TROP2 shRNA真核表达载体转染胃癌BGC-823细胞的沉默作用

目的:构建TROP2特异性短发夹环RNA(shRNA)真核表达载体,抑制人胃癌BGC-823细胞TROP2基因的表达.方法:构建TROP2短发夹环RNA,产生重组质粒转染胃癌BGC-823细胞,转染24h后用G418(浓度400mg/L)筛选,待细胞稳定后收集,分别命名为W组(未处理组),HK组(随机阴性对照质粒组),KB组(空质粒组),T1组,T2组,T3组.并运用实时荧光定量PCR和Western blot检测TROP2的表达.结果:TROP2特异性shRNA片段被成功克隆进pGensil1.1质粒中,重组质粒shRNA编码序列与设计片断的序列完全一致.与未转染细胞组、随机阴性对照组、空质粒组相比,转染shRNA重组质粒的人胃癌BGC-823细胞TROP2表达在mRNA和蛋白水平都受到抑制.与T1、T2组相比,T3组对TROP2mRNA和蛋白抑制作用最明显,差异具统计学意义(8.79±0.23vs9.54±0.20,9.57±0.23;3.66±0.11vs6.46±0.36,9.31±0.11,均P<0.05).结论:成功构建了针对TROP2的特异性shRNA真核表达载体并抑制了TROP2的表达,为进一步研究其基因功能打下了基础.