蛋白质免染系统的应用、常见问题及改进

聚丙烯酰胺凝胶电泳是蛋白质分离的关键方式,随着蛋白质印迹法的应用,常被用作生物医学等方面分析的下游工具。近年来,近红外荧光材料膜的运用以及3D打印等新兴技术逐渐应用于组织工程中,对蛋白质免染系统提出了更高的定量要求。本文阐述了免染系统的原理,操作和分析中存在的问题及改进方法,并对免染技术的发展进行了展望,以期为实现标准免染技术对蛋白质的准确计量分析提供基础和思路。

一种基于蓝银法的快速、低毒染色法在SDS-PAGE中的应用研究

目的:目前聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)对蛋白质的染脱色过程耗时长,且染脱色试剂具有一定的毒性。方法:以蓝银(Blue silver)染色法为基础,对染色液的配方组分、固定时间、脱色时间、染液重复利用率等方面进行了优化。结果:优化后的蓝银法,其染色速度及灵敏度均得到了显著提高。将染色液中的甲醇替换为乙醇,在保证染色效果不变的同时,降低了染色液的毒性;电泳完成后固定30 min,即可获得较好的条带效果;凝胶仅用蒸馏水处理即可实现脱色的目的,且条带可在蒸馏水中保存6个月以上不褪色。结论:该方法在实验教学及大部分科学研究工作中均可满足操作者使用需要,达到缩短实验时间、降低成本、减少有害试剂使用的目的。