不同粒径氯化钠粉吸入疗法对哮喘小鼠肺组织炎症指标及血清中IL-4、IL-5水平的影响

目的探讨不同粒径氯化钠粉对哮喘小鼠IL-4、IL-5水平及肺组织炎症指标的影响。方法 40只BALB/c小鼠随机分成对照组、哮喘模型组、超细氯化钠粉治疗组、大粒径氯化钠粉治疗组。采用OVA致敏和激发构建哮喘模型。对照组则利用PBS致敏、OVA激发。ELISA检测小鼠血清中IL-4、IL-5水平,肺泡灌洗液(BALF)观察白细胞计数及分类,制备肺组织石蜡切片。结果模型组BALF中白细胞总数及分类比率较对照组明显增高(P<0.05,P<0.01),超细氯化钠治疗组白细胞总数及分类比率较模型组明显降低(P<0.05);模型组IL-4、IL-5水平明显高于对照组(P<0.01),超细氯化钠粉治疗组和大粒径氯化钠治疗组IL-4、IL-5水平明显低于模型组(P<0.01,P<0.05)。结论超细氯化钠粉吸入治疗哮喘小鼠可下调其血清IL-4、IL-5水平,起到抑制气道炎症、治疗哮喘的作用。

幽门螺杆菌对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响及作用

目的探讨幽门螺杆菌超声裂解液对胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因表达的影响,以及Bcl-xl基因在胃癌BGC-823细胞增殖中所起的作用。方法分别用东亚型和西方型幽门螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测胃癌BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达情况。设计特异的Bcl-xl shRNA阻断Bcl-xl基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖。结果螺杆菌超声裂解液处理胃癌BGC-823细胞24h后,与对照组相比,处理组BGC-823细胞出现增殖(P<0.01),BGC-823细胞中Bcl-xl基因mRNA水平的表达也出现上调;并且东亚型螺杆菌超声裂解液处理组的促增殖作用强于西方型处理组(P<0.01),东亚型螺杆菌超声裂解液处理组细胞中Bcl-xl基因mRNA的表达水平也高于西方型处理组(P<0.01)。Bcl-xl shRNA可以下调Bcl-xl基因mRNA及蛋白水平的表达,同时抑制胃癌BGC-823细胞的增殖。结论 Bcl-xl基因对幽门杆菌感染相关性胃癌中癌细胞的增殖起了促进作用。

纳米钛酸钙对鼠成骨细胞增殖与分化的影响

背景:以不同修饰剂制备的纳米钛酸钙具有良好的骨传导性、生物相容性及生物活性。目的:观察纳米钛酸钙材料对成骨细胞增殖、分化的影响。方法:分别以聚乙二醇、十六烷基三甲基溴化铵、柠檬酸钠为修饰剂制备纳米钛酸钙,同时制备无修饰剂的纳米钛酸钙。将制备的4组纳米钛酸钙分别配制为0.1,1.0,10 g/L的浸提液,MTT方法检测材料浸提液对乳鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性的影响,以正常培养的细胞为对照。结果与结论:以聚乙二醇、十六烷基三甲基溴化铵、柠檬酸钠为修饰剂制备的纳米钛酸钙,无修饰剂的纳米钛酸钙在1.0,10 g/L质量浓度下可明显促进成骨细胞的增殖;上述4组纳米钛酸钙浸提液在1.0,10 g/L质量浓度下,培养3,6,9 d的细胞A值也高于对照组(P<0.05,P<0.01),培养6,9 d的细胞碱性磷酸酶活性值均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。表明以聚乙二醇、十六烷基三甲基溴化铵、柠檬酸钠、无修饰剂制备的钛酸钙对成骨细胞无毒性作用,可促进成骨细胞的增殖和分化。

幽门螺杆菌上调Bcl-xL基因的表达促进胃癌BGC-823细胞的增殖

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)对胃癌细胞BGC-823 Bcl-xL基因表达的影响。方法:分别用东、西方型H.Pylori裂解液处理胃癌细胞,MTT法检测细胞增殖情况,荧光定量PCR法检测细胞Bcl-xL基因mRNA表达水平的变化;Bcl-xL短发夹RNA(short hairpin,shRNA)质粒沉默Bcl-xL基因,MTT法检测胃癌细胞增殖能力。结果:H.pylori裂解液处理胃癌细胞24h后,与对照组相比,处理组均出现细胞的增殖(P均<0.01),并且东亚型处理组的增殖作用比西方型处理组更明显(P<0.01);Bcl-xL基因的mRNA表达水平也均出现上调(P均<0.01),东亚型处理组的上调水平比西方型处理组更明显(P<0.01);Bcl-xL shRNA质粒转染胃癌细胞BGC-823后,与对照组、Bcl-xL shRNA阴性对照组相比,细胞增殖受到抑制。结论:H.pylori的生物活性物质通过上调Bcl-xL基因的表达促进胃癌细胞BGC-823的增殖,东亚型H.pylori的生物活性作用比西方型强。Bcl-xL shRNA质粒在一定程度上可抑制胃癌细胞BGC-823的增殖。

钛酸钙涂覆的纯钛片对成骨细胞生长的影响

目的探讨在不同处理条件下生成的钛酸钙(CaTiO3)涂覆的纯钛片,对成骨细胞生长的影响。方法利用不同条件下水热合成法制备CaTiO3涂覆的纯钛片,通过扫描电镜(SEM)、X射线衍射(XRD)对涂覆前后的钛片进行分析;将成骨细胞与材料共培养,利用显微镜观察法分别观察成骨细胞在不同处理材料表面的铺展状态,采用考马斯亮蓝法测定相对蛋白质含量、碱性磷酸酶(ALP)活性,并进行统计学分析。结果 CaTiO3涂覆的纯钛片的相对蛋白质含量和ALP活性,与对照组(无CaTiO3涂覆的纯钛片)比较,差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。但CaTiO3涂覆的纯钛片在120、150℃和不同时间处理后对成骨细胞ALP活性及相对蛋白质含量未见明显改变。结论成骨细胞离体条件下,在120、150℃和不同时间处理后CaTiO3涂覆的纯钛片对成骨细胞的增殖和分化有促进作用,对ALP活性和相对蛋白质含量具有增高的影响,CaTiO3涂覆的纯钛片表面更有利于成骨细胞的黏附、增殖且对成骨细胞无毒性作用。

幽门螺杆菌对人胃上皮细胞β-catenin蛋白信号途径影响意义的研究

目的:探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)裂解液对人胃上皮GES-1细胞β-catenin蛋白信号途径及其下游靶基因Cyclin D1和c-myc表达,以及对细胞增殖的影响。方法:用H.pylori超声裂解液处理GES-1,免疫荧光法和蛋白质印迹法检测β-catenin蛋白亚细胞定位以及核内蛋白表达量的变化;荧光定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,QRT-PCR)检测Wnt/β-catenin蛋白信号下游靶基因Cyclin D1和c-myc基因mRNA表达水平的变化;MTT法检测细胞的增殖。结果:H.pylori裂解液处理人胃上皮GES-1细胞后,H.pylori处理组引起了β-catenin蛋白从细胞膜至细胞质以及细胞核内的移位,呈时间依赖性。蛋白质印迹法检测结果证实,与对照组相比,H.pylori处理组在12、24h分别引起了细胞核内β-catenin蛋白表达量的增加,分别为0.31±0.05和0.55±0.04,P值均<0.01。QRT-PCR检测发现,与对照组相比,H.pylori处理组12hc-myc基因表达量没有变化,F=0.338,P>0.05;而24h的表达量明显增高,F=39.290,P<0.01;H.pylori处理组12hCyclin D1基因表达量明显增高,F=72.567,P<0.01;而24h的表达量虽然增高,但是差异无统计学意义,F=2.368,P=0.175;且明显低于12h的表达量,F=37.468,P<0.01。MTT法检测显示,5μL的H.pylori裂解液处理细胞12、24和36h的增殖抑制率分别为-13.3%、-28.5%和-62.5%;10μL的分别为-24.1%、-58.0%和-87.9%;20μL的分别为-39.8%、-131.3%和-165.2%。结论:H.pylori裂解液异常激活了β-catenin蛋白信号途径,促进β-catenin蛋白向细胞核内移位,通过上调其下游靶基因cyclin D1和c-myc的mRNA表达,促进细胞增殖,其效应呈时间以及浓度依赖。

重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30对BGC-823细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨重组苦瓜子抗HIV植物蛋白30(MAP30)对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法将BGC-823细胞分为对照组(A组)和MAP30 10、20、30、40、50、60μg/ml实验组(分别为B1、B2、B3、B4、B5、B6组)。MTT、集落形成和裸鼠致瘤实验观察细胞增殖的抑制作用,光镜、电镜、荧光染色和流式细胞术检测细胞凋亡。结果与A组相比,MAP30呈剂量依赖性地抑制BGC-823细胞增殖,IC50为51.67μg/ml。B3组光镜下细胞变圆缩小,细胞膜发泡,可见凋亡小体;电镜下细胞表面微绒毛消失,细胞核和细胞质浓缩,核膜褶皱,染色质凝集。荧光染色和流式细胞术检测显示,B3组BGC-823细胞凋亡率较A组增加(P<0.05)。结论 MAP30可抑制BGC-823细胞增殖,并可诱导其凋亡。