黄连解毒汤调控肠道菌群介导的色氨酸代谢干预帕金森病作用机制研究

目的 基于16S rRNA技术及非靶向代谢组学技术,分析黄连解毒汤对帕金森模型小鼠肠道菌群及代谢产物的影响,探究黄连解毒汤干预帕金森病(PD)的作用机制。方法 通过皮下注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP,20 mg·kg^(-1)·d^(-1))联合丙磺舒(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))腹腔注射诱导帕金森小鼠模型,给予黄连解毒汤干预后,测定小鼠的体质量、行为学指标;采用HPLC-QTRAP-MS/MS技术检测小鼠纹状体神经递质的水平;采用ELISA法检测小鼠纹状体炎性因子的水平;采用16S rRNA技术分析小鼠肠道菌群的变化;采用UHPLC-Q-TOF-MS检测小鼠粪便、纹状体内源性代谢物水平,结合主成分分析(PCA)及正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)筛选潜在的差异代谢物,导入MetaboAnalyst 5.0预测与PD有关的代谢途径。结果 黄连解毒汤显著改善帕金森小鼠的运动症状及神经炎症(P<0.01),调节小鼠神经递质水平(P<0.01),并纠正帕金森模型小鼠的肠道菌群紊乱,表现为肠道微生物多样性增加、菌群轮廓的恢复等。黄连解毒汤治疗后显著增加帕金森模型小鼠肠道中普雷沃氏菌、阿克曼菌等的丰度,下调梭状菌的丰度,并主要通过对帕金森模型小鼠粪便、纹状体中色氨酸代谢通路进行调节,恢复异常代谢产物水平。结论 黄连解毒汤显著改善帕金森模型小鼠的病理损伤,调节紊乱的肠道菌群及色氨酸代谢通路可能是黄连解毒汤干预PD的潜在机制。

复方龙垂草水煎剂对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究复方龙垂草水煎剂对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制初探。方法预给药7 d后,于末次给药后1 h采用腹腔注射的方法注射0.2%CCl4复制小鼠急性肝损伤模型,16 h后取血清检测血清中丙氨酸转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性;取肝脏计算肝指数,检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物岐化酶(SOD)指标变化,用Western Blot法检测肝脏组织中Caspase-3蛋白表达情况。结果复方龙垂草水煎剂可降低血清中ALT、AST(均P<0.01)活性,抑制肝组织中MDA(P<0.05)上升,上调SOD(P<0.01),抑制凋亡蛋白Caspase-3表达。结论复方龙垂草水煎剂对CCl4致小鼠急性肝损伤有一定的保护作用,其作用机制与抑制转氨酶及脂质过氧化有关,对CCl4诱导的凋亡信号通路也有抑制作用。

复方银杏叶制剂对酒精性肝损伤的防护作用及机制

目的观察银杏叶制剂(CGB)对酒精性肝损伤的防护作用。方法白酒-玉米油混悬液ig给予大鼠造肝损伤模型,连续10周,造模同时分别ig给予银杏叶提取物(GBE)0.8 g·kg-1,CGB 2.4,0.8和0.4 g·kg-1或联苯双酯0.15 g·kg-1。取血测定各组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)。并观察肝组织病理及肝细胞线粒体超微结构变化。采用"cocktail"探针药物法测定大鼠ig给予CGB前后血浆中相应的CYP2E1和CYP3A4酶探针氯唑沙宗和氨苯砜的血药浓度,并计算药代动力学参数。通过药代动力学参数的变化,评价CGB对CYP2E1和CYP3A4酶活性的影响。结果连续ig给予乙醇后,大鼠血清转氨酶显著高于正常对照组(P<0.01),与模型组比较,CGB 0.8和2.4 g·kg-1组ALT和AST显著降低(P<0.05);CGB 0.8和2.4 g·kg-1组肝匀浆MDA显著降低、GSH和SOD明显升高(P<0.05)。ig给予CGB前,模型组大鼠氯唑沙宗和氨苯砜的AUC0-24,cmax均较正常对照组显著降低(P<0.05);CGB可使正常大鼠血浆氯唑沙宗和氨苯砜AUC0-24下降(P<0.05),使模型组大鼠血浆氯唑沙宗和氨苯砜的AUC0-24和cmax显著升高(P<0.05)。结论 CGB对酒精性肝损伤有防护作用,其机制与氧化应激干预相关。

麻黄-甘草药对抑制过敏性哮喘的效应及机制初探

目的研究麻黄-甘草药对对过敏性哮喘的影响,并初步探讨其作用机制。方法建立屋尘螨(HDM)诱导的过敏性哮喘模型,造模同时给予麻黄-甘草药对提取物(MG)。使用无创肺功能仪检测小鼠气道反应性,HE染色观察小鼠肺组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肺组织的胶原沉积情况,进行血液嗜酸性粒细胞(EOS)计数,ELISA法检测支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织IL-4、IL-5、IL-13、TGF-β1及血清IgE的表达,免疫组化检测肺组织E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、α-SMA和TGF-β1蛋白表达情况。结果 MG可显著降低气道高反应性,抑制BALF及肺组织IL-4、IL-5和IL-13的表达,降低血液EOS及血清IgE的表达,并且减轻肺组织的炎症浸润及胶原沉积。进一步结果表明MG可抑制肺组织TGF-β1的表达,上调E-cadherin以及下调N-cadherin、Vimentin、α-SMA的表达。结论 MG能够通过抑制支气管上皮间质转化,从而缓解气道的炎症状态以及改善哮喘的气道重塑,进而发挥对过敏性哮喘的治疗作用。

栀子总环烯醚萜对抑郁模型小鼠神经递质的影响

目的探讨栀子总环烯醚萜对抑郁模型小鼠神经递质的影响。方法小鼠随机分为对照组、盐酸氟西汀组(20 mg/kg)、4个不同时间点模型组(2、6、12、24 h)和4个总环烯醚萜组(2、6、12、24 h,90 mg/kg),各组连续给药7 d,于末次给药后1 h,腹腔注射脂多糖(0.83 mg/kg)建立小鼠抑郁模型。采用强迫游泳实验检测小鼠抑郁行为,同时以LC-MS/MS分析小鼠海马区GABA、Glu、ACh、5-HT和DA水平。结果LPS注射后2 h和6 h,总环烯醚萜可以缩短强迫游泳小鼠的不动时间(P<0.01);同时总环烯醚萜可以降低2 h和6 h抑郁模型小鼠海马区Glu,ACh水平(P<0.01),并升高GABA、5-HT、DA水平(P<0.01)。结论栀子总环烯醚萜可以改善脂多糖诱导的抑郁模型小鼠的行为,其作用机制可能与总环烯醚萜调节GABA、Glu、ACh、5-HT和DA的水平有关。

马钱苷对AGEs致巨噬细胞极化的影响

目的观察马钱苷对晚期糖基化终末产物(AGEs)致巨噬细胞极化的影响。方法建立AGEs刺激巨噬细胞模型,设置空白对照组,模型组,氨基胍组,马钱苷低剂量组(1μmol/L)和马钱苷高剂量组(10μmol/L)。除空白对照组外,加入100mg/L的AGEs刺激24h后采用ELISA法检测细胞上清促炎性细胞因子IL-12、TNF-α和抑炎性细胞因子IL-10水平,采用流式细胞仪检测巨噬细胞M1型标记蛋白CD86和M2型标记蛋白CD206表达水平;免疫荧光法检测M1型标记蛋白iNOS和M2型标记蛋白CD206表达;Western blot法检测RAGE和巨噬细胞极化相关蛋白RBP-J、IRF8表达。结果 AGEs可上调IL-12、TNF-α水平(P<0.01),促进巨噬细胞iNOS、RAGE、RBP-J和IRF8蛋白表达(P<0.01);而马钱苷预孵能够下调IL-12、TNF-α水平(P<0.01),上调IL-10水平,抑制RAGE、iNOS、RPB-J、IRF8蛋白表达(P<0.05~0.01)。结论马钱苷可通过抑制RAGE/RBP-J/IRF8通路,抑制M1巨噬细胞极化,下调促炎因子IL-12、TNF-α水平,上调抑炎因子IL-10分泌,改善肾脏巨噬细胞炎症反应。

16HBE细胞上皮间质转化模型建立以及麻黄-甘草药对对其影响

目的 体外诱导人支气管上皮细胞(16HBE)上皮间质转化(EMT)最适条件摸索以及探讨麻黄甘草对EMT的影响。方法 以16HBE细胞株为研究对象,分别给予转化生长因子β1(TGF-β1)单一刺激以及血清饥饿联合刺激,运用Western blot法检测上皮及间质特征性蛋白的表达。运用免疫荧光检测E-Cadherin和N-Cadherin胞内表达分布情况。运用qPCR检测上皮及间质特征性基因的表达水平。血清饥饿联合TGF-β1刺激,给予麻黄甘草药对干预,Western blot法检测上皮及间质特征性蛋白的表达水平。结果 TGF-β1可诱导16HBE细胞由结构规则、质密均匀的鹅卵石状向纺锤体状转化。TGF-β1单独刺激可诱导16HBE细胞N-Cadherin、α-SMA蛋白表达升高,对E-Cadherin、ZO-1蛋白表达未见明显影响。而当细胞密度为15%时,血清饥饿联合TGF-β1可诱导16HBE细胞N-Cadherin、α-SMA、Vimentin、CollagenⅠ蛋白、基因水平升高以及E-Cadherin、ZO-1蛋白、基因水平降低,并且ECadherin蛋白分布紊乱,上皮结构破坏。血清饥饿联合TGF-β1刺激,麻黄甘草药对可抑制NCadherin、α-SMA的表达,并恢复ECadherin蛋白的表达,对ZO1无明显影响。结论 血清饥饿联合TGF-β1能体外诱导16HBE细胞建立稳定可重复的EMT模型,可用于体外研究哮喘发生EMT相关机制。麻黄甘草药对一定程度上可抑制16HBE细胞EMT过程。

银杏叶制剂中银杏酚酸研究进展

银杏叶具有很高药用价值,银杏叶提取物(GBE)中的黄酮醇苷与萜类内酯分别具有抗氧化、抗血小板聚集及改善记忆、增强免疫等药理作用。但银杏叶中含有的银杏酸(GA)有强致敏性及细胞毒性,即使在制剂中微量残留也能引起严重的不良反应。为减少银杏类制剂用药安全隐患,该研究从GA的化学结构,不良反应与毒性及发生机制,GA脱除与减毒等进行综述,期望为提高银杏叶制剂的安全性研究提供新思路。

黄连解毒汤中9种主要成分在大鼠脑组织中分布特征研究

目的建立灵敏、准确、可靠的小檗碱、小檗红碱、药根碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、京尼平苷和栀子黄素B在大鼠海马、皮层、纹状体和脑脊液组织中高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS-MS)分析方法,用于黄连解毒汤中9种主要成分在大鼠脑组织中分布研究。方法优化黄连解毒汤中9种主要成分及内标克拉霉素和氯霉素的质谱检测条件,确定分析条件并对方法学进行考察。正常大鼠ig给予黄连解毒汤,末次给药1 h后采集脑脊液、海马、皮层和纹状体样品,经处理后将该方法用于9种成分的测定。结果小檗碱、药根碱、巴马汀、黄芩苷、汉黄芩素、千层纸素A、栀子黄素B在1~250 ng/mL呈现良好的线性关系(r^2>0.99),小檗红碱在1~500 ng/mL具有良好的线性关系(r^2=0.9912),京尼平苷在5~500 ng/mL具有良好的线性关系(r^2=0.9995);各成分的日内、日间精密度RSD均小于12.94%,准确度均在-12.71%~6.91%;提取回收率均在88.02%~106.70%,基质效应均在88.92%~105.10%;短期、冻融循环和长期稳定性RSD均小于12.51%。各成分在海马、皮层和纹状体中的含量为小檗碱>黄芩苷>京尼平苷>小檗红碱>巴马汀>汉黄芩素>药根碱>千层纸素A>栀子黄素B;各成分在脑脊液中的含量为京尼平苷>小檗碱>小檗红碱>巴马汀>黄芩苷>栀子黄素B>药根碱>汉黄芩素>千层纸素A。结论该方法可用于大鼠脑组织中小檗碱、药根碱等9种成分含量的同时检测,并可用于这9种成分在大鼠脑组织分布研究,为探究黄连解毒汤治疗脑部疾病的物质基础提供依据。