MTA1基因调控人前列腺癌PC-3细胞失巢凋亡的研究

目的:探讨MTA1基因小干扰RNA(siRNA)对前列腺癌细胞PC-3增殖和失巢凋亡的影响。方法:应用MTA1 siRNA转染处理人前列腺癌细胞系PC-3后,采用实时定量PCR和W estern印迹检测MTA1基因mRNA和蛋白水平,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,采用琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测癌细胞失巢凋亡。结果:与对照组比较,MTA1基因siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性(r=0.935,P=0.0001)。MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关(r=0.901,P=0.0005)。琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导前列腺癌细胞失巢凋亡,且与浓度相关(r=0.916,P=0.0003)。结论:MTA1 siRNA可抑制人前列腺癌细胞增殖,诱导失巢凋亡是其机制之一。

肿瘤相关钙信号传导蛋白-2基因mRNA在人胰腺癌组织中表达的临床意义

目的:探讨人胰腺癌肿瘤相关钙信号传导蛋白2(tumo-associated calcium signal transducer-2,TROP-2)基因在胰腺癌组织中表达及其临床意义。方法:提取56例人胰腺癌及癌旁正常组织中总mRNA,采用实时荧光定量逆转录聚酶链反应(RT-PCR)法检测其中TROP-2 mRNA表达情况;并分析其表达与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分化程度和TNM分期相关性。结果:以2^(-ΔΔCt)≥2为阳性标准,TROP-2在胰腺癌组织中阳性表达率为75.0%(42/56),而癌旁正常组织未见TROP-2 mRNA表达,两者差异有统计学意义(P<0.001)。TROP 2 mRNA过表达与肿瘤大小、淋巴结转移、TNM分期显著相关(均P<0.01),而与患者年龄和肿瘤分化程度无关(均P>0.05)。结论:TROP-2基因表达与胰腺癌进展密切相关,可能是反映胰腺癌侵袭、转移的重要指标之一。

基于Oncomine数据库探讨METTL3在胃癌中的意义

目的 探讨METTL3在胃癌中的表达及意义。方法 收集Oncomine数据库中关于METTL3的数据信息,对其在胃癌中的作用进行统计分析。利用Kaplan-Meier Plotter进行患者生存周期分析。结果 经过筛选,涉及mRNA METTL3在正常胃组织和胃癌组织表达差异的研究共4项(其中按照病理分为9项,共包含346例组织样本),与对照组相比,METTL3在346例胃癌组织中高表达(P<0.05)。METTL3表达量与胃癌总体生存呈负相关,METTL3表达水平越高则患者总体生存率越低(P<0.05)。根据胃癌Lauren分型探讨,发现肠型胃癌以及混合型胃癌中METTL3的表达情况与生存时间之间关系不大(P>0.05)。弥漫型胃癌中,METTL3的表达水平与预后具有相关性,且METTL3表达水平高的患者生存更获益(P<0.05)。针对HER2阳性的胃癌,METTL3的表达水平与胃癌患者预后呈负相关(P<0.05)。结论 mRNA METTL3在胃癌组织中高表达,且与胃癌预后有关,可能为肿瘤药物的开发提供重要理论依据,但需要更多的研究进行探讨。

肿瘤出芽作为预测老年患者胃癌根治术后远处器官转移标志物的临床意义探讨

目的探讨老年患者胃癌根治术后远处器官转移指标的临床意义。方法回顾性分析2015年3月至2022年6月收治的124例行胃癌根治术后发生转移老年患者的临床病理资料,分析影响患者术后远处转移的临床病理因素。采用苏木精-伊红染色法进行胃癌组织肿瘤出芽的评估,并分析其临床意义。结果胃癌组织肿瘤出芽与脉管侵犯(χ^(2)=6.731,P=0.009)、淋巴结转移数目(rs=0.481,P<0.001)、术后远处转移时间(rs=-0.450,P<0.001)明显相关。单因素分析结果显示,肿瘤出芽分级、肿瘤大小、脉管侵犯、术后化疗、癌结节、术前血清糖类抗原125、淋巴结转移数目是老年患者胃癌根治术后无远处转移生存期的影响因素(均P<0.05);多因素分析结果显示,老年胃癌患者肿瘤出芽分级是术后远处转移重要的独立预后因素之一(HR=3.731,P<0.001)。结论肿瘤出芽可以作为预测老年患者胃癌根治术后远处器官转移的标志物,具有重要的临床意义。

LINC02802在肝癌中的表达及与预后和免疫细胞浸润的关系

目的探索肝癌患者LINC02802的表达及与预后和免疫浸润水平的关系。方法通过癌症基因组图谱(TCGA)数据库获得肝癌患者数据及临床资料,以LINC02802表达量的中位数为界,将癌症患者分为高表达组和低表达组。采用Mann-Whitney U检验、Wilcoxon符号秩检验、Kaplan-Meier法、Cox回归分析、免疫浸润分析,评估LINC02802表达与肝癌患者临床特征及生存预后的关系。采用单样本基因富集分析(ssGSEA)LINC02802与免疫浸润的关系。结果通过TCGA数据库,获得原始研究样本数据424例,其中包括肝癌组织374例,正常组织50例。LINC02802在肝癌组织中的表达量显著高于正常组织,且LINC02802在肝癌患者中的高表达与组织学分级、甲胎蛋白和血管浸润有关(P<0.05);LINC02802高表达与较差的总生存期相关(P<0.05),且LINC02802表达量是肝癌患者预后的独立影响因素(P<0.05);LINC02802表达与免疫细胞浸润水平密切相关(P<0.05)。结论LINC02802的表达与肝癌的不良预后有关,且与免疫细胞浸润水平相关,提示LINC02802可作为预测肝癌患者生存预后和免疫浸润水平的标志物。

槲皮素对人胃癌细胞侵袭和MMP-2表达的影响

目的:观察槲皮素(Quercetin,Que)对人胃癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:采用不同浓度的槲皮素处理胃癌BGC-823细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR检测癌细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metallopeptidase-2,MMP-2)基因mRNA水平,以Western blot方法检测癌细胞MMP-2基因蛋白水平变化.结果:不同浓度的胃癌BGC-823细胞经槲皮素处理后,恶性增殖和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.005,P<0.005).槲皮素处理组MMP-2基因mRNA和蛋白水平均明显下调,且呈时间和浓度依赖性,即随着作用时间的延长和槲皮素作用浓度的增加,MMP-2的mRNA和蛋白水平逐渐下降,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001).结论:槲皮素可明显抑制胃癌BGC-823细胞侵袭能力,其机制可能与下调MMP-2基因表达有关.

吴茱萸碱对人胃癌SGC7901细胞增殖、侵袭和保罗样激酶-1基因表达的影响

目的:观察中草药提取物吴茱萸碱(evodiamine)对人胃癌细胞侵袭的影响及可能的机制。方法:采用不同浓度的吴茱萸碱处理人胃癌SGC7901细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力;分别以荧光实时定量RT-PCR和免疫荧光方法检测癌细胞保罗样激酶-1(polo-likekinase 1,PLK1)基因表达水平。结果:胃癌SGC7901细胞经吴茱萸碱处理后,恶性增殖和穿膜细胞数均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。吴茱萸碱处理组PLK1 mRNA和蛋白水平均明显下调,且呈时间和浓度依赖性(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可明显抑制胃癌细胞侵袭力,其机制可能与下调PLK1基因表达有关。

RNAi沉默PRL-3基因对大肠癌细胞侵袭的抑制

目的:探讨RNA干扰(RNA interference,RNAi)沉默促肝细胞再生磷酸酶3(proteins in regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响.方法:应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理大肠癌细胞系HCT116后,采用荧光实时定量PCR方法检测PRL-3基因mRNA水平,分别采用软琼脂集落培养实验和Boyden小室模型实验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力.其次将转染48h的细胞接种裸鼠,观察对癌细胞体内侵袭的影响.结果:与两对照组比较,siRNA组PRL-3 mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05).体外实验发现:与对照组比较,PRL-3 siRNA转染组软琼脂集落形成数和穿过滤膜的癌细胞均呈剂量依赖性减少(P<0.05,P<0.05).体内实验发现:空白对照组和空载对照组有较多癌细胞侵袭癌肿组织周围的横纹肌,并侵犯血管,而siRNA转染组未见这些现象.结论:PRL-3在大肠癌细胞侵袭中起着重要的作用,采用PRL-3 siRNA转染可抑制大肠癌细胞侵袭。

槲皮素对食管癌细胞侵袭和中期生长因子基因表达的影响

目的:观察中药提取物槲皮素对食管癌细胞侵袭的影响,并探讨其可能机制.方法:采用不同浓度的槲皮素处理食管癌EC109细胞后,以软琼脂集落培养试验检测癌细胞锚着不依赖性增殖,以Boyden小室模型方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量RT-PCR检测癌细胞中期因子(midkine,MK)基因mRNA水平,以Western blot方法检测癌细胞MK基因蛋白水平变化.结果:食管癌EC109细胞经槲皮素处理后,恶性增殖和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性(均P<0.05).槲皮素处理组MK基因mRNA和蛋白水平均明显下调,且呈时间和浓度依赖性(均P<0.05).结论:槲皮素可明显抑制食管癌EC109细胞侵袭能力,其机制可能与下调MK基因表达有关.

RNAi沉默Polo-like kinase-1基因表达对大肠癌细胞端粒酶活性的影响

目的探讨polo-like kinase-1(PLK1)基因对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法根据PLK1基因序列特点,设计并用化学方法合成小干扰核糖核酸分子(small interfering RNA,si RNA),转染人大肠癌SW480细胞后,分别采用实时定量PCR和Western blot检测PLK1基因mRNA和蛋白表达水平。分别采用MTT法和TRAP-ELISA方法检测PLK1基因转染对大肠癌细胞增殖和端粒酶活性的影响。结果所设计的5个si RNA均能明显抑制大肠癌SW480细胞PLK1 mRNA水平,以P4效果最好。以P4转染处理大肠癌细胞后,PLK1 mRNA水平和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性。MTT和TRAP-ELISA方法检测发现,P4si RNA转染组细胞增殖和端粒酶活性明显受到抑制,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.05)。结论PLK1基因对大肠癌细胞增殖具有重要的调控作用;以PLK1 si RNA转染处理大肠癌细胞,可明显抑制大肠癌细胞的恶性增殖,其机制可能与抑制端粒酶活性有关。

靶向survivin基因RNAi沉默表达对恶性胶质瘤细胞侵袭的影响

目的探讨存活素(survivin)基因对胶质瘤细胞侵袭的影响和可能机制。方法应用survivin基因小干扰RNA(siRNA)转染处理胶质瘤SNB19细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测survivin基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞集落生长数和侵袭力。采用Western blot方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物(uPA)蛋白水平。结果survivin siRNA转染组细胞的survivin基因mRNA和蛋白水平明显下调,转染组胶质瘤细胞集落生长数和癌细胞穿膜细胞数明显下调,且与浓度相关。转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降。结论Survivin基因在胶质瘤细胞侵袭中起着重要作用,采用靶向survivin siRNA转染可抑制其侵袭能力,其机制可能与下调uPA基因表达有关。

miR-155反义寡核苷酸转染对甲状腺癌细胞迁移、侵袭和MMP-13表达的影响

目的:探讨miR-155表达对人甲状腺癌细胞增殖及侵袭力的影响。方法:构建针对miR-155的反义寡核苷酸(antisense miR-155,AS-miR-155),同时设立空白对照组和无义寡核苷酸(oligodeoxyribonucleotides,ODN)组。人甲状腺癌BCPAP细胞经转染处理后,采用荧光实时定量PCR检测3组细胞中miR-155 mRNA表达水平,划痕试验检测癌细胞迁移能力,Transwell方法检测细胞的侵袭能力。采用ELISA方法检测各组癌细胞上清液基质金属蛋白质酶(matrix metalloproteinase-13,MMP-13)含量。结果:与对照组和无义ODN组比较,转染AS-miR-155组BCPAP细胞miR-155表达水平降低,细胞迁移速度变慢,穿膜细胞数较少,细胞中MMP-13蛋白水平亦明显减低(P<0.05)。结论:采用寡核苷酸下调miR-155高表达可抑制甲状腺癌细胞增殖及侵袭力,下调MMP-13表达是其重要机制。

RNAi沉默PRL-1基因对肺癌细胞侵袭能力的影响

目的:探讨RNA干扰(RNAinterference,RNAi)沉默促肝细胞再生磷酸酶1(phosphatase of regenerating liv-er cell-1,PRL-1)基因对肺癌细胞侵袭力的影响。方法:应用PRL-1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理肺癌A549细胞后,分别采用实时定量RT-PCR和蛋白质印迹检测PRL-1基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。结果:与对照组比较,siR-NA转染组PRL-1 mRNA和蛋白水平明显下调,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05,P<0.05)。体外试验发现,PRL-1siRNA可有效抑制肺癌细胞集落生长和侵袭能力,且与浓度相关(P<0.05,P<0.05)。结论:PRL-1基因在肺癌侵袭中起着重要的作用,采用PRL-1 siRNA转染可抑制肺癌细胞侵袭。

RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞失巢凋亡的影响

目的:观察RNA干扰沉默MTA1基因对膀胱癌细胞株BIU-87增殖和失巢凋亡的影响。方法:构建针对MTA1基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),应用MTA1 siRNA转染处理人膀胱癌细胞株BIU-87后,分别采用实时定量PCR和蛋白质印迹法检测MTA1基因mRNA和蛋白的表达,采用软琼脂集落培养试验检测锚着不依赖性增殖,琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测BIU-87细胞失巢凋亡。结果:与对照组比较,MTA1 siRNA转染组MTA1 mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.01)。MTA1 siRNA转染组软琼脂集落形成数明显减少,且与浓度相关(P<0.01)。琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术结果显示,MTA1 siRNA转染可诱导BIU-87细胞失巢凋亡,且与浓度相关(P<0.01)。结论:MTA1 siRNA可抑制膀胱癌细胞株BIU-87增殖,诱导失巢凋亡可能是其机制之一。

RNAi沉默中期因子基因表达对胃癌细胞黏附和侵袭力的影响

目的:探讨中期因子(midkine,MK)基因小干扰RNA对胃癌细胞生物学行为的影响。方法:培养人胃癌BGC-823、HGC-27、MGC-803及SGC-7901细胞株,以荧光实时定量PCR方法检测中期因子基因mRNA表达;筛选出中期因子表达最高者。采用中期因子基因小干扰RNA转染胃癌细胞株,分别以荧光实时定量PCR和免疫荧光方法观察中期因子基因mRNA和蛋白水平,然后以四唑蓝(MTT)比色法检测细胞黏附性,以Boyden方法检测癌细胞侵袭力。结果:4株胃癌细胞中,中期因子均有不同程度的表达,以胃癌BGC-823细胞最高;以MK siRNA转染胃癌BGC-823细胞后,癌细胞中期因子基因mRNA和蛋白水平明显下降,且呈浓度依赖性;转染组细胞黏附数量明显下降,细胞侵袭力明显下降。结论:中期因子基因在胃癌细胞黏附和侵袭中发挥着重要作用;以siRNA转染胃癌细胞,可抑制胃癌细胞黏附和侵袭能力。

促肝细胞再生磷酸酶-3基因对大肠癌细胞侵袭和失巢凋亡的调控

目的探讨促肝细胞再生磷酸酶(phosphatase of regenerating liver cell-3,PRL-3)基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用PRL-3基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人大肠癌HCT116细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测PRL-3 mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力,采用琼脂糖凝胶电泳和TUNEL检测癌细胞失巢凋亡情况。结果转染组癌细胞PRL-3 mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈时间和浓度依赖性。琼脂糖凝胶电泳和TUNEL结果显示,转染组细胞出现明显的凋亡现象:凋亡指数增加,出现明显的DNA条带。结论PRL-3基因siRNA转染可明显抑制大肠癌细胞的锚着不依赖性增殖和恶性侵袭,其机制可能与诱导失巢凋亡有关。

榄香烯乳对大肠癌HCT-116细胞侵袭及miR-155表达的影响

目的观察榄香烯乳对人大肠癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的榄香烯乳处理人大肠癌HCT116细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用荧光实时定量PCR方法检测癌细胞miR-155 mRNA水平。结果人大肠癌HCT116细胞经榄香烯乳处理后,迁移和侵袭力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.05)。榄香烯乳处理组miR-155 mRNA水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论榄香烯乳可降低人大肠癌细胞侵袭能力,下调miR-155 mRNA表达是其重要机制之一。

RNA干扰Bcl-xL基因表达对大肠癌细胞侵袭的影响

目的探讨Bcl-xL基因对大肠癌细胞侵袭的影响及可能机制。方法应用Bcl-xL基因小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA)转染处理人大肠癌HT29细胞后,分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平,分别采用软琼脂集落培养试验和Boyden小室模型试验检测癌细胞的锚着不依赖性增殖和侵袭能力。另外,采用Western blot方法检测癌细胞尿激酶纤溶酶原激活物(urokinase-type plasminogen activator,uPA)蛋白变化。结果转染组癌细胞Bcl-xL基因mRNA和蛋白水平明显被抑制,且与时间和浓度相关。与对照组比较,转染组细胞所形成的软琼脂集落数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性。转染组癌细胞uPA蛋白水平明显下降,且与浓度相关。结论Bcl-xL基因在大肠癌细胞侵袭中起着重要的作用;以si RNA下调Bcl-xL基因表达,可明显抑制大肠癌细胞恶性侵袭,其机制可能与下调uPA表达有关。

RNAi沉默VEGF表达对大肠癌细胞肝转移的影响

目的:研究血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)对大肠癌肝转移的影响。方法:根据VEGF基因mRNA设计合成小干扰RNA,采用荧光实时定量PCR检测VEGF mRNA水平,分别以软琼脂集落培养试验和Boyden模型观察癌细胞锚着不依赖性增殖和癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立大肠癌肝转移模型,以不同方法处理的癌细胞接种模型,观察对大肠癌细胞肝转移的影响。结果:转染组VEGF基因mRNA水平明显降低,且呈浓度和时间依赖性。经VEGF siRNA转染处理的癌细胞软琼脂集落形成数和穿膜细胞数明显减少,且呈浓度依赖性(P<0.05,P<0.05)。体内试验发现,对照组10只全部出现大肠癌肝转移灶,而siRNA组仅仅1只出现肝转移,差异具有显著统计学意义(P<0.01)。结论:VEGF基因在大肠癌肝转移中起着重要的作用;以RNAi技术沉默VEGF基因表达,可抑制大肠癌细胞肝转移。

表没食子儿茶素没食子酸醋对人胃癌细胞迁移、袭和FoxM1基因表达的影响

目的观察表没食子儿茶素没食子酸醋(表没食子儿茶素没食子酸醋,EGCG)对人胃癌细胞迁移、侵袭的影响,并探讨其可能机制。方法采用不同浓度的EGCG处理人胃癌BGC823细胞后,以划痕试验方法检测癌细胞迁移能力,以Transwell方法检测癌细胞侵袭能力,采用蛋白质印迹方法检测FoxM1基因蛋白水平变化。结果人胃癌BGC823细胞经EGCG处理后,迁移和侵袭能力均明显下降,且呈剂量依赖性(P<0.01)。EGCG处理组FoxM1基因蛋白水平明显下调,且呈浓度依赖性。结论 EGCG可降低人胃癌细胞侵袭能力,下调FoxM1基因表达,是其重要机制之一。