抗乙肝病毒卵黄IgY理化特性研究

用ELISA技术研究了抗乙肝卵黄免疫球蛋白(抗HBV-IgY)对温度、酸碱度、胃蛋白酶、胰蛋白酶及反复冻融的稳定性。在大于75℃的高温条件下,抗HBV-IgY是极不稳定的;在pH4.0～10.0范围内,抗HBV-IgY活性相对稳定;对胃蛋白酶具有良好的抵抗能力(pH>4.0),对胰蛋白酶非常敏感,经2h酶解处理,抗HBV-IgY的结合活性完全丧失;抗HBV-IgY具有很好的耐反复冻融的特性。

生物活性肽的营养生理功能及其应用

生物活性肽是对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物。它具有调节免疫、激发活性、抗菌及抗病毒等功能,还可以调节风味,增加食欲。综述了生物活性肽的来源、分类、主要营养功能、制备方法及其在动物生产中的应用,以期对动物生产与饲料工业起到一定的指导作用。

鸡外周血白细胞吞噬试验的研究

[目的]确定鸡外周血白细胞吞噬葡萄球菌的最佳条件。[方法]使用葡萄球菌10145为吞噬材料,以瑞士染色法检测鸡外周血白细胞的吞噬活性。通过正交试验研究吞噬时间、吞噬温度、葡萄球菌浓度对外周血白细胞吞噬百分率(PP)和吞噬指数(PI)的影响,并对其进行形态观察。[结果]细菌浓度是影响白细胞吞噬指数的主要因素,白细胞吞噬指数最高的条件为:温度41℃,时间40 min,菌液浓度为5×106个/ml。各因素对白细胞吞噬指数的影响程度为:细菌浓度>时间>温度。[结论]该研究为白细胞吞噬功能的检测提供了一种较为简便、可靠的方法。

以减毒鼠伤寒沙门氏菌为载体的重组HBsAg口服疫苗构建与鉴定

采用大量培养含有pcDNA3s的大肠杆菌,提取pcDNA3s质粒,利用电转化方法将pcD-NA3s质粒转化到感受态减毒鼠伤寒沙门氏菌,SDS-PAPG检测到930 bp大小的条带,基因序列分析到重组菌含有乙肝表面抗原(HBsAg)基因序列;观察重组菌体外传代培养的稳定性,该重组菌株在体外能稳定地繁殖、生长和传代。试验结果表明,携带HBsAg的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗X8786/pcDNA3s已成功构建,为研究和应用人和动物治疗用乙型肝炎病毒口服基因工程活疫苗奠定了基础。

携带pcDNA3s与EGFPC3质粒的重组减毒沙门氏菌的免疫性与EGFP的表达

目的研究HBsAg DNA重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的免疫性与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因EGFPC3在小鼠体内的表达。方法将质粒pcDNA3s与pEGFPC3分别电转化减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786,构建重组减毒鼠伤寒沙门氏菌SL8786/EGFPC3与SL8786/pcDNA3s。利用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测小鼠的血清抗体的含量,以及重组菌引起的T细胞增殖和细胞毒性T淋巴细胞(CTL)应答。用荧光显微镜观察EGFPC3表达。结果口服SL8786/p cDNA3s免疫小鼠后,可诱导产生较强的特异性CTL应答。口服免疫小鼠后第11周抗-HBs含量最高。用流式细胞术检测贴壁培养的2只小鼠的脾细胞中SL8786/EGFPC3阳性率分别为19.20%和17.36%,而SL8786/pcDNA3口服的2只小鼠脾细胞中的EGFP阳性率分别仅为1.95%和1.63%。给小鼠口服SL8786/EGFPC33周后,在小鼠肝脏、脾脏、肾脏、胸腺、十二指肠及肌肉等组织中,均有EGFPC3的表达。结论口服SL8786/pcDNA3s在小鼠体内诱导了特异性细胞和体液免疫应答。携带EGFPC3的重组鼠伤寒沙门氏菌SL8786/EGFPC3在小鼠的部分组织中产生绿色荧光表达,该重组菌的构建为减毒沙门氏菌作为活载体基因工程疫苗的研制提供了一个优良模型。