幽门螺杆菌hp0529基因缺陷株的构建及其功能初步研究

目的:构建幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统hp0529基因缺陷株,并对其功能进行初步探讨。方法:采用同源重组原理,PCR技术扩增hp0529基因编码区两侧序列同源臂,构建含卡那霉素抗性标志的自杀质粒p Blue KM40-△hp0529;利用电穿孔法将其导入受体野生株中,通过卡那霉素筛选出hp0529基因缺陷株并经PCR及酶切方法鉴定;分别对缺陷株和野生株进行培养,观察其生长状况;并将两株细菌分别与胃上皮GES-1细胞共培养,检测hp0529基因缺陷株诱导GES-1细胞IL-8 mRNA水平的变化。结果:成功构建出幽门螺杆菌hp0529基因缺陷株;该基因敲除对细菌生长无明显影响,但对诱导GES-1细胞IL-8 mRNA表达有明显抑制作用。结论:成功构建hp0529基因缺陷株,该基因对细菌生长无明显影响,但能影响GES-1细胞IL-8 mRNA的表达。

急性髓系白血病患者SALL4基因的甲基化改变及其临床意义

目的:探讨急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者婆罗双树样基因4(Sal-like 4,SALL4)启动子的甲基化状况和临床意义。方法:分别应用甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)技术和实时定量PCR(RQ-PCR)技术检测45例初发AML患者和20例缺铁性贫血患者骨髓标本的SALL4甲基化状态和SALL4表达水平;同时,对AML患者的SALL4甲基化改变与临床特征相关性进行分析。结果:9例(20.0%)AML患者存在SALL4基因启动子低甲基化改变,而20例对照均无SALL4基因低甲基化,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。SALL4启动子低甲基化改变与AML患者年龄、性别、血红蛋白含量、血小板计数均无相关性(P>0.05),但低甲基化患者的白细胞计数明显高于甲基化患者(P=0.027)。SALL4表达水平和SALL4低甲基化明显相关(P<0.05)。按WHO分型,本研究中共有7类亚型,亚型间SALL4低甲基化频率差异无统计学意义(P>0.05)。中危和高危组核型患者中SALL4低甲基化频率明显高于低危组患者(P<0.05)。结论:SALL4低甲基化是AML患者中一个常见分子事件,可能与AML患者中高危核型相关。

胞外囊泡作为药物传递天然纳米载体的研究进展

细胞释放膦脂膜的小囊泡在细胞交流、抗原递呈、感染物的传递等方面起关键作用。胞外小囊泡携带各种蛋白、mRNA、microRNA(miRNA),象一个卡车运载"货物"一样,将携带的各种分子运载至远端的细胞。而且,被小囊泡包裹的分子可避免被体液中的酶降解,使胞外囊泡成为天然的、新颖的药物传递系统。该文综述了胞外囊泡的分类、组成、生物药物应用、以及作为药物传递载体在临床实验应用等方面的研究进展,为寻求新的药物传递系统治疗相关疾病提供理论基础。

参苓白术散联合二甲双胍治疗对2型糖尿病肥胖患者miR-221、MCP-1、TNF-α的影响

目的探讨miR-221、单核细胞趋化蛋白(MCP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在参苓白术散联合二甲双胍治疗2型糖尿病(T2DM)肥胖患者中表达水平的变化。方法86例T2DM肥胖患者随机分为对照组(二甲双胍治疗)和实验组(参苓白术散+二甲双胍联合治疗),持续治疗6个月,于治疗前、治疗1周、治疗3个月及治疗6个月采集2组空腹静脉血标本,实时荧光定量PCR检测miR-221的表达水平,ELISA法测血清MCP-1和TNF-α的水平,高效液相色谱法(HPLC)检测糖化血红蛋白(GHb),化学发光法检测胰岛素和C肽,己糖激酶法测定葡萄糖(Glu),并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);Pearson相关性分析miR-221与MCP-1、TNF-α、HOMA-IR、GHb、Glu之间的相关性。结果与治疗前比较,T2DM肥胖患者血清MCP-1、TNF-α、HOMA-IR、GHb水平在治疗后呈降低趋势,且治疗3个月后明显降低(P<0.05);而miR-221水平呈升高趋势,且治疗3个月后明显升高(P<0.05)。与对照组同时相点比较,实验组T2DM肥胖患者在治疗3个月后血清MCP-1、TNF-α、HOMA-IR、GHb水平均明显降低(P<0.05),而miR-221表达水平明显升高(P<0.05)。Pearson相关性分析结果表明,T2DM患者miR-221与HOMA-IR(r=-0.684,P=0.000)、MCP-1(r=-0.795,P=0.000)、TNF-α(r=-0.612,P=0.000)、Glu(r=-0.485,P=0.000)、GHb(r=-0.591,P=0.000)均呈负相关。结论参苓白术散联合二甲双胍治疗通过增加miR-221的表达,降低炎症因子(MCP-1、TNF-α)的表达,缓解T2DM肥胖患者的胰岛素耐受及高血糖。

日本血吸虫热激蛋白60来源多肽SJMHE1降低哮喘小鼠脾脏和肺组织髓源性抑制细胞的数量

目的观察日本血吸虫热激蛋白60来源多肽SJMHE1对哮喘小鼠气道炎症的作用及其对髓源性抑制细胞(MDSC)的影响。方法选择6～8周健康雄性BALB/c小鼠,随机分为PBS组、卵清蛋白(OVA)组、 OVA-PBS组, OVA-SJMHE1组。OVA致敏建立支气管哮喘模型, HE染色观察小鼠肺组织病理形态学变化, ELISA测定小鼠血清中OVA特异性IgE水平,流式细胞术测定脾脏MDSC中多形核细胞型MDSC(PMN-MDSC)、单核细胞型MDSC(M-MDSC)所占比例,免疫组织化学染色法检测肺组织MDSC的表达。结果与PBS组比较, OVA、 OVA-PBS组肺组织炎性细胞的浸润增加,血清IgE水平升高、脾脏PMN-MDSC比例及肺组织MDSC数量增加,脾脏M-MDSC比例无明显变化;与OVA、 OVA-PBS组比较, OVA-SJMHE1组肺组织炎症细胞浸润减少、脾脏PMN-MDSC比例及肺组织MDSC数量减少,血清IgE水平及脾脏M-MDSC比例无明显变化。结论SJMHE1可能通过减少MDSC数量,抑制哮喘小鼠气道炎症。

miR-107-3p靶向SLC25A38调控阿尔茨海默病模型细胞凋亡的分子机制

目的研究miR-107-3p对阿尔茨海默病(AD)模型细胞凋亡的影响及其分子机制。方法模型+miR-NC组(转染miR-NC)、模型+miR-107-3p组(转染miR-107-3p mimics)、模型+si-NC组(转染si-NC)、模型+si-SLC25A38(转染si-SLC25A38)、模型+miR-107-3p+pcDNA组(共转染miR-107-3p mimics和pcDNA)、模型+miR-107-3p+pcDNA-SLC25A38组(共转染miR-107-3p mimics和pcDNA-SLC25A38)均用脂质体法转染至PC12细胞,再进行AD细胞模型制造。噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活率;qRT-PCR法检测细胞中miR-107-3p、SLC25A38的表达;Western印迹检测细胞中SLC25A38的蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞荧光活性。结果成功构建AD细胞模型;与对照组相比,模型组细胞中miR-107-3p表达下调,膜转蛋白的溶质载体(SLC)25A38表达上调;过表达miR-107-3p、抑制SLC25A38均可促进模型细胞的存活,抑制其凋亡;miR-107-3p可抑制野生型SLC25A38的荧光活性;过表达SLC25A38可逆转miR-107-3p对AD模型细胞存活和凋亡的影响。结论miR-107-3p可提高AD模型细胞的存活,抑制凋亡,其机制与靶向SLC25A38有关。

沉默LncRNA TUG1通过上调miR-214-5p表达增加乳腺癌细胞的放射敏感性

目的:探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(LncRNA TUG1)对乳腺癌细胞放射敏感性的影响并探究其可能作用机制。方法:选取2015年4月至2016年3月于本院就诊的45例乳腺癌患者为研究对象,根据放疗后病灶变化情况分为放射敏感组(25例)与放射抵抗组(20例),qRT-PCR检测两组患者乳腺癌组织中TUG1表达水平。构建放射抵抗的乳腺癌细胞MCF-7R,通过不同剂量X射线照射MCF-7R细胞与乳腺癌MCF-7细胞,qRT-PCR检测MCF-7R、MCF-7细胞及人乳腺上皮细胞MCF-10A中TUG1的表达量。实验将MCF-7R细胞分为沉默TUG1组、沉默对照组、过表达miR-214-5p组、过表达miR-NC组、沉默TUG1+抑制miR-NC组、沉默TUG1+抑制miR-214-5p组。双荧光素酶报告实验验证TUG1与miR-214-5p的靶向作用关系。细胞克隆实验检测各组MCF-7R细胞存活率的影响;流式细胞术实验检测各组MCF-7R细胞的凋亡率。结果:TUG1在MCF-7R细胞中的表达水平较MCF-10A、MCF-7细胞明显升高;沉默TUG1表达可降低MCF-7R细胞存活,促进细胞凋亡;TUG1可负向调控miR-214-5p表达;miR-214-5p在MCF-7R细胞中的表达水平较MCF-10A、MCF-7细胞明显降低,miR-214-5p过表达可减少MCF-7R细胞存活分数,促进放射诱导的乳腺癌细胞凋亡;但抑制miR-214-5p表达可增加MCF-7R细胞存活分数,抑制细胞凋亡。结论:沉默TUG1可通过上调miR-214-5p表达进而增加乳腺癌细胞的放射敏感性。

参苓白术散联合二甲双胍对糖尿病肥胖患者肠道菌群的影响及不良反应观察

研究参苓白术散联合二甲双胍对糖尿病肥胖患者肠道菌群、血糖的影响及不良反应情况。将84例明确诊断为2型糖尿病(T2DM)的肥胖患者随机分为2组,实验组用参苓白术散加二甲双胍治疗,对照组用二甲双胍治疗,持续治疗6个月。采集空腹静脉血及大便标本,检测血液中HbA1c、空腹血糖、胰岛素水平及大便中双歧杆菌、拟杆菌及肠球菌的DNA数量,分析血液中HbA1c与肠道菌群DNA的相关性,观察2组患者在实验期间的不良反应。结果显示:与用药前比较,T2DM肥胖患者用药治疗后空腹血糖及HbA1c水平明显降低、胰岛素水平明显增高(P<0.05),治疗3个月T2DM患者大便中双歧杆菌和拟杆菌的DNA数量明显增多,治疗6个月T2DM患者肠球菌DAN数量明显降低(P<0.05)。与对照组同时相点比较,实验组治疗3个月空腹血糖和HbA1c明显降低、胰岛素水平明显增高,大便中双歧杆菌的DNA数量明显增高,治疗6个月肠球菌明显降低、拟杆菌明显增多(P<0.05)。T2DM肥胖患者血液HbA1c水平与大便中双歧杆菌(r=-0.611)和拟杆菌DNA数量(r=-0.327)呈负相关、与大便中肠球菌DNA数量(r=0.237)呈正相关。在治疗期间实验组与对照组的不良反应情况无明显差异(P>0.05)。结果表明参苓白术散联合二甲双胍对T2DM肥胖患者的血糖降低效果更佳,其机理可能与增加肠道中双歧杆菌和拟杆菌的表达有关。