DAPT对食管鳞癌细胞株增殖与凋亡影响机制探讨

目的:观察γ-分泌酶抑制剂DAPT阻断Notch信号通路对食管鳞状细胞癌细胞株增殖和凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法:采用γ-分泌酶抑制剂DAPT处理培养的食管鳞癌Eca109和TE-1细胞株以阻断Notch信号,分别应用CCK-8试剂和流式细胞术检测两种食管鳞癌细胞株的增殖与凋亡情况;同时采用定量PCR检测细胞Notch受体及靶基因Hes-1mRNA的表达,蛋白质印迹法检测与细胞增殖、凋亡相关蛋白Cyclin D1和Bcl-2的表达。结果:DAPT处理明显抑制了食管鳞癌Eca109和TE-1细胞株增殖,5μmol/L DAPT处理Eca109细胞株72h、TE-1细胞株96h后增殖抑制率分别为(61.8±5.3)%和(59.8±2.9)%,与DMSO对照组(17.2±2.6)%和(7.0±2.1)%相比差异有统计学意义,P=0.000 2和P<0.000 1,且抑制作用呈时间和浓度依赖关系。DAPT可诱导Eca09和TE-1细胞株凋亡,5μmol/L DAPT处理组Eca109细胞凋亡率在24和48h分别为(18.24±2.60)%和(21.77±5.82)%,与相应对照组(10.49±2.27)%和(9.74±3.38)%相比凋亡率增加,差异有统计学意义,P值分别为0.017 8和0.036 4;处理组TE-1细胞凋亡率在24和48h分别为(20.21±5.90)%和(32.14±5.92)%,与相应对照组(8.00±2.84)%和(12.59±3.72)%相比凋亡率增加,差异有统计学意义,P值分别为0.032 1和0.008 4。DAPT处理下调两种细胞株Notch2受体、Notch信号靶基因Hes-1及Cyclin D1的表达水平。DAPT处理可上调Eca109细胞Bcl-2水平,但下调了TE-1细胞中Bcl-2水平。结论:γ-分泌酶抑制剂DAPT可抑制食管鳞癌细胞株增殖并促进其凋亡,其机制可能与DAPT阻断Notch信号活化、调控Cyclin D1和Bcl-2的表达有关,阻断Notch信号通路有望成为食管鳞状细胞癌治疗的新靶点。