拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者后外周血T淋巴细胞亚群的变化研究

目的探讨拉米夫定治疗慢性乙型肝炎患者后外周血T淋巴细胞亚群状态的变化情况。方法 154例慢性乙型肝炎患者按照HBeAg表达不同分为HBeAg阳性组(83例)和HBeAg阴性组(71例),采用流式细胞技术检测研究对象外周血的CD4+和CD8+T细胞的表达情况;并观察两组患者均给予拉米夫定治疗24周后,患者的HBV-DNA、HBeAg、肝功能、CD4+和CD8+T细胞的变化情况。结果两组的CD4+T细胞均呈现不同程度的降低,而CD8+T细胞则相对较高,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);拉米夫定抗病毒治疗24周后,HBeAg阳性组患者已有60.2%的患者HBV-DNA低于检测下限并有HBeAg阴转,且丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)均有明显降低,同时CD4+和CD8+T细胞较治疗前均有明显上升趋势(P<0.05);HBeAg阴性组患者的HBV-DNA、ALT、AST等指标也呈明显降低,临床症状亦明显改善,CD4+T细胞的表达较治疗前明显提高(P<0.05),另有5例患者的病情未能得到有效控制,分析其外周血CD4+T和CD8+T细胞均有不同程度的表达下调。结论 T淋巴细胞在慢性乙型肝炎的发病及转归中起到非常重要的作用,且核苷(酸)类似物抗病毒药物可以增强患者的细胞免疫,提高CD4+和CD8+T细胞的表达。

慢性丙型肝炎患者外周血CD4^+ CD25^(high)调节性T细胞与抗病毒疗效的关系

目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)与抗病毒疗效的关系。方法选取83例完成抗病毒治疗和随访的慢性丙型肝炎患者作为研究对象(慢性丙型肝炎组)。分别在治疗前和治疗12、48周及随访24周时,采用流式细胞术检测外周血中CD4+CD25highTreg百分比,并进行血清丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量和肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)等指标的检测。设立正常对照组(n=32)。结果与正常对照组比较,治疗前慢性丙型肝炎组外周血中的CD4+CD25highTreg百分比和血清ALT、AST均显著升高(P<0.05)。在治疗12周时,32例患者获得早期病毒学应答(EVR),外周血CD4+CD25highTreg百分比和HCV-RNA定量结果与治疗前和未获得EVR患者比较,差异均有统计学意义(P<0.01),但血清ALT无明显变化。在治疗48周时,慢性丙型肝炎病毒学应答组(HCV-RNA定量结果低于最低检测限)(n=51)患者外周血中CD4+CD25highTreg百分比、HCV-RNA定量结果和血清ALT均显著低于治疗前和无病毒学应答组(n=32)(P<0.01),慢性丙型肝炎无病毒学应答组患者各项检测指标治疗前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗后随访24周时,病毒学应答组中有39例患者获得了持续病毒学应答(SVR),外周血中的CD4+CD25highTreg百分比、HCV-RNA定量及血清ALT均显著低于治疗前和未获得SVR患者(P<0.01);而未获得SVR患者的各项检测指标均较治疗结束时(48周末)明显升高(P<0.05)。结论慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗及随访过程中外周血中CD4+CD25highTreg百分比的变化对预测疗效和复发有一定的价值。

抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者外周血中Th17细胞及其相关细胞因子的影响

目的：探讨抗病毒治疗对慢性乙型肝炎（CHB）患者外周血中Th17细胞及其相关细胞因子的影响。方法：收集经恩替卡韦治疗的CHB患者56例,采用流式细胞术分别在治疗前、治疗12周及24周时检测患者外周血中Th17细胞、IL-17和IL-23的表达,同时检测患者的肝功能、HBV血清学标志物、HBV-DNA载量等。结果：与治疗前相比,治疗24周后Th17细胞频率、IL-17和IL-23的表达量均显著降低（P〈0.05）;HBV-DNA下降≥2 lg拷贝/m L组较下降1-2 lg拷贝/m L组的Th17细胞频率明显下降,HBe Ag血清学转换组的上述指标均显著低于治疗前和HBe Ag阳性组,ALT复常组的Th17细胞频率及IL-23均明显低于ALT异常组（P〈0.05）;Th17细胞频率与血清ALT水平呈正相关（r=0.593,P〈0.01）,但与HBV-DNA载量无明显相关性（P〉0.05）。结论：Th17细胞参与了CHB炎性反应过程,并可能促进了肝脏损伤;恩替卡韦在快速有效地降低HBV-DNA的同时还可以降低Th17细胞频率,并恢复其免疫功能。

抗病毒治疗对慢性HBV感染者外周血中PD-1和PD-L1的影响及其与血清HBV-DNA的关系

目的：探讨两种给药方案对慢性HBV感染者外周血中T淋巴细胞表面PD－1及其主要配体PD－L1的影响，以及其与血清HBV－DNA的关系。方法71例慢性HBV感染者按HBV－DNA载量不同分为＜3 lgIU／mL、3～6 lgIU／mL和＞6 lgIU／mL 3组，进入疗程后按照给药不同分为：拉米夫定组（LAM组）23例，拉米夫定＋阿德福韦酯联合治疗组（LAM＋ADV组）48例，分别于治疗的0、12和24周时，采用流式细胞仪检测患者外周血中CD4＋和CD8＋T细胞表面PD－1、PD－L1的表达，ELISA法检测外周血中γ－干扰素（ IFN－γ）的表达，同时检测HBV－DNA、肝功能、HBV血清学标志物等，并设立正常对照组26例。结果不同HBV－DNA载量患者的外周血中CD4＋和CD8＋T细胞表面PD－1、PD－L1的表达均明显高于正常对照组（ P＜0．05），且与HBV－DNA载量呈正相关（P＜0．05），而IFN－γ水平均明显低于正常对照组（P＜0．05）；抗病毒治疗后，两种治疗方案组患者的PD－1、PD－L1表达均有明显下降，除LAM组的CD4＋PD－L1＋外其他CD4＋和CD8＋T细胞表面的PD－1、PD－L1在治疗前与治疗12周和治疗24周均差异有统计学意义（ P＜0．05），其中LAM＋ADV组在降低的速度和幅度上均明显优于LAM组（P＜0．05）；IFN－γ的表达逐渐升高，至治疗24周时升至（24．55＆#177;5．81）pg／mL，明显高于治疗前（13．97＆#177;4．13）pg／mL（P＜0．05），但两治疗组间差异无统计学意义（P＞0．05）。结论慢性乙型肝炎患者外周血中CD4＋和CD8＋T细胞表面PD－1、PD－L1的表达与HBV－DNA载量呈正相关，抑制HBV的复制可以有效地降低负性调控因子PD－1、PD－L1的表达；LAM＋ADV联合治疗方案对PD－1、PD－L1降低的速度和幅度明显优于LAM的单一用药，更易提高T淋巴细胞的活性。

乙型肝炎病毒聚合酶基因变异检测及临床应用

目的 检测乙型肝炎病毒聚合酶基因变异并探讨其与拉米夫定疗效的关系。方法 对38例拉米夫定治疗(100 mg/d)48 w后血清HBV DNA阳性患者,采用聚合酶链反应(PCR)产物直接测序技术,检测其血清中HBV DNA P基因序列,并推导为相对应的氨基酸序列,同时和Genbank中标准株序列相比较。结果 G473→R和D477→N变异14例,M550→I变异12例,M550→V变异8例,L526→M变异10例,M550→V变异均伴有L526→M变异2例,M550→I变异伴有L526→M变异,未曾发现L526→M单独变异株,另外发现N(D)480→E 2例,N(D)480→S 2例,R485→H 1例,S505→T 2例,L510→M 1例,V537→I 1例,有11例HBV DNA阳性标本未检出变异。结论 乙型肝炎病毒P基因区YMDD变异和L526→M变异是影响拉米夫定疗效的主要因素,G473→R和D477→N联合变异可能是影响拉米夫定疗效的又一重要原因,P基因变异的检测有助于临床疗效观察。

甲胎蛋白异质体3对肝细胞癌的预测作用──附18例分析

目的:探讨甲胎蛋白异质体3(lentil lectin-reactive alpha-fetoprotein-L3,AFP-L3)对肝癌的预测作用。方法:抽取18例经影像学(B超、CT等)诊断未发现肝癌的肝硬化患者的静脉血5mL,采用国产微量离心柱法分离AFP-L3,用化学发光免疫法检测血标本中的甲胎蛋白和AFP-L3含量,以AFP-L3超过10%作为阳性判断标准。结果:18例肝硬化患者的AFP-L3分别为14%～75%,出院后分别接受3～18个月的随访,其中17例在出院后3～18个月内被诊断为肝癌。结论:AFP-L3阳性的肝硬化患者进展为肝癌的几率高,提示应对AFP-L3阳性的肝硬化患者进行密切随访,以便早期发现肝癌。

不同基因型慢性丙型肝炎患者血清HCV-RNA与载脂蛋白B的关系

目的研究慢性丙型肝炎基因1型和非基因1型患者血清HCV-RNA水平和血清载脂蛋白B(ApoB)的关系。方法临床确诊为慢性丙型肝炎的53例患者,采用干扰素联合利巴韦林抗病毒治疗至少24周,Simmonds酶切分型方法进行HCV基因分型,荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)定量检测HCV-RNA,全自动生化分析仪检测血清载脂蛋白B,对不同基因型患者血清HCV-RNA水平和载脂蛋白B的关系进行研究分析。结果基因1型和非基因1型慢性丙型肝炎患者的血清HCV-RNA及载脂蛋白B水平差异无统计学意义(P>0.05);基因1型患者血清载脂蛋白B水平与HCV-RNA载量无明显相关(P>0.05);非基因1型患者血清载脂蛋白B水平随着HCV-RNA载量的降低呈升高趋势(P<0.05)。结论不同基因型HCV对干扰素产生不同的应答反应,感染HCV基因1型的患者对干扰素治疗应答率显著低于基因2型和3型。不同基因型HCV感染者血清载脂蛋白B无显著差异,血清ApoB水平在非基因1型患者与干扰素抗HCV应答密切相关。

肝内静脉闭塞病的临床与病理诊断

目的通过分析肝内静脉闭塞病(HVOD)患者的临床和病理资料,旨在提高对该病的诊断水平。方法对5例HVOD患者的临床和病理资料进行回顾性分析,并结合文献总结HVOD的临床和病理学特点。结果该病临床表现为肝肿大、黄疸、腹水三大特征。组织学表现为肝小叶中央静脉及小叶下静脉内膜肿胀,管腔狭窄。中央静脉周围肝窦明显扩张、淤血伴有不同程度的肝细胞坏死,但网状纤维支架仍残留,部分区域中央静脉壁纤维化,整个病变过程不伴炎细胞浸润。结论HVOD发病与细胞毒性作用、免疫应答、凝血机制等多种因素异常有关,其晚期病死率高,应早期诊断。病理学检查是唯一的诊断标准。

肝细胞癌与肝炎后肝硬化中多种肿瘤标志物的比较

目的探讨多种肿瘤标志物在肝细胞癌和肝炎后肝硬化中的表达情况。方法采用多种肿瘤标志物蛋白芯片检测系统测定85例肝细胞癌患者和92例肝炎后肝硬化患者血清中肿瘤标志物(CA199、CEA、CA242、FER、AFP、CA125、CA153)的水平,并比较各指标在两组间的差异情况。结果 7项肿瘤指标在肝细胞癌和肝炎后肝硬化中都有不同程度的阳性表达,且CA242和AFP在两组肝病间的比较有明显的统计学意义。结论多种肿瘤标志物的联合检测对肝细胞癌的诊断有较高的临床参考价值,适合于无明显症状的门诊患者的筛查和肿瘤高危人群的普查。

抗病毒治疗对不同类型HCV感染者外周血中CD4^+CD25^(high)调节性T细胞的影响

目的:探讨抗病毒治疗对不同类型HCV感染者外周血中CD4+CD25high调节性T细胞(Treg)频率及其功能的影响。方法:收集急性丙型肝炎患者26例、慢性丙型肝炎患者65例、肝硬化患者52例和健康对照者32例,分别抽取患者在治疗初期、治疗后和随访24周时的外周血,采用流式细胞术分析Treg细胞的表达频率,同时检测患者HCV-RNA和肝功能,ELISA法检测IFN-γ、IL-2和IL-10等细胞因子。结果:(1)急性丙型肝炎组患者治疗前、治疗后和随访后外周血标本中Treg细胞占CD4+T细胞的百分含量与健康对照组无明显差异(P>0.05),但HCV-RNA和ALT均有较高的阴转率(80%以上)。慢性丙型肝炎组患者(12.32±4.51)%和肝硬化组患者(18.17±4.16)%外周血中Treg细胞频率均明显高于健康对照组(4.69±2.16)%(P<0.01),抗病毒治疗结束后[(7.66±4.03)%,(15.24±4.28)%]较治疗前均有明显下降(P﹤0.05),其中慢性丙型肝炎组有66.2%的患者获得了SVR,肝硬化组亦有40.4%的患者获得了SVR,且获得SVR患者的Treg细胞频率明显低于本组未获得SVR患者(P﹤0.05)。(2)慢性丙型肝炎患者抗病毒治疗后,获得SVR患者外周血中随着Treg细胞频率的下降IFN-γ和IL-2明显升高,而IL-10则明显降低(P<0.01);未获得SVR患者的IFN-γ和IL-2呈先升高后降低趋势,IL-10表达亦相反(P<0.05)。结论:Treg主要通过抑制HCV特异性Thl细胞反应来实现疾病的慢性化,通过抑制或去除Treg细胞来刺激HCV特异性免疫反应或许是治疗慢性HCV感染的一个新策略。

辅助性T细胞17在不同程度HBV感染者外周血中的表达情况及其与HBV-DNA和ALT的相关性

目的探讨辅助性T细胞17(Th17)在不同程度HBV感染者中的表达情况及其与HBV-DNA和ALT的关系。方法采用流式细胞仪检测86例HBV感染者(中度慢性乙型肝炎患者31例,重度慢性乙型肝炎患者25例,HBV相关性肝硬化患者16例,HBV相关性肝癌患者14例)和22例健康者外周血中Th17占CD4+T细胞的比例、白细胞介素17(IL-17)的水平,同时检测ALT及HBV-DNA水平。结果不同程度HBV感染者外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例和IL-17、ALT水平均明显高于健康对照组(P<0.05)。中度和重度慢性乙型肝炎组患者外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例及IL-17的表达水平均明显低于HBV相关性肝硬化组、HBV相关性肝癌组(P<0.05),但中度和重度慢性乙型肝炎组组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。HBV相关性肝硬化组患者的Th17细胞占CD4+T细胞的比例及IL-17的表达水平亦显著低于HBV相关性肝癌组(P<0.05)。不同程度HBV感染者外周血Th17细胞占CD4+T细胞的比例与HBV-DNA水平呈负相关(P<0.05),与ALT呈正相关(P<0.05)。结论不同程度HBV感染者外周血中Th17细胞及IL-17表达失调,增多的Th17细胞可能促进了肝细胞的损伤及炎症,并与HBV感染病情进展密切相关。

乙型肝炎病毒基因分型荧光PCR检测及临床应用

目的:了解乙型肝炎病毒基因分型、分布及其与肝功能损害、病毒复制水平的关系。方法:采集69例乙肝患者血样,采用荧光聚合酶链反应(PCR)检测乙肝病毒基因分型,通过荧光探针识别基因型特异性序列,采集分析荧光信号确定病毒基因型,分别检测谷丙转氨酶(ALT)水平、乙肝病毒e抗原(HBeAg)和HBV DNA含量。结果:69例乙肝患者中B型26例,C型43例。B型和C型患者的ALT水平分别为(453.54±447.93)U/L和(330.23±306.90)U/L(P>0.05);HBeAg阳性数分别为11例和23例(P>0.05);HBV DNA含量分别为(38.74±36.49)×104拷贝/ml和(34.53±34.09)×104拷贝/ml(P>0.05);不同临床类型乙肝患者中两种基因型的分布没有显著差异(P>0.05)。结论:本地区乙肝患者病毒基因型主要为B型和C型;二种基因型ALT水平、HBeAg表达水平、病毒复制水平以及肝炎病情均无显著性差异。

血清壳多糖酶3样蛋白1在诊断慢性乙型肝炎肝纤维化中的价值

目的探讨血清壳多糖酶3样蛋白1(CHI3L1)在诊断慢性乙型肝炎肝纤维化(CHB-LF)中的价值。方法选取30例CHB-LF患者为CHB-LF组,30例慢性乙型肝炎(CHB)患者为CHB组,以及30例健康体检者为健康对照组。采用酶联免疫吸附试验检测各组血清CHI3L1水平。比较各组血清CHI3L1水平;比较不同分期CHB-LF患者血清CHI3L1水平;分析血清CHI3L1诊断CHB-LF的效能。结果CHB-LF组血清CHI3L1水平明显高于CHB组和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。S4期CHB-LF患者血清CHI3L1水平高于S1、S2和S3期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征曲线分析结果显示,血清CHI3L1从健康人群中鉴别诊断CHB-LF的曲线下面积(AUC)为0.959(95%CI:0.913~1.000),灵敏度为90.0%,特异度为90.0%。血清CHI3L1从CHB患者中鉴别诊断CHB-LF的AUC为0.895(95%CI:0.819~0.971),灵敏度为83.3%,特异度为80.0%。结论CHB-LF患者血清CHI3L1水平明显升高,其可能参与了CHB-LF的发病过程,并可作为CHB-LF良好的诊断标志物。