Rac1对巨噬细胞RAW264.7细胞生物学作用的影响

目的分析巨噬细胞RAW264.7的Rac1表达水平,通过构建Rac1载体和特异性siRNA探讨其对RAW264.7细胞生物学活性的影响。方法经反转录法克隆Rac1的cDNA并构建Rac1基因表达载体,Western blot技术检测Rac1的蛋白表达水平,定量荧光PCR(qRT-PCR)测定Rac1 mRNA,流式细胞术分析细胞表面膜分子表达的改变,Transwell法观察细胞的迁移能力,ELISA法检测细胞培养上清中相关细胞因子的表达。结果经测序等手段鉴定表明,Rac1载体构建成功,且将Rac1载体转入RAW264.7细胞可见其mRNA和蛋白表达均明显上调、细胞迁移能力增强,但对RAW264.7细胞膜表面CD80、CD86和MHC-Ⅱ类分子的表达没有明显影响。然而,Rac1抑制剂及其特异性siRNA却可上调上述3种膜分子的表达。此外,Rac1转染的RAW264.7细胞分泌的IL-1β水平显著低于siRNA处理组及Rac1抑制剂组,而IL-6、IL-33、TNF-α的表达各组之间没有显著差异。结论 Rac1的表达有助于RAW264.7细胞的迁移和抑制IL-1β的分泌,而对细胞的抗原提呈作用无显著影响。

桥本甲状腺炎ILC2相关分子表达与自身抗体水平关系的研究

目的Ⅱ型固有淋巴细胞(group Ⅱ innate lymphoid cells,ILC2)是近年来新发现的非T非B淋巴细胞,在IL-25或IL-33刺激下产生和分泌IL-5、IL-13等2型免疫应答的细胞因子,参与Th2优势分化状态的维持。桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis,HT)是一类器官特异性的自身免疫性疾病,其甲状腺球蛋白抗体(ATG)和甲状腺过氧化物酶抗体(ATPO)等自身抗体均显著升高。ILC2参与的Th2细胞应答是介导抗体产生的重要途径,其与HT自身抗体的产生关系尚未见报道。方法本研究采用q RT-PCR法检测HT患者外周血ILC2特征性细胞因子和转录因子的表达水平,并对其与血清ATG和ATPO水平的相关性进行了分析。结果 HT患者外周血单个核细胞(PBMC)ILC2特征性转录因子(RORα)和细胞因子(IL-13)的m RNA明显增加,且与血清ATG及ATPO自身抗体水平的显著升高呈现明显正相关。结论 ILC2的活性与HT患者自身抗体的产生有着密切的关系,其作用可能是通过维持Th2极化状态促进自身抗体的产生,拟或影响IL-10的产生降低自身抗体应答的负向调控,有待进一步深入研究。