洋葱提取物对结肠癌细胞增殖的抑制作用

目的:研究洋葱水提取物和乙醇提取物中黄酮类化合物的含量及其各自对结肠癌细胞株增殖的抑制作用.方法:采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量.体外培养结肠癌细胞株(LoVocells、SW480cells、HT-29cells、HCT-8cells),采用不同浓度的黄酮类化合物(0、2.5、5、10、20、40、60、80mg/L)对其进行干预,WST-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株增殖的抑制作用.结果:洋葱水提取物中黄酮类化合物含量较乙醇提取物高.WST-8法检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的抑制作用具有剂量和时间依赖性,且72h时水提取物较乙醇提取物对结肠癌细胞株(SW480)增殖抑制(%)更显著(10mg/L:37.77±5.84vs17.36±5.24;20mg/L:52.35±5.72vs24.15±5.54;40mg/L:68.17±7.76vs32.79±6.02;60mg/L:71.08±8.16vs47.55±2.45;80mg/L:76.00±5.87vs60.35±6.61,均P<0.05).结论:洋葱水提取物和乙醇提取物对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制有待进一步研究.

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株抑制作用的体外研究

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株(LoVo细胞、SW480细胞、HT29细胞、HCT-8细胞)增殖的抑制作用及对细胞凋亡和细胞周期的影响,研究其对结肠癌的抑癌机制。方法体外培养结肠癌细胞株,采用不同浓度的EGCG(10,20,35μg/ml)对其进行干预,MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株增殖的抑制作用;用流式细胞仪检测EGCG对结肠癌细胞株凋亡和细胞周期的影响。结果 MTT法检测EGCG对结肠癌细胞株的抑制作用均具有浓度依赖性,且HT29细胞株尚具有时间依赖性。流式细胞仪检测EGCG能增强结肠癌细胞株的凋亡率,且剂量与凋亡率呈正相关。EGCG能将SW480细胞和LoVo细胞细胞周期阻滞在G0/G1期,阻碍其向S期转换,将HCT-8细胞阻滞在G2/M期,阻碍其向M期转换,将HT29细胞阻滞在S期,阻碍其向G2期转换,抑制结肠癌细胞株的增殖。结论EGCG对体外培养的结肠癌细胞株的增殖有明显抑制作用,其作用机制与增强细胞凋亡和影响细胞周期有关,具体作用机制有待进一步研究。

结肠癌干细胞的肿瘤形成特征及其临床价值

目的:研究结肠癌干细胞的肿瘤形成价值及其可能的临床价值.方法:对结肠癌干细胞进行无血清培养,以流式细胞仪检测CD133和CD44表达,以5-氟尿嘧啶(5-flurouracil,5-Fu)处理结肠癌干细胞并观察其增殖抑制,对结肠癌干细胞进行动物实验以确定其成瘤特征.结果:Hoechest33342染色后,HT-29干细胞相对于HT-29细胞有明显的核拒染现象;流式细胞仪发现HT-29细胞CD133阳性表达比率为44.6%,C D44阳性表达比率为0.6%;而经过培养提纯后的HT-29干细胞CD133阳性表达比率为92.6%,CD44阳性表达比率为97.8%,C D 1 3 3与C D 4 4阳性表达比率显著提高;HT-29干细胞相对于HT-29细胞对5-Fu有明显的耐药作用,HT-29细胞IC50值为1.394μg/m L,HT-29干细胞的IC50值为13.087μg/m L,IC50值有明显的增高在恢复血清培养后,体外增殖活性明显增强;HT-29干细胞体内生长速度比H T-29细胞体内生长速度显著要缓慢,H T-29细胞的肿瘤体积是HT-29干细胞肿瘤体积的两倍多;HT-29干细胞在小鼠富血管区(腋下和腹股沟淋巴结)的生长速率比皮下生长速率有明显的提高,但与HT-29细胞的生长速率还有明显差距.结论:在结肠癌细胞株存在结肠癌干细胞,通过无血清培养能分离出具有干细胞特征的结肠癌干细胞株,结肠癌干细胞对5-Fu具有耐药性,在适当微环境下其能快速生长,转化为成熟的结肠癌细胞,提示了改变结肠癌干细胞微环境可能是防止肿瘤复发的一个途径.

洋葱提取物对人结肠癌细胞凋亡及周期的影响

目的研究洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡及细胞周期的影响。方法采用水提取和乙醇提取洋葱后,用紫外可见分光光度仪检测提取物中黄酮类化合物含量。体外培养结肠癌细胞株(LoVo cells、SW480 cells、HT-29 cells、HCT-8 cells),采用含黄酮类化合物浓度40 mg/L和60 mg/L的提取物对其进行干预,流式细胞仪检测洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株凋亡影响,检测含黄酮类化合物浓度为40 mg/L的水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞周期的影响。结果洋葱水提取物和乙醇提取物对结肠癌细胞株的凋亡具有剂量依赖性,其中水提取物引起SW480、HCT-8细胞株凋亡率较乙醇提取物高。而乙醇提取物引起HT-29细胞株凋亡率较水提取物高。洋葱提取物能将结肠癌细胞株的细胞周期阻滞在G1期,阻碍其向S期转换,以抑制细胞增殖。结论洋葱水提取物和乙醇提取物能够诱导结肠癌细胞株的凋亡,并能够对结肠癌细胞周期产生影响,其具体机制需进一步探讨。

表没食子儿茶素没食子酸酯对LoVo和SW480结肠癌细胞的作用机制

目的:探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对结肠癌细胞株LoVo细胞和SW480细胞的作用及其可能的机制。方法:采用不同浓度的EGCG(0、10、20、35μg/mL)对LoVo细胞和SW480细胞进行处理,MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期变化;实时荧光定量PCR检测细胞HES1与JAG1基因的表达情况。计量资料采用采用t检验,计数资料采用χ2检验。结果 10、20、35μg/mL EGCG对LoVo细胞和SW480细胞增殖均具有抑制作用,抑制率均在EGCG浓度为35μg/mL时达到最高,其抑制作用且呈浓度依赖性,不具有时间依赖性。经0μg/ml ECCG处理后LoVo细胞、SW480细胞凋亡率分别为7.72%,16.43%。经20、35μg/mL ECCG处理后,LoVo细胞和SW480细胞凋亡率分别为15.1%,19.13%和21.4%,40.81%,与0μg/mL ECCG处理后比较,差异有统计学意义((χ2=6.765,19.702,P<0.05)。35μg/mL EGCG能将LoVo细胞和SW480细胞的细胞周期阻滞在GO/G1期,阻碍其向S期转换。35μg/mLEGCG能下调LoVo细胞HES1基因和JAG1基因的表达水平(t=7.686,10.92,P<0.05)。结论:EGCG对体外培养的LoVo细胞和SW480细胞增殖有明显的抑制作用,且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期。其作用机制可能与下调HES1及JAG1的基因表达及激活Notch信号转导途径有关。

无支撑回肠造口在低位直肠切除术中应用的有效性和安全性分析

目的:评价无支撑回肠造口在低位直肠切除术中应用的安全性和有效性。方法:回顾性分析2007年10月～2010年12月南京中医药大学第三附属医院全国肛肠医疗中心对67例采用无支撑的回肠造口术的临床资料。结果:本组患者平均年龄54岁,14例(20.8%)出现术后并发症。7例(10.4%)患者造口出现水肿,未经特殊处理,约2周后恢复正常;4例(5.9%)患者出现造口周围皮肤炎,经对症治疗后好转;2例(3.0%)患者出现造口旁疝,1例(1.5%)患者于术后4个月时出现造口脱垂,未进行特殊处理;未发生造口回缩。结论:本组较大样本、较长的随访时间证实无支撑回肠造口具有制作简单、安全性好、粪便转流彻底、并发症少、易于护理、易于还纳等优点,具有良好的安全有效性,可较好地应用于低位结肠肛管吻合术中的预防性回肠造口,而且造口还纳后的并发症低于文献报道。

肿瘤干细胞调节基因Hes1在结直肠癌中的表达及其临床意义

目的探讨肿瘤干细胞调节基因发状分裂相关增强子1（Hesl）在结直肠癌中的表达及其临床病理特征与肿瘤预后之间的关系。方法前瞻性收集2004年8月至2006年9月，在南京中医药大学第三附属医院全国肛肠医疗中心行手术治疗的结直肠癌患者，146例结直肠癌患者建立队列，男84例（57．5％）、女62例（42．5％），平均年龄（61±11）岁。对患者肿瘤标本建立组织芯片并采用免疫组织化学方法检测Hesl基因表达，对患者随访并对相关资料进行统计学处理。结果在146例结直肠癌标本中，Hesl阴性或弱阳性表达占8％（12／146），阳性（＋）为77％（112／146），而阳性（＋＋）为15％（22／146）；单因素分析结果显示Hesl基因表达与分化程度有关（P=0．033）。134例成功随访，随访率91．8％，平均随访时间（42±13）个月，以Kaplan—Meier生存曲线估计该组患者总1年生存率93％（136／146）、总3年生存率74％（108／146）、总5年生存率67％（98／146）。肿瘤的预后与TNM分期和病理学类型均相关（均P：0．000），与Hesl基因表达不相关（P=0．267）。结论肿瘤干细胞调节基因Hesl表达与分化程度有关，多因素分析显示Hesl与生存不相关。

一种新型大量粪便肠黏膜提取方法在结直肠癌筛查中的应用

目的探讨一种新型的大量粪便肠黏膜提取方法在结直肠癌筛查中的应用。方法收集2014年3—4月间，于南京中医药大学第三附属医院拟行手术治疗的10例结直肠癌患者术前1次完整粪便标本和手术切除癌组织标本。同时收集6例肠镜检查未见异常的6例同期住院患者的肠黏膜组织及1次完整粪便标本。使用自制的肠黏膜收集器（该肠黏膜收集器由上、中、下3个体积为1000ml容器组成，3层底部均分别有层滤网，孔径分别为100、200及300目，逐层过滤后收集液体）肠黏膜脱落细胞，采用粪便DNA试剂盒提取脱落细胞DNA，检测DNA浓度及纯度（A260/A280），并对提取的粪液以及肠黏膜组织进行甲基化测序。结果DNA甲基化测序发现，FBN1、SPG20及SNCA基因在lO例结直肠癌患者的癌组织和粪便提取液标本中CpG岛均出现甲基化。而在6例对照患者的活检肠黏膜和粪便提取液标本中均未发现甲基化。粪便重量在100g以下时，粪液收集率在60％～80％之间；粪便重量超过100g后，粪液收集率不稳定；粪便重量在50～100g之间时，DNA的A260/A280值在1．6～1．8之间，浓度在5．0～56．1μg／ml之间。结论本研究采用自行设计的大量粪便肠黏膜收集器一次性处理50～100g粪便时，粪液收集率较为稳定，可获取纯度和浓度较高的DNA，达到检测结直肠肿瘤甲基化状态的需要，便于结直肠癌的筛查。

Notch信号转导途径配体基因JAG1和DLL1在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨Notch信号传导途径配体基因JAG1和DLL1在结直肠癌的表达及其与临床病理特征和肿瘤预后之间的关系。方法回顾性分析2004年8月至2006年9月在南京中医药大学第三附属医院全国肛肠医疗中心行手术治疗的146例结直肠癌患者的临床及随访资料．建立患者肿瘤标本组织芯片并对JAG1和DLL1基因表达进行免疫组织化学检测。结果146例患者JAG1表达与其肿瘤分化程度有关．DLL1表达在不同肿瘤部位的表达差异有统计学意义（均P〈0．05）；两种基因表达与微卫星不稳定状态之间差异无统计学意义（P〉0．05）。134例（91．8％）患者获随访，随访时间（42．3±13．3）个月。无瘤生存86例（64．1％），1、3和5年总生存率分别为93％、74％和67％。多因素分析显示，患者预后与TNM分期、病理学类型、微卫星状态、JAG1基因表达有关（P〈0．05）。JAG1基因高表达患者预后优于阴性表达和弱阳性表达的患者（P〈0．05）。结论Notch信号转导途径配体基因JAG1和DLL1表达分别与肿瘤分化程度及肿瘤部位有关．JAG1基因与预后有关。

肛管癌的诊疗现状

肛管癌是一种发病率正在不断上升的临床少见恶性肿瘤,属于结直肠癌,但诊治特点不完全相同。多数肛管癌患者合并有乳头状瘤病毒感染和免疫抑制,以放射化学治疗为主的综合治疗是局限期肛管癌的标准治疗,多学科治疗可以提高患者的生存期,改善生活质量。该文对肛管癌的诊疗现状作一综述。

评价直肠癌手术质量相关指标的回顾性研究

目的研究直肠癌手术质量控制指标,建立及时、客观和合理的直肠癌手术质量评价体系。方法对2009年11月至2011年12月收治的230例直肠癌患者作为研究对象,分析2位主诊医师团队的手术时间、术中出血、术后通气时间、术后吻合口漏、术后肛门功能和局部复发率,并进行统计学分析。结果总手术时间平均(146±27)min,总术中出血量(105±4)ml,术后总平均通气时间(3.78±1.31)d,吻合口漏发生率1.3%,86.4%(102/118)患者控便功能基本正常(以得分0～5分患者统计),本组7例患者发生局部复发,局部复发率3.0%。2位主诊医师团队在手术时间、术中出血、手术后通气时间、手术后吻合口漏、手术肛门功能和局部复发差异无统计学意义。结论手术时间、术中出血、术后通气时间、吻合口漏、肛门功能和局部复发等6个指标作为直肠癌手术质量控制的理想指标,合格的直肠癌手术医师至关重要。

内镜测量结直肠侧方发育肿瘤直径的应用价值

目的 探讨内镜测量结直肠侧方发育肿瘤（LST）直径的准确性及临床应用价值.方法 选取2013年8月至2014年10月南京中医药大学第三附属医院收治的54例结直肠LST患者进行前瞻性研究.行内镜检查确定为结直肠LST后,采用内镜下刻度活组织检查钳、内镜下测量系统和病理学检查分别测量结直肠LST的纵轴和横轴长度.采用门诊和电话方式进行随访,随访时间截至2014年12月.符合正态分布的计量资料采用（x）±s表示,多组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验.结果 筛选出符合研究条件的患者54例.54例患者共检出结直肠LST 62枚,其中横结肠息肉1枚,升结肠和盲肠息肉13枚,降结肠息肉6枚,乙状结肠息肉24枚,直肠息肉18枚.采用内镜下刻度活组织检查钳测得62枚结直肠LST的纵轴长度为（1.1±0.5）cm,内镜下测量系统为（1.1±0.5）cm,病理学检查为（1.0±0.4）cm,3者比较,差异无统计学意义（F=1.306,P＞0.05）.采用内镜下刻度活组织检查钳测得62枚结直肠LST的横轴长度为（1.1±0.6）cm,内镜下测量系统为（0.7±0.4）cm,病理学检查为（0.7±0.4）cm,3者比较,差异有统计学意义（F=9.214,P＜0.05）.内镜下刻度活组织检查钳测得结直肠LST的横轴长度与内镜下测量系统和病理学检查分别比较,差异均有统计学意义（t =7.074,9.852,P＜0.05）.54例患者术后均获得随访.中位随访时间为10个月（2 ～16个月）.54例患者均健康生存,无肿瘤残留、复发和癌变.结论 采用内镜下刻度活组织检查钳和内镜下测量系统测量结直肠LST纵轴长度准确可靠,而测量横轴长度,采用内镜下测量系统更准确.

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌细胞株HCT-8和HT29的抑制作用及影响机制

目的探讨绿茶提取物表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对结肠癌细胞株HCT－8细胞和HT29细胞增殖的抑制作用，研究其对HESl与JAGl基因表达的影响。方法体外培养HCT-8细胞和HT29细胞，采用不同浓度的EGCG（10、20、35mg／L）对其进行干预，MTT法检测EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞增殖的抑制作用：用流式细胞仪检测EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞细胞凋亡和细胞周期的影响。实时荧光定量PCR检测EGCG干预后的HCT-8细胞和HT29细胞的HESl与JAGl基因的表达情况。结果EGCG对HCT-8细胞和HT29细胞增殖及凋亡均有影响，3个EGCG浓度对HCT-8增殖抑制率分别为（28．894±5．076）％，（34．903±1．794）％和（39．028±0．105）％；对HT29的增殖抑制率分别为（14．682±4．244）％、（22．429±3．847）％和（29．840±5．076）％。EGCG能将HCT-8细胞阻滞在G／M期，阻碍其向M期转换，将HT29细胞阻滞在S期，阻碍其向G2期转换，抑制其细胞增殖。EGCG可下调两株细胞HESl的基因表达，但差异均无统计学意义（P〉0．05）：EGCG能上调两株细胞JAGl的基因表达，但只有HCT．8细胞的基因表达差异有统计学意义（O．201±0．018比0．440±0．077．P=0．029）。结论EGCG对体外培养的HCT-8细胞和HT29细胞的增殖有明显抑制作用．且能诱导细胞凋亡和影响细胞周期。其作用机制可能与上调JAGl的基因表达有关。

浅析便秘病因及治法

便秘是指粪便秘结不通,使排便周期延长,或是排便周期正常,但粪质干结,排出艰难,或是粪质不硬,虽有便意,但便而不畅,需药物或其他方式辅助排便的疾病[1],其发生率随着年龄的增长而逐步增加。西医治疗便秘常采用泻剂或灌肠的方式,虽然能缓解病情,但治标不治本,中医对于功能性便秘的治疗有较大的优势,它针对患者不同的病因和临床表现,分别采用不同的治疗方法,通过辨证论治,达到标本兼治的目的。本文就2011年至2014年533例门诊患者病例及有关文献综述如下。

表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HCT-8和HT29细胞株的作用及对Notchl与Notch2的基因表达的影响

表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）是茶多酚中含量最高、活性最强的单体，具有抗癌作用。本研究旨在观察EGCG对结肠癌细胞HCT-8和HT29细胞增殖的抑制作用及对Notch1与Notc2基因的影响，探讨其抑癌机制。

结直肠肿瘤DNA甲基化标志的筛选及诊断价值

目的筛选有潜在诊断价值的甲基化基因，探讨其在国人结直肠肿瘤中的甲基化特征，以期寻找有较高诊断价值的DNA甲基化筛查标志。方法收集2013年6—8月期间于南京中医药大学第三附属医院接受手术治疗的10例结直肠癌患者的肿瘤及其距离肿瘤10cm以上组织标本及接受内镜下切除的10例结直肠腺瘤患者的组织标本。分别采用BSP法和qMSP法检测上述标本中SNCA、MAL、INA、SPG20、FBN1、CNRIP1、TFP12和0sMR8个基因的甲基化特征，筛选出有潜在筛查价值的基因，并绘制接受者工作特征（ROC）曲线。结果BSP法检测的8个基因中，SNCA、SPG20和FBN1基因在癌和腺瘤组织中100％检测到甲基化，而在癌旁组织中均未检测到甲基化：其余5个基因在癌、癌旁和腺瘤中均有不同程度表达。qMSP法检测的10对癌与癌旁组织中的SNCA甲基化阳性例数分别为5例和1例，SPG20分别为8例和1例，FBN1分别7例和0例，差异均有统计学意义（分别P=0．070、P=0．003和P=0．007）。SNCA、SPG20和FBN1基因甲基化诊断结直肠癌的ROC曲线下面积（AUC）分别为0．890、0．730和0．880。结论SNCA、SPG20和FBN1对于结直肠肿瘤为具有潜在筛查价值的基因。

腹腔镜腹膜外乙状结肠造口的制作及应用

目的探讨腹腔镜下腹膜外乙状结肠造口的安全性和可行性。方法前瞻性入组2011年7月至2012年7月间南京中医药大学第三附属医院肛肠中心收治的36例行腹腔镜腹会阴联合切除术的低位直肠癌患者，按随机数字表法分为腹膜内造口组和腹膜外造口组，每组18例。术后随访4～16（中位7）月，比较两组患者造口并发症情况。结果腹膜外造口组1例患者因乙状结肠近端拖出后肠壁血供障碍而改行腹膜内造口，故后续的分析中予以剔除。腹膜外造口组手术时间[（25．3±8．5）min]稍长于腹膜内造口组[（14．7±6．4）min]，但差异无统计学意义（P〉0．05）。两组各有1例术后早期（4周以内）出现造口缺血，均行造口重建手术；腹膜外造口组术后造口水肿发生率明显高于腹膜内造口组[35．3％（6／17）比0，P〈O．05]；两组术后早期总并发症发生率差异无统计学意义[58．8％（10／17）比27．8％（5／18），P〉O．05]。腹膜外造口组后期（超过4周）未出现并发症；腹膜内造口组出现1例造口脱垂、1例造口狭窄和2例造口旁疝，并发症发生率为22．2％（4／18），两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论腹腔镜腹膜外乙状结肠造口操作并不比腹膜内造口复杂。且其后期造口并发症明显少于腹膜内造口。

内镜下运用刻度活检钳进行息肉大小测量的临床价值

目的探讨一次性刻度活检钳在内镜下测量息肉大小的准确性。方法从一次性活检钳钢丝的起始部开始，以医用颜料刻画间隔为1mm的刻度制作刻度活检钳，作为在内镜下评估肿瘤大小的标尺，前瞻性估计南京中医药大学第三附属医院全国肛肠医疗中心2013年5—6月间内镜检查发现的58枚（43例患者）结直肠息肉的大小，并比较其与内镜下常规估计值及圈套切除后直接测量值的差异。结果58枚结直肠息肉切除后，息肉实际测量的最大径为（1．02±0．84）cm，其中小于1cm者36枚，1～2cm者15枚，大于2cm者7枚。内镜下常规估计的息肉最大径为（1．29±1．07）cm，与实际测量值的差异有统计学意义（P=0．000）；内镜下刻度活检钳评估的息肉最大径为（1．02±0．82）cm，与实际测量值的差异无统计学意义（P=0．775）。内镜下常规估计值与实际测量值的比值为1．29±0．31，而刻度活检钳估计值与实际测量值的比值为1．02±0．11，差异有统计学意义（P=O．000）。内镜下刻度活检钳估计对息肉大小的判断准确率为77．6％（45／58），明显高于内镜下常规估计[19．0％（11／58），P=0．000]。结论使用内镜下刻度活检钳作为“标尺”，对息肉大小判断，其判断准确性较内镜下常规凭经验进行估计明显提高。

内镜下病变测量系统的临床应用

内镜下病变的大小与其性质和治疗方案存在直接关系，但是目前内镜下判断病变大小尚无统一的标准，多数医师根据自己的经验进行估算，但这种估算结果与病变实际大小有时相差甚远。Eichenseer等对15位内镜专家的内镜下估计大小在10—25mm的息肉与组织病理学固定后的标本进行了比较测量，发现内镜下息肉估计大小和病理标本大小的平均变异为73．6％，62．6％的息肉的大小被不准确估计，