Klotho抑制内质网应激反应减轻UUO大鼠肾间质纤维化的实验研究

目的:观察可溶性Klotho蛋白对UUO模型大鼠肾脏内质网应激的影响。方法:24只清洁级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、治疗组。模型组大鼠采用单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)方法建立肾间质纤维化模型;治疗组在UUO的基础上,给予可溶性KL蛋白腹腔注射,对照组及模型组给予等剂量生理盐水腹腔注射。14 d后检测各组大鼠的肾功能、肾脏病理改变;Western Blot检测肾组织Klotho、GRP78、CHOP、caspase-3的表达情况。结果:模型组大鼠肾功能恶化,肾脏病理损害明显,肾组织KL蛋白的表达明显下降,内质网相关蛋GRP78及凋亡相关蛋白CHOP、caspase-3的表达明显上升;治疗组大鼠肾功能好转,肾脏病理损害缓解,同时内质网应激相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达明显下降。结论:KL可通过抑制ERS发挥肾脏保护作用。

芦荟大黄素对非酒精性脂肪性肝病细胞模型内质网应激的影响

目的:探讨芦荟大黄素(AE)对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)细胞模型内质网应激(ERS)的影响,寻找AE治疗NAFLD的可能机制。方法:正常培养的人肝细胞L-02采用脂肪乳剂诱导其发生脂肪变性建立NAFLD细胞模型,于建模的同时在含脂肪乳剂的培养液中加入不同浓度AE相同条件下培养,油红O染色观察细胞脂肪变性程度并检测肝细胞内甘油三脂(TG)含量,观察胞质内脂滴及TG的变化情况,检测细胞培养液超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)变化,MTT细胞增殖及细胞毒实验检测细胞增殖情况,Western blot检测肝细胞ERS标志性蛋白GRP78、CHOP的表达。结果:NAFLD细胞模型组细胞培养液中SOD含量下降(P<0.05),MDA含量上升(P<0.05),肝细胞增殖受到抑制,ERS标志性蛋白GRP78、CHOP的表达明显升高(P<0.05),AE的干预能有效抑制脂滴在肝细胞内的沉积,减轻肝细胞脂质过氧化程度(P<0.05),改善脂毒性对肝细胞增殖抑制作用的影响(P<0.05),并能够有效降低肝细胞GRP78、CHOP蛋白的表达(P<0.05)。结论:AE能有效减轻肝细胞脂肪变性程度,改善脂毒性对肝细胞生长抑制作用,其机制可能与AE能够减轻肝细胞脂质过氧化程度,抑制ERS引起的肝细胞脂质代谢紊乱及细胞凋亡有关。

过表达miR-21通过PI3K-AKT通路抑制替莫唑胺对胶质瘤U87细胞的增殖抑制作用

目的探讨miR-21过表达在替莫唑胺(TMZ)诱导胶质瘤U87细胞增殖中的作用及其机制,明确miR-21过表达在替莫唑胺临床治疗胶质瘤耐药中的作用。方法 Pre-miR-21过表达载体转染U87细胞,通过形态学观察,噻唑蓝(MTT)试验检测细胞增殖情况。Western印迹验证Akt和p-Akt表达及检测PI3K活性。结果替莫唑胺可显著抑制U87细胞生长,下调Akt和p-Akt表达及抑制PI3K活性。U87细胞预转染pre-miR-21过表达载体后,替莫唑胺的这种效应可部分被miR-21过表达所抑制。结论 miR-21过表达可通过活化PI3K-AKT通路部分抑制替莫唑胺诱导的U87细胞凋亡,提示胶质瘤中miR-21过表达可能是替莫唑胺临床治疗胶质瘤药物抵抗的一大新的因素。

SPARCL1基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨富含半胱氨酸酸性分泌型糖蛋白类似物1(secreted protein acidic and rich in cysteines-like 1,SPARCL1)基因对肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响。方法:将肝癌SMMC-7721细胞随机分为5组,即空白对照组,p IRES2-Zs Green组,pIRES2-Zs Green-SPARCL1组,阴性siRNA组和SPARCL1 siRNA组,空白对照组不转染,其余4组分别转染p IRES2-Zs Green空质粒、pIRES2-Zs Green-SPARCL1、阴性siRNA及SPARCL1 siRNA;蛋白质印迹法检测SPARCL1蛋白表达,同时联合荧光显微镜检测转染效果;MTT法检测各组细胞增殖能力;流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果:蛋白质印迹和荧光镜结果同时证实转染效果良好。MTT结果显示5组细胞抑制率差异有统计学意义(F=55.45,P<0.01),p IRES2-Zs Green-SPARCL1组增殖抑制率明显高于其余4组(P<0.05);SPARCL1 siRNA组细胞增殖抑制率低于其余4组(P<0.05)。流式细胞结果显示pIRES2-Zs Green-SPARCL1组凋亡率明显高于其余4组(P<0.05);SPARCL1 siRNA组凋亡率明显低于其余4组(P<0.05)。结论:过表达SPARCL1抑制肝癌细胞SMMC-7721生长和促进凋亡,沉默SPARCL1则反之。

南疆地区维吾尔族人群骨量与膳食硫摄入和血清硫化氢的相关性

目的观察新疆克州地区维吾尔族人群骨密度和膳食硫摄入、血清硫化氢(hydrogen sulfide,H_(2)S)的关系。方法选取2017年11月至2019年11月新疆阿图什市人民医院172名维吾尔族体检人员,收集一般资料,采用既往食物频数问卷(food frequency questionnaire,FFQ)调查,离子色谱法测定食物硫含量,酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定血清H 2S水平,应用超声骨密度仪测定跟骨骨量。结果根据骨量测量结果将人群分为骨量正常组和骨量减少组,骨量正常组的年龄小于骨量减少组[(57.96±8.22)岁vs.(60.84±7.95)岁,P<0.05],每周膳食硫摄入量高于骨量减少组[3202.60(2918.55,3559.50)mg/周vs.2941.92(2389.05,3243.36)mg/周,P<0.001],血清H 2S水平低于骨量减少组[2.96(1.97,3.98)pg/mL vs.6.21(2.82,10.40)pg/mL,P<0.001]。相关分析发现宽带超声衰减(broadband ultrasound attenuation,BUA)与年龄呈负相关(r=-0.252,P=0.001),与每周膳食硫摄入量呈正相关(r=0.225,P=0.003)。多元回归分析结果提示年龄和每周膳食硫摄入量是影响BUA的因素,其中呈负相关的因素为年龄(β=-0.283,P=0.000),呈正相关的因素为每周膳食硫摄入量(β=0.251,P=0.001)。结论膳食硫摄入与骨密度相关,可能具有骨保护作用。

成纤维母细胞生长因子23与慢性肾脏病患者血磷异常的研究进展

磷代谢紊乱是慢性肾脏病(CKD)患者预后独立危险因素,也是药物治疗的靶点。成纤维母细胞生长因子23是新发现的调节血磷代谢的激素,它通过抑制肾脏对磷的重吸收,促进尿磷排泄,从而降低血磷。成纤维母细胞生长因子不仅参与维持生理状态下血磷的调节,也与CKD患者的磷代谢异常有关。CKD患者的高血磷会导致成纤维母细胞生长因子23水平的明显升高,不仅反映CKD患者的血磷聚集,也是继发性甲状旁腺功能亢进症及CKD的进展、预后的一个重要预测因子,并可能成为治疗CKD患者磷代谢紊乱的新靶点。

曲尼司特对TGF-β1诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化进程的影响

目的:观察转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta 1,TGF-β1)诱导的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)转分化过程中转分化标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏蛋白(E-cadherin)的表达情况及曲尼司特对其转分化的影响。方法:应用TGF-β1(8 ng/μl)刺激NRK-52E细胞,分为阴性对照组,TGF-β1诱导组和不同剂量(100,200,400 ng/μl)曲尼司特干预组,蛋白质印迹检测各组α-SMA和E-cadherin的表达情况。结果:TGF-β1刺激后,NRK-52E细胞α-SMA的表达明显增强,E-cadherin的表达则显著减低。曲尼司特能够剂量依赖性地抑制α-SMA的上调表达,同时高剂量组还可以逆转E-cadherin的下调表达。结论:曲尼司特能够抑制TGF-β1诱导的NRK-52E细胞转分化的作用。

准分子激光治疗性角膜切削术治疗兔细菌性角膜病变

目的:研究准分子激光治疗性角膜切削术(phototherapeutic keratectomy,PTK)对兔眼细菌性角膜溃疡愈合的影响,并探讨该方法用于临床上治疗细菌性角膜病变的可能性。方法:24只新西兰大耳兔48眼接种金黄色葡萄球菌,成功制作细菌性角膜溃疡模型。接种细菌后1～2d溃疡明显形成,予以左氧氟沙星滴眼液滴眼。术前行双眼前节裂隙灯检查,双眼光学相干断层扫描(optical coherence tomography,OCT)检查并测量角膜溃疡中央深度。接种3d后所有实验兔右眼行PTK手术,左眼不予以处理作为对照眼。术后3、7d再行裂隙灯检查,并行OCT检查测量角膜溃疡中央厚度。术后7d处死实验兔,摘除双眼眼球取角膜组织行病理切片观察。结果:经裂隙灯观察,随时间推移两组兔眼角膜溃疡均有愈合倾向,表现为溃疡面积缩小和表面变平坦光滑。观察组术前测量角膜溃疡深度与对照组比较,差异无统计学意义(t=0.706,P=0.484)。观察组术后3、7d角膜溃疡厚度与对照眼比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PTK能有效治疗兔眼金黄色葡萄球菌性角膜溃疡,促进溃疡创面愈合,这可能为PTK应用于临床治疗患者细菌性角膜病变提供实验依据。

姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的抑制作用及其机制

目的:探究姜黄素对人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其潜在机制。方法:采用人肝癌SMMC-7721细胞建立肝癌移植瘤模型,将20只荷瘤裸鼠均分为对照组和10、50、100 mg/kg姜黄素组,每组5只,均采用腹腔注射给药,分别给予生理盐水及对应剂量姜黄素,每日1次,每次200μL,连续16 d。自给药当天起,隔天观察和记录各组裸鼠体重和瘤体体积;16 d后麻醉裸鼠,分离瘤组织,记录瘤重并计算抑瘤率;采用蛋白免疫印迹法测定瘤组织中内质网应激通路相关蛋白及凋亡相关蛋白的表达水平;采用免疫组织化学法检测瘤体组织中葡萄糖调节蛋白78(GRP78)和需肌醇酶(IRE1)阳性表达水平。结果:不同剂量姜黄素组裸鼠体重增长无显著差异(P>0.05),但50和100 mg/kg姜黄素组裸鼠移植瘤体积生长较对照组和10 mg/kg姜黄素组明显减小(P均<0.05)。10、50和100 mg/kg姜黄素组抑瘤率分别为35.3%、45.7%、54.7%。蛋白印迹结果显示,与对照组相比,50、100 mg/kg姜黄素组GRP78、IRE1、C/EBP同源蛋白(CHOP)以及Cleaved Caspase-3蛋白表达明显增加(P均<0.05),10、50、100 mg/kg姜黄素组p-PERK和p-eIF2α以及Bcl-2蛋白表达明显增加(P均<0.05)。免疫组织化学结果显示,10、50、100 mg/kg姜黄素组瘤组织中GRP78、IRE1蛋白阳性表达均较对照组增加(P均<0.05)。结论:姜黄素可抑制人肝癌SMMC-7721细胞裸鼠移植瘤生长,其机制可能与激活内质网应激通路有关。

miR-21抑制替莫唑胺诱导U87细胞凋亡的体外实验研究

目的探讨miR-21过表达在替莫唑胺诱导胶质瘤U87细胞凋亡中的作用及其机制。方法miR-21过表达载体转染U87细胞，Hoeehst33258染色和流式细胞分析凋亡，Westernblot验证Bax和Bcl-2表达及检测Caspase-3活性。结果替莫唑胺可显著诱导U87细胞凋亡，上调Bax表达、下调Bcl-2表达及增加Caspase-3活性。U87细胞预转染miR-21过表达载体后，替莫唑胺的这种效应可部分被抑制。结论miR-21过表达可通过下调Bax／Bcl-2比率及Caspase-3活性部分抑制替莫唑胺诱导的U87细胞凋亡，提示胶质瘤中miR-21过表达可能是胶质瘤对替莫唑胺耐药的g 大新的因素。

重型颅脑损伤患者脑挫伤组织水通道蛋白-4的表达及意义

目的 研究重型颅脑交通伤患者脑挫伤组织核心区、边缘区水孔蛋白质-4（AQP-4）的表达水平及其意义.方法 选取2007年1月-2009年7月我科重型颅脑交通伤手术患者（额颞区脑挫伤）30例,按受伤至手术时间长短平均分为O～4 h组（A组）、4～8 h组（B组）和8～12 h组（C组）.每位患者术中分别取挫伤组织边缘区及核心区组织各一.以桥小脑区肿瘤切除术中为获取手术通道而切除的5例患者正常脑组织并分成10份作为对照,应用Western-blot方法,以GAPDH为内参,分别检测边缘区、核心区挫伤组织及正常脑组织中AQP-4的表达水平.结果 边缘区组织AQP-4表达随时间增加而逐步升高,也明显高于核心区和正常组的表达水平,而核心区组织中AQP-4的表达低于正常脑组织.结论 边缘区AQP-4的高表达在伤后早期即开始,且有明显的时间依赖性.而核心区AQP-4的表达水平较低可能与血脑屏障及其周围结构的早期破坏有关.

姜黄素治疗乳腺癌的研究进展

乳腺癌作为妇女常见的恶性肿瘤，严重威胁着全球妇女的生命健康。目前，中国乳腺癌的发病率为41．64／10万，病死率为9．63／10万，且呈不断上升趋势。除手术和放疔之外，药物治疗仍是其主要治疗手段，但目前的药物不良反应大，严重影响治疗效果，降低了患者的生存质量，因此，国内外学者都在努力寻找一种“增效减毒”的药物，

乙酰辅酶A羧化酶反义寡核苷酸对非酒精性脂肪肝细胞模型的作用

目的观察乙酰辅酶A羧化酶(ACC)反义寡核苷酸(ASODN)对HL-7702肝细胞脂肪变性的影响。方法用计算机软件设计并合成特异性靶向ACC的硫代修饰ASODN。用静脉脂肪乳剂体外培养正常HL-7702肝细胞48 h,制备体外脂肪肝细胞模型。以脂质体法将ACC-ASODN转染至脂肪肝细胞模型,设置空白组(HL-7702肝细胞组)、模型组(脂肪肝细胞模型组)、低高2个浓度实验组(5,10μmol·L^(-1)ACC-ASODN转染组)。以ACC-ASODN转染入脂肪肝细胞模型24 h后,放射性同位素技术测定ACC酶活性,HPLC法测定丙二酰辅酶A含量,放射性同位素技术测定肉碱棕榈酰转移酶Ⅰ(CPT I)活性,用全自动生化分析仪测定4组肝细胞内三酰甘油(TG)含量。结果 ACC-ASODN转染入脂肪肝细胞模型24 h后,空白组、模型组及低、高2个浓度实验组的肝细胞ACC活性(U)分别是0.74,0.33,0.20,0.18;这4组的细胞内丙二酰辅酶A含量(nmol·L^(-1))分别是14.3,12.4,7.5,6.8;这4组的细胞CPTⅠ活性(U)分别是1.33,1.47,3.85,3.95;这4组的TG含量分别是0.20,0.52,0.37,0.28 mmol·L^(-1)。模型组与空白组的以上几项指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组的以上几项指标比较,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论 ACC-ASODN作用于肝细胞,通过抑制肝细胞ACC活性,使TG含量下降,从而减轻肝细胞脂肪变性。