T-bet、GATA3及相关因子的表达与胃癌及转移的相关性研究

目的:分析胃癌患者Th1和Th2两类细胞因子的基因表达与转录因子T-bet和GATA3表达的相关性,从细胞因子与转录因子角度考证胃癌患者Th1/Th2细胞分化趋势,探讨p53与T-bet的相关性,了解T-bet与肿瘤转移之间的关系。方法:利用荧光定量PCR技术检测55例胃癌患者及45例正常人外周血单个核细胞(PBMC)中T-bet、GATA3转录因子和IFN-γ、IL-4等细胞因子的水平,应用免疫组化法检测胃癌组织中p53的表达状况。结果:55例胃癌患者T-bet、GATA3、IFN-γ、IL-4的表达率依次为51%(28/55)、78%(43/55)、27%(15/55)、69%(38/55)。定量PCR结果显示,病人组的T-bet和IFN-γ明显低于正常对照组(P<0.01),而GATA3和IL-4则明显高于正常对照组(P<0.01)。T-bet与IFN-γ在病人体内的mRNA表达存在正相关性(P<0.01),正常人则没有。GATA3与IL-4的表达在两组中均呈明显正相关(P<0.01和P<0.05),且在p53阳性的患者中,T-bet的表达率较低,而GATA3的表达率较高。结论:胃癌患者有明显Th2漂移现象,且p53的表达与T-bet的表达呈负相关。

铜绿假单胞菌多表位核酸疫苗的构建及其生物学作用的研究

目的:构建铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)多表位-MyD88基因疫苗并对其免疫原性进行研究。方法:将PA外膜蛋白F(OprF)的三个中和性B细胞表位及一个外源通用T细胞表位串联,采用重叠PCR方法合成DNA,并在此序列前插入组织型纤溶酶原(tPA)的信号肽基因,将此获得的片段与MyD88基因分别克隆入pIRES载体构建重组质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,并将该质粒免疫Balb/c小鼠,采用ELISA法测定特异性抗体水平。气管内接种PA,进行肺组织匀浆PA细菌计数。结果:成功构建真核表达质粒pIRES-tPA-OprF:MyD88,用该质粒免疫小鼠,能刺激机体产生高度特异性抗体,气管接种PA后,免疫组小鼠肺匀浆细菌计数明显低于其他对照组。结论:成功构建了重组有MyD88基因的PA表位核酸疫苗,接种小鼠后可诱导特异性免疫应答,产生较好的抗铜绿假单胞菌感染的免疫保护作用。

二氧化氯对肉制品保鲜的研究

二氧化氯是一种有效的食品保鲜剂 ,目前在水处理、食品加工、保鲜等方面已得到广泛应用。试验研究了不同浓度二氧化氯对酱鸭的保鲜效果及其对酱鸭品质的影响。结果表明 ,酱鸭经浓度为 10 0～ 2 0 0mg/kg的二氧化氯溶液处理 2min后 ,常温下贮存 2 6～ 3 0d仍可保持较好的品质。

KLF4的生物学功能及其研究进展

Krüppel样因子(Krüppel-like factors,KLFs)家族为锌指蛋白类转录因子,是生物体内一类具有重要功能的蛋白质,参与调控细胞的增殖、分化、胚胎发育等重要生命过程,在细胞分化和细胞周期阻滞中起重要作用。KLF4又称为胃肠富集KLF(gut-enriched Krüppel-like factor,GKLF),是目前研究较多的KLFs家族成员之一。

免疫纳米荧光碳点技术快速检测乙型副伤寒沙门菌

目的建立一种以新型纳米材料——纳米荧光碳点(carbon dots,CDs)免疫示踪技术快速检测样本中细菌的方法。方法以检测乙型副伤寒沙门菌为例建立方法。用抗沙门菌Ha因子抗体耦联CDs制备成免疫纳米荧光碳点;用抗沙门菌O4因子抗体耦联磁珠粒对样本中乙型副伤寒沙门菌进行富集后,与抗Ha抗体耦联的CDs进行特异性结合,形成抗O4-磁珠粒-细菌-抗Ha-CDs"三明治"式免疫复合物;再用免疫亲和分离液移除复合物中的磁珠粒,借助荧光光谱仪测定分离液中CDs的荧光强度,推算出样品中致病菌的污染情况。结果抗Ha-CDs可有效结合抗O4-磁珠粒富集的细菌,对乙型副伤寒沙门菌的最低检测限为103CFU/mL,总时间约为2 h。结论建立的CDs技术可用于样本中乙型副伤寒沙门菌的快速检测。

重组苦瓜叶蛋白MAP30诱导人食管癌细胞株EC-1.71凋亡的实验研究

目的探讨用重组苦瓜蛋白MAP30(Momordica anti-HIV protein of 30 ku)诱导人食管癌细胞株EC-1.71细胞凋亡状况。方法 MAP30诱导EC-1.71细胞后,透射电镜观察细胞凋亡的形态特征;JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位(ΔΨm)变化;ELISA法检测细胞培养上清液中细胞色素c(Cytc)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;免疫细胞化学法检测细胞ERK1/PERK1,AKT/PAKT和NF-κB表达;荧光微板阅读仪检测细胞caspase-12活性。结果 MAP30诱导可以使EC-1.71细胞固缩,核膜扭曲,核染色质聚集成块并靠近核膜,内质网高度膨胀、扩张;ΔΨm水平下降;Cytc和TNF-α含量增加;胞质中ERK1、AKT表达增强而胞核中PERK1、PAKT表达降低,NF-κB活性降低,caspase-12活性增强。结论 MAP30可以诱导EC-1.71细胞凋亡。

鲍曼不动杆菌的耐药机制及感染防治的研究进展

鲍曼不动杆菌是一类革兰阴性、非发酵、氧化酶阴性的不动杆菌,在自然界分布广泛,在人类主要存在于皮肤表面及呼吸道,是条件致病菌,由于其环境特殊在医院尤其是ICU常呈流行性爆发,是引起医院感染的主要致病菌。近年来,随着鲍曼不动杆菌的分离率和耐药率的不断上升,且呈现多重耐药趋势,研究者及临床医师对该菌的关注越来越密切,

TLR7/8激动剂及其在肿瘤免疫治疗中的研究进展

0引言TLRs在固有免疫系统中是宿主对抗入侵病原体的第一道屏障。TLRs不但在免疫细胞上有表达,近年来发现,其在肿瘤细胞上也有不同组合的表达。肿瘤细胞上表达的TLRs对肿瘤的发展起着十分重要的作用。

HMGB1在心血管疾病中作用的研究进展

高迁移率族蛋白B1（high mobility group protein B1,HMGB1）为高迁移率族蛋白（HMG）家族成员之一,因在聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）中能够高迁移能力而得名。广泛表达于多种组织细胞,能够调节基因转录、稳固胞核结构以及释放具有炎症介质功能的核蛋白,

T-bet基因shRNA真核表达载体的构建及其功能的初步研究

目的:构建靶向Th1细胞特异性转录因子T-bet的小发卡结构RNA(shRNA)的真核表达载体,并评价其功能,为开展T-bet相关性疾病的免疫干预研究奠定基础。方法:设计并合成靶向T-bet的shRNA序列,构建真核表达载体,并转染DC2.4细胞;MTT法检测转染后DC2.4细胞增殖能力,用RealtimePCR和Westernblot分别从基因及蛋白水平检测转染前后DC2.4细胞T-bet表达水平变化;RealtimePCR检测IFN-γ的mRNA;流式细胞术(FCM)检测细胞表面CD80、CD86与MHCⅡ类分子表达情况。结果:构建的T-bet靶向shRNA真核表达载体,能够显著抑制DC2.4细胞T-bet的表达,且转染后DC2.4细胞增殖受到抑制,CD80、CD86及MHCⅡ类分子表达下调,IFN-γmRNA水平显著下降。结论:成功地构建了T-betshRNA真核表达载体,转染DC2.4细胞后能有效地抑制其T-bet、IFN-γ的表达,影响其抗原提呈功能。

肠道病毒71型多表位-mGITRL真核表达质粒的构建、表达及其免疫原性研究

目的:构建肠道病毒71型(EV71)多表位-mGITRL真核表达质粒并对其免疫原性进行研究。方法:串联已证实的VP1表位并合成(VP1’);PCR扩增获得mGITRL,克隆至真核共表达载体pIRES中。对重组质粒进行测序鉴定后,以脂质体介导法转染至COS7细胞,通过Western blot方法检测其在COS7细胞中的表达。将构建好的重组质粒免疫小鼠,应用ELISA法检测小鼠血清中抗VP1的抗体滴度。结果:PCR扩增出目的基因,测序证实真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL构建成功,Western blot结果显示目的基因在COS7细胞和肌细胞中过表达。小鼠血清中检测出高滴度的抗VP1抗体。结论:成功扩增出目的基因并构建VP1表位的重组真核共表达载体pIRES-VP1’-mGITRL,在COS7细胞和肌细胞中过表达,并获得高滴度的抗VP1抗体。

可溶性TNF-α受体I重组腺病毒治疗2型糖尿病的实验研究

目的:观察可溶性TNF-α受体Ⅰ重组腺病毒(AdsTNFRⅠ)过继阻断体内TNF-α的生物学活性,探讨其对2型糖尿病模型鼠的治疗作用。方法:利用高脂饮食结合链脲佐菌素(STZ)诱导2型糖尿病小鼠模型,观察其TNF-α的表达。在进行可溶性TNF-α受体Ⅰ重组腺病毒过继治疗后,检测治疗前后模型鼠外周空腹血糖的变化,并在蛋白水平与mRNA水平分析外周血及脂肪组织中TNF-α与sTNFR-Ⅰ的表达。结果:该2型糖尿病小鼠模型外周血及脂肪组织中高表达TNF-α。AdsTNFRⅠ过继治疗后,肝组织及外周血中可检测到sTNFRⅠ的表达,并可降低外周血中TNF-α及空腹血糖水平。但AdsTNFRⅠ的治疗不能降低脂肪组织中TNF-α的mRNA表达。结论:AdsTNFRⅠ可中和2型糖尿病模型鼠外周血中的TNF-α水平,并降低其空腹血糖水平,有一定的治疗作用。

T-bet的研究进展

自2000年T-bet被发现后,有关其基础及临床研究均取得了一定进展,从T-bet的产生细胞、诱导表达及其调控,到T-bet介导IFN-γ的基因转录和对Th1细胞分化的影响,以及T-bet在Th1/Th2漂移性疾病中的作用都进行了研究,现就其进展情况作一综述。

磁珠捕获技术在定量液相杂交中的应用

目的 :在建立新的微生物DNA液相定量杂交法的基础上 ,检测了 10株临床分离菌间染色体DNA的杂交率并与固相板法进行比较 ,为该法的推广应用奠定了基础。方法 :根据SYBRGreen1能够特异性结合双股DNA的特性 ,借助链霉亲和素包被磁珠的分离技术和偏振荧光探测方法的敏感性 ,分别捕获和检测游离于杂交液中两种DNA形成的杂交体 ,计算两者间的同源性。结果 :本法测得的 5株肠杆菌科标准菌株和临床分离株种间或科 /属间的杂交率与发表值一致。提示该法可用于各种细菌间的同源性测定 ,且结果稳定、可靠。结论 :偏振荧光法定量测定细菌染色体的同源性 ,具有简便、快速、敏感、特异等优点 ,可以避免微孔板定量杂交法中因DNA脱板所造成的误差 ,便于临床推广应用。

T-bet对肺癌细胞系(Lewis细胞)致瘤作用的体内干预研究

目的:探讨T-bet质粒局部应用对小鼠肺癌细胞皮下移植瘤的干预作用。方法:将传代培养的Lewis肺癌细胞接种于小鼠右肩部皮下,制备荷瘤小鼠模型;瘤内分别注射PIRES-eGFP/mT-bet(m指小鼠)、PIRES-eGFP质粒和PBS,观察各组小鼠存活时间,肿瘤体积的变化;HE染色观察肿瘤组织的病理变化;Western blot检测肿瘤组织T-bet的表达,QRT-PCR检测肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平。结果:瘤内注射T-bet质粒载体后Western blot检测发现,肿瘤组织T-bet蛋白表达显著高于对照组;QRT-PCR结果显示,肿瘤组织T-bet和IFN-γ的mRNA水平呈上升趋势,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。T-bet质粒干预组小鼠肿瘤生长明显缓慢,存活期延长。HE染色组织病理观察可见mT-bet干预组小鼠局部组织淋巴细胞大量浸润。结论:T-bet基因局部注射可延缓小鼠肺癌Lewis皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答能力,增强对已发肿瘤的生长限制作用,为T-bet应用于肿瘤治疗积累试验数据。

转录因子Hlx修饰树突状细胞系DC2.4的功能研究

目的:在鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时表达Th1特异的核转录Hlx,探讨该转录因子对树突状细胞系DC2.4的功能的影响。方法:含有Hlx基因全部编码序列的真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx通过脂质体转染的方法转入DC细胞,转染效率应用FACS鉴定;Hlx基因在DC中表达情况应用RT-PCR和Real-time PCR检测。转染48 h后,分别从细胞因子,表面分子,吞噬功能,单向混合淋巴细胞反应方面对DC功能进行探讨。结果:真核表达载体PIRES2-EGFP/Hlx成功转入DC细胞,转染率可高达60%;在树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可以有效的增进成熟标志CD80,CD86,MHCII分子的表达,减弱DC的吞噬功能,IL-12表达量增加,但同时却高表达IL-10,TGF-β并表现为可抑制淋巴细胞增殖。结论:在小鼠树突状细胞系DC2.4中瞬时高表达Hlx可有效地促进DC2.4的成熟,但是在功能方面多表现为调节性DC的功能。

长链非编码RNA(lncRNA)与类风湿性关节炎关系的研究进展

长链非编码RNA(lncRNA)是一类长度大于200个核苷酸,能够与DNA、RNA和蛋白结合,其中少量具有蛋白编码潜能。lncRNA的生物学功能多种多样,其在人类疾病发生,特别是在调控免疫应答发生、活化和维持免疫系统自身稳态的过程中扮演的重要角色引起众多学者的关注。类风湿性关节炎(RA)是一种发病率较高的慢性自身免疫性疾病,慢性滑膜炎长期反复发作,导致关节内软骨和骨不可逆破坏。lncRNA与RA的滑膜细胞持续增生、抑炎因子、促炎因子之间平衡破坏,以及血管翳的形成有密切关系。若能明确RA中lncRNA的作用机制,将为诊断、治疗RA以及其他自身免疫性相关疾病提供新思路。

纳米荧光碳点与细菌生物相容性的初步研究

目的用大肠埃希菌(E.coli)和金黄色葡萄球菌(S.aureus)研究新型免疫标记物——纳米荧光碳点(CDs)对此两种细菌的生物相容性。方法以洽草为材料合成CDs,通过透射电镜(TEM)﹑荧光光谱仪和傅立叶红外分析仪研究合成的CDs的特征。借助比色计和扫描电镜(SEM)观察这两种细菌分别与CDs共培养后的生长曲线,及CDs对细菌形态的影响。用傅立叶变换衰减全反式红外分析(ATR-FTIR)和荧光光谱仪分析此两种菌对CDs的直接效应。结果合成得到形态较均一的CDs。与细菌共培养的CDs对E.coli和S.aureus的生长无明显影响,但可影响细菌的形态;细菌能够黏附或吞噬一定量的CDs,并可致CDs的荧光衰减。结论 CDs对E.coli和S.aureus有一定的生物相容性,但有细胞毒性;而此两种菌对CDs荧光有非特异性猝灭作用。

表观遗传调控在巨噬细胞极化中的研究进展

巨噬细胞作为一种异质性固有免疫细胞，具有极其重要的理论研究和临床应用前景。近年来，表观遗传调控巨噬细胞极化成为学者们改造巨噬细胞来治疗感染与炎症的研究方向。表观遗传是指DNA序列不存在改变，而基因表达发生可遗传的改变，如DNA甲基化，组蛋白修饰，非编码RNA调控等表观修饰方式单独或联合作用以影响基因表达与维持。