林可霉素对树突状细胞系DC2.4免疫功能影响的初步研究

目的:探讨林可霉素(lin)对树突状细胞(DCs)系DC2.4免疫功能的影响。方法:设立3个组:DC2.4细胞组,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin组(LPS及lin均为500 ng/mL)。在倒置显微镜下观察各实验组中DC2.4细胞的形态学变化。同时采用流式细胞仪分析DC2.4细胞表面标志MHC-Ⅱ类分子、CD86和CD80的表达。采用同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)检测各实验组中DC2.4细胞刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力。用ELISA试剂盒检测干扰素-γ(IFN-γ)水平的变化。结果:倒置显微镜下显示,DC2.4细胞组为未成熟DCs形态,DC2.4细胞+LPS组及DC2.4细胞+LPS+lin两组均为成熟DCs的形态。流式细胞术分析证实,500 ng/mL LPS可以促进DC2.4细胞表面MHC-Ⅱ类分子、CD86和CD80的表达,并增强其刺激T细胞增殖及IFN-γ的分泌。但500 ng/mL lin联合500 ng/mL LPS能够部分抑制DC2.4细胞免疫调节作用。结论:Lin可以部分抑制成熟DC2.4细胞的免疫调节功能。

Th9细胞:一种新型效应性CD4^+ T细胞亚群

长期以来,人们认为IL-9是Th2类细胞因子,作用于多种炎症细胞和组织细胞,在对抗寄生虫感染和诱导变应性疾病,尤其是过敏性哮喘中发挥着重要的作用。近来研究发现,机体内存可能在着一群新型的不同于已知的Th1、Th2及Th17的CD4+Th细胞亚群,具有分泌IL-9和IL-10的能力,有学者称之为"Th9"细胞。由于IL-9主要由Th9细胞分泌,这就需要对原本归于Th2类的生理或病理改变机制进行重新探讨,以阐明Th9细胞在细胞免疫中的作用。现就Th9细胞的生物学功能及与相关疾病的关系进行简要综述。

IL-9在变应性鼻炎患者外周血单个核细胞中的表达水平

目的:检测变应性鼻炎患者IL-9的表达水平,探讨IL-9在变应性鼻炎发生发展中的意义。方法:收集49例变应性鼻炎患者的外周血标本,其中未治疗组30例,临床缓解组19例,另取30例健康志愿者的外周血标本作为正常对照组。采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测IL-9基因在外周血中的表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血浆IL-9含量。结果:变应性鼻炎未治疗组外周血单个核细胞中IL-9 mRNA表达水平及血浆IL-9含量明显高于变应性鼻炎临床缓解组和正常对照组(P<0.05),而变应性鼻炎临床缓解组与正常对照组比较差异无统计学意义。变应性鼻炎未治疗组IL-9 mRNA表达水平与临床评分呈正相关。结论:变应性鼻炎患者外周血单个核细胞中IL-9呈高表达。IL-9可能参与了变应性鼻炎的病理过程,具体机制有待进一步探讨。

抗环瓜氨酸肽抗体、类风湿因子和白介素-17对类风湿关节炎的诊断意义

目的:研究类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide,CCP)抗体、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)和白介素-17(interleukin-17,IL-17)水平变化及临床应用价值。方法:收集80例RA患者血清,以80例健康体检者血清作对照。采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定血清抗CCP抗体,IL-17含量,特种蛋白仪检测RF含量,并进行统计分析。结果:RA患者活动期上述指标的含量均显著高于稳定期和健康对照组(P<0.01)。RA患者组三项指标的阳性率明显高于正常对照组(P<0.01)。RF诊断RA的敏感性高于抗CCP抗体及IL-17,而抗CCP抗体对RA的特异性显著高于RF及IL-17。两两联合检测及三者联合检测敏感性较单独检测都有所减低,而特异性增高明显,三者联合检测,特异性达到100%。结论:动态监测抗CCP抗体、RF和IL-17有助于观察RA病情变化,提高RA诊断率。

大肠埃希菌表达的含PTD穿膜序列的融合蛋白3种复性方法比较

目的:探索融合蛋白PTD-NFATminiDBD-eGFP纯化以及复性的条件,以提高其复性效率,为后续融合蛋白生物学功能的研究做准备。方法:表达、提取并纯化包涵体形式的融合蛋白PTD-NFATminiDBD-eGFP,分别用稀释复性、透析复性、柱上复性的方法,对融合蛋白进行复性,分析不同方法的特点及包涵体复性率,采用流式细胞术检测融合蛋白的穿膜活性。结果:3种复性方法得到的融合蛋白复性率依次为:柱上复性得率最高,其次是透析复性,稀释复性得率最低。柱上复性后蛋白的穿膜效率最高,相对较低的是稀释复性,而未复性的融合蛋白穿膜效率极低。结论:3种复性方法均能对PTD穿膜蛋白复性,但以柱上复性最佳。

丹参川芎嗪注射液对低糖低氧/复供损伤大鼠皮层神经元的保护作用

目的:通过建立新生大鼠的原代皮层神经元低糖低氧/复供损伤模型,探讨丹参川芎嗪注射液对缺血缺氧条件下神经细胞的保护作用。方法:选用新生大鼠的皮层神经元为研究对象,利用Na2S2O4与细胞共孵育造成神经细胞低糖低氧损伤,观察皮层神经元一般形态学及凋亡相关形态学的改变、检测神经元存活率、神经细胞外液乳酸脱氢酶(LDH)活性、活性氧簇活性、线粒体膜电位的变化、Caspase-3的活性以及Bcl-2、Bax的表达,并考察丹参川芎嗪对低糖低氧/复供损伤大鼠皮层神经元的作用。结果:建立了新生大鼠的原代皮层神经元低糖低氧/复供损伤模型,丹参川芎嗪注射液减轻低氧再灌注神经细胞的一般形态损伤,降低细胞内氧自由基水平和胞内LDH的释放率;提高低氧损伤的神经细胞线粒体膜电位的功能;明显抑制Caspase-3的活化,使其活性降低;显著降低Bax蛋白水平,但未改变Bcl-2蛋白的表达,进而降低Bax/Bcl-2比值。结论:在体外,丹参川芎嗪注射液在药理效应上表现出对低糖低氧/复供损伤的神经细胞的保护作用。

两种方式制备的原核表达含TAT蛋白转导域融合蛋白穿膜能力比较

目的:联合应用多种技术评价不同方式制备的TAT转导结构域-eGFP-目的蛋白的穿膜效率及亚细胞定位情况,以期建立有效、稳定的高效穿膜蛋白制备方法。方法:诱导表达、纯化包涵体形式融合蛋白,分别进行直接脱盐和透析复性,并与细胞共育,然后通过流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹法评价融合蛋白穿膜能力。结果:通过透析复性制备的融合蛋白穿膜效率极低;而纯化后直接脱盐的融合蛋白经流式细胞术、激光共聚焦显微镜及免疫印迹等方法分析,表明均具有高效穿膜能力。结论:两种方式制备的融合蛋白均能穿膜,但透析复性制备的蛋白穿膜效率低,且不易定位于细胞核中,影响进一步对该目的蛋白在胞核中生物学行为的研究;而脱盐的变性蛋白具有高效的穿膜效率。

Livin反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞增殖的影响

目的:探讨Livin基因反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)对肺腺癌A549细胞增殖的影响。方法:用阳离子脂质体介导LivinASODN转染至A549细胞,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Livin基因mRNA的表达;MTT法检测转染细胞的生长抑制情况。结果:转染ASODN后A549细胞的Livin基因mRNA的表达明显减少,Livin基因ASODN显著抑制A549细胞增殖,并呈剂量依赖性,与对照的错义寡核苷酸(missense oligodeoxynu-cleotides,MSODN)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Livin反义寡核苷酸能明显抑制A549细胞Livin基因mRNA的表达,抑制细胞增殖,Livin基因有望成为肺癌基因治疗的新靶点。

结直肠癌组织中GITRL mRNA表达水平的检测及其临床意义

目的:建立检测人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(human glucocorticoid induced tumor necrosis factor receptor ligand,hGITRL)mRNA的实时荧光PCR方法,探讨hGITRL表达与结直肠癌发生发展的关系。方法:构建含hGITRL基因片段的标准质粒,通过实时荧光PCR检测20例结直肠癌组织与对应癌旁组织中GITRLmRNA的表达水平。结果:建立的hGITRLRT-PCR基因定量检测方法准确可靠(标准曲线相关系数为0.99983);在20例结直肠癌组织细胞中,GITRL表达水平较之对应的癌旁组织有所升高(P<0.05),且与肿瘤组织分型和临床分期存在相关性。结论:成功建立了检测hGITRLmRNA的实时荧光定量PCR方法,GITRL在结直肠癌组织细胞中表达量升高,且与癌症的严重程度呈现一定的相关性。

hGITR_(aa1-165)-IgG1Fc真核表达质粒的构建及其表达

目的:构建含有人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)胞外段基因的真核表达质粒hGITRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。方法:以pGEMT-GITR质粒为模板,通过PCR扩增获得人GITR胞外段的基因hGITRaa1-165,将该目的基因连接至IgG1Fc-pcDNA3.1(+)质粒,构建hGITRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+)真核表达质粒。将该重组质粒采用脂质体法转染COS-7细胞,通过SDS-PAGE和蛋白质印迹法检测hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白在真核细胞COS-7中的表达。结果:成功构建真核表达质粒hGI-TRaa1-165-IgG1Fc-pcDNA3.1(+),并在其转染的COS-7细胞培养上清中检测到hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白的表达。结论:成功表达hGITRaa1-165-IgG1Fc融合蛋白,为进一步研究GITR的生物学功能奠定了基础。

羊瘙痒因子139A感染的小鼠脑组织中AMPK—ULKl自噬调节通路的研究

目的研究感染羊瘙痒因子139A的小鼠脑组织中自噬的活化及其机制。方法采用WesternBlot方法检测感染羊瘙痒因子139A的小鼠终末期脑组织匀浆中的AMPK、ULKl及其磷酸化水平和LC3II的表达，并对其进行定量分析。结果感染139A毒株的小鼠脑组织终末期脑组织中AMPK、ULKl及其磷酸化水平均表达升高。同时发现LC3II水平增加。结论AMPK-ULKl通路在139A感染的小鼠脑组织中活化并且有可能对自噬的激活起到了重要的作用。