钩藤药材的特征图谱建立、化学模式识别分析及其与不同基原、混伪品的鉴别

目的建立不同产地钩藤药材超高效液相色谱(UPLC)特征图谱,并进行化学模式识别分析,同时对钩藤不同基原样品及其混伪品进行鉴别。方法采用UPLC法建立43批不同产地钩藤药材的特征图谱,结合聚类分析及主成分分析对其进行质量分析,然后对钩藤不同基原样品及其混伪品进行鉴别。结果建立了钩藤药材UPLC特征图谱,标定了13个共有峰,并指认峰2为儿茶素、峰3为绿原酸、峰4为隐绿原酸、峰7为异绿原酸B、峰8为异去氢钩藤碱、峰9为异钩藤碱、峰10为去氢钩藤碱、峰11为异绿原酸C、峰12为钩藤碱和峰13为喜果苷。通过聚类分析可将43批钩藤药材按照产地分为5类。进一步通过主成分分析发现,江西、湖南产钩藤药材主成分综合得分较高,为0.264~2.904分。通过特征图谱可将钩藤不同基原样品及其混伪品进行有效区分。结论建立的UPLC特征图谱可用于钩藤药材的质量控制,且本研究发现江西、湖南产钩藤药材质量较优。

基于AHP-CRITIC权重分析法结合Box-Behnken设计-响应面法优化盐橘核水提取工艺

目的:优化盐橘核水提取工艺。方法:以柠檬苦素、诺米林、黄柏酮的转移率及出膏率为评价指标,利用混合加权法(AHP-CRITIC法)确定权重系数,计算多指标综合评分,并结合Box-Behnken设计-响应面法考察饮片粒度、加水量、提取时间的影响,优选盐橘核水提取工艺。结果:优选提取工艺为饮片粒度过6目筛网,一、二煎加水量分别为12倍、10倍,提取时间分别为1.0 h、0.5 h。结论:优选出的提取工艺稳定可行,可为盐橘核工业化生产提供参考。

基于指纹图谱及一测多评法的莲子心质量评价研究

目的:建立UPLC指纹图谱和一测多评法评价莲子心的质量。方法:采用UPLC法建立莲子心指纹图谱;采用一测多评法测定莲子心中莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱3种生物碱类成分的含量,通过与外标法比较,验证一测多评法的可行性和科学性。结果:建立的10批莲子心UPLC指纹图谱确定了10个共有峰,相似度均大于0.900;以莲心碱(S)为内参物,确定异莲心碱、甲基莲心碱的相对校正因子分别为1.1037、1.1039,莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱分别在0.09938~0.70053μg(r=0.9999)、0.10320~0.77400μg(r=0.9999)、0.22172~1.66287μg(r=0.9999)的进样量范围内与峰面积的线性关系良好。外标法与一测多评法的含量测定结果无显著性差异。结论:建立的方法准确、快速、可行,可用于莲子心的质量评价。

中药复方清达颗粒标准汤剂的研究

目的:通过研究中药复方清达颗粒标准汤剂质量指标,来优选工艺和制定质量标准。方法:依据医疗机构煎药规范,制备清达颗粒15批标准汤剂;采用UPLC建立清达颗粒标准汤剂特征图谱;采用一测多评法对清达颗粒标准汤剂中各药味指标成分进行含量测定,通过对15批次清达颗粒标准汤剂中出膏率、指标成分含量、转移率、特征图谱进行分析,建立清达颗粒标准汤剂物质基准。结果:根据15批清达颗粒标准汤剂测定结果,拟合建立清达颗粒标汤特征图谱对照图谱,清达标准汤剂中出膏率波动范围为13.92%~25.84%;清达标准汤剂天麻中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷及其衍生物总含量的波动范围为1.39%~2.90%,指标成分总含量转移率波动范围为50.64%~94.04%;钩藤中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱总含量的波动范围为0.04%~0.20%,指标成分总含量的转移率波动范围为14.24%~61.88%;莲子心中莲心碱、甲基莲心碱和异莲心碱总含量的波动范围为0.17%~0.59%,指标成分总含量的转移率波动范围为13.44%~42.66%;黄芩中黄芩苷和汉黄芩苷总含量的波动范围为5.43%~10.09%,指标成分总含量转移率波动范围为33.67%~62.52%。结论:本研究建立的清达颗粒标准汤剂质量指标合理,可用于清达颗粒工艺研究和质量标准制订。

清心解瘀方标准汤剂多指标成分含量测定及UPLC指纹图谱研究

目的制备18批清心解瘀方标准汤剂,对其物质基准进行研究。方法以标准汤剂丹酚酸B、阿魏酸、总生物碱和黄芪甲苷的含量、转移率,出膏率、含油量、指纹图谱相似度等为评价指标,建立清心解瘀方标准汤剂相关表征参数允许范围。利用中药指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)进行指纹图谱分析,采用聚类分析(CA)、主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA)对指纹图谱共有峰进行评价。结果共确定了18个共有峰,共有峰相似度均大于0.90。18批样品聚为2类,结合相似度结果,分析可能与不同产地饮片配伍有关。根据OPLS-DA VIP值结合载荷图,共筛选出3个影响批间样品质量的色谱峰,依次为丹酚酸B(14号峰)、盐酸黄连碱(10号峰)和阿魏酸(7号峰)。为减小批间样品的质量差异,保证制剂质量的一致性,在后续制剂生产中应尽量选择同一道地产区药材。结论清心解瘀方标准汤剂制备方法稳定,多指标含量测定方法简便、快捷,指纹图谱方法稳定、相似度高,可为该方后续制剂质量控制提供参考。

基于毒素多肽BmK NaTx-13的全蝎质控工艺研究

目的基于毒素多肽建立一种新型的全蝎质量检测工艺。方法从东亚钳蝎毒液中分离得到了一种新型钠通道毒素BmK NaTx-13,制备并鉴定了BmK NaTx-13的特异性抗体,并通过竞争性ELISA法检测全蝎提取物中的BmK NaTx-13的含量。结果建立的竞争性酶联免疫吸附法可快速检测全蝎提取物中的BmK NaTx-13的含量并呈现良好的浓度线性依赖。结论该研究为全蝎质控提供了一种快速免疫检测方法,为提升全蝎入药质量标准提供了借鉴。

乌梅浸膏真空带式干燥工艺的优化

目的优化乌梅浸膏真空带式干燥工艺。方法以加热温度、进料频率、履带频率为影响因素,水分、休止角、压缩度、枸橼酸转移率为评价指标,信息熵赋权法确定权重系数,正交试验优化真空带式干燥工艺。结果最佳条件为一、二、三区加热温度130、95、30℃,进料频率10 Hz,履带频率12 Hz,水分、休止角、压缩度、枸橼酸转移率分别为1.30%、42°、33.57%、98.30%,综合评分0.05480。结论该方法稳定可行,可为乌梅产业化开发提供数据支持。

一测多评法同时测定钩藤饮片中4种生物碱类化学成分

目的:建立超高效液相色谱法(UPLC)一测多评(QAMS)同时测定钩藤饮片中钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱4种化学成分含量的方法,并验证该方法的可行性和准确性。方法:以钩藤饮片的4种成分为指标成分,以异钩藤碱为内标,分别计算得到钩藤碱、异去氢钩藤碱与去氢钩藤碱的相对较正因子,实现QAMS同时测定钩藤饮片中4种生物碱类成分含量。结果:在线性范围内,钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的相对校正因子(RCF)分别为1.02、0.97、1.00、1.01,在不同实验条件下RCF的系统耐用性良好。结论:建立的以异钩藤碱为内标,同时测定4种钩藤生物碱的一测多评方法稳定、准确度高、适应性好,可用于钩藤饮片中4种生物碱类化学成分的含量测定。

经典名方半夏厚朴汤物质基准量值传递分析

目的:制备15批半夏厚朴汤物质基准,通过特征图谱、含量测定等方法对药材-饮片-物质基准全过程进行量值传递分析。方法:以物质基准中特征图谱、多指标成分含量、转移率、出膏率为评价指标,确定半夏厚朴汤物质基准相关表征参数范围。采用SPSS 23.0及SIMCA 13.0软件对特征图谱共有峰进行聚类分析、主成分分析和正交偏最小二乘法-判别分析。结果:特征图谱共确定了12个共有峰,相似度良好,且指认了6个特征峰,分别为咖啡酸(F2)、野黄芩苷(F8)、迷迭香酸(F9)、6-姜辣素(F10)、和厚朴酚(F11)、厚朴酚(F12)。其指标成分厚朴酚与和厚朴酚总质量分数为0.09%~0.40%,转移率为7.18%~18.96%;野黄芩苷的质量分数为0.13%~0.33%,转移率为46.04%~88.30%;迷迭香酸的质量分数为0.20%~0.74%,转移率为29.91%~72.94%;出膏率控制在9.01%~15.83%。统计分析表明,15批样品聚为2类,筛选出4个影响样品质量的色谱峰,依次为F9、F8、F3、F4。结论:采用特征图谱、出膏率及指标性成分含量、转移率相结合的评价模式,对经典名方半夏厚朴汤物质基准的量值传递过程进行分析,初步建立其物质基准质量标准,可为经典名方半夏厚朴汤的后续研发及相关制剂的质量控制提供参考。

基于UPLC指纹图谱及一测多评法的天麻标准汤剂质量评价研究

建立天麻标准汤剂中存在转化关系的6种成分的一测多评方法和指纹图谱,验证该方法的准确度及可行性,并对标准汤剂质量进行评价。采用超高效液相色谱技术,以天麻素为内标物,通过考察柱温、流速、不同色谱柱以及多点浓度校正,确定对羟基苯甲醇、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷与天麻素的相对校正因子。测定18批天麻标准汤剂总含量,计算相似度。比较标准曲线法,外标一点法和一测多评法测量结果,结果表明一测多评法,外标一点法和标准曲线法的含量测定结果无显著差异,通过分析不同产地标准汤剂结果可以看出,来源于安徽、云南制得天麻标准汤剂质量较优,陕西、湖北次之,甘肃相对较差,且多批次指纹图谱相似度均在0.90以上。以天麻素为内标物,一测多评测定天麻标准汤剂中天麻素、对羟基苯甲醇、巴利森苷E、巴利森苷B、巴利森苷C和巴利森苷等6个成分总含量,结合指纹图谱的方法准确、可行、快捷,可用于天麻标准汤剂质量评价体系的建立,亦可对天麻药材饮片等原料质量标准研究提供参考。

广藿香UPLC指纹图谱研究及基于网络药理学的广藿香潜在质量标志物预测

目的基于UPLC指纹图谱、质量标志物"五原则"和网络药理学,研究道地产区不同产地广藿香药材,预测广藿香治疗病毒感染和胃溃疡的潜在质量标志物。方法建立广藿香UPLC指纹图谱,利用SIMCA-P14.1分析软件对14批药材共有峰进行聚类分析,利用偏最小二乘法-判别分析(partial least squares-discrimination analysis,PLS-DA)筛选共有峰组间主要差异成分。基于质量标志物"五原则",对差异成分进行初步分析,进一步采用网络药理学,通过相应数据库检索差异成分、病毒感染和胃溃疡疾病靶点。采用David 6.8数据库对共有靶点进行基因本体(gene ontology,GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路富集分析,同时构建"成分-靶点-疾病-通路"网络,分析广藿香主要活性成分和关键靶点。结果UPLC指纹图谱研究结合聚类分析结果显示,广东省2个产地广藿香药材存在一定差异。经PLS-DA分析,筛选出4个差异成分,依次为毛蕊花糖苷、广藿香酮、紫葳新苷和列当苷。根据质量标志物"五原则"结合网络药理学分析结果,预测广藿香主要活性成分为广藿香酮和毛蕊花糖苷,两者主要通过作用于ERBB2、EGFR、TLR4、AKT1、TNF靶点,调控TLR、ErbB、MAPK等信号通路,发挥抗病毒、调节肠胃功能等作用。结论建立的UPLC指纹图谱方法简便,筛选的2个活性成分毛蕊花糖苷和广藿香酮可作为广藿香潜在的质量标志物,为广藿香药材质量的控制和药效相关机制的研究提供参考。

莲子心药材含量测定标准修订建议

目的:改进并优化莲子心中有效成分莲心碱、异莲心碱和甲基莲心碱的含量测定方法,为《中华人民共和国药典》中莲子心含量测定标准修改提供参考。方法:建立莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱一测多评测定方法。在全国道地产区和主产区取样38批样品,对其进行含量测定,确定莲子心中莲心碱含量范围和莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱总含量范围。结果:莲心碱含量均值为0.156%,范围为0.019%~0.763%,仅31.579%符合《中华人民共和国药典》标准。莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱总量均值为1.586%,范围为0.659%~2.059%。结论:建议莲子心药材质量标准中含量测定指标由莲心碱修改为莲心碱、异莲心碱、甲基莲心碱总量,含量限度建议定为不得低于1.10%。