禽流感HA基因密码子优化的DNA疫苗构建及其免疫原性的初步研究

目的构建H5N1亚型禽流感病毒株密码子优化的血凝素(HA)DNA疫苗并研究其免疫原性。方法应用MacVector软件分析H5N1亚型禽流感病毒A/VietNam1203/04株HA(H5-VNHA)基因序列,对这些序列进行密码子优化处理,人工合成优化后的H5-VNHA基因。将密码子优化H5-VNHA基因与pSW3891质粒连接,并以人组织纤维蛋白溶酶原激活剂(tPA)信号肽取代H5-VNHA信号肽,构建成表达H5-VNHA基因的重组质粒,命名为HA-VN.tPA(即密码子优化的H5-VNHA基因DNA疫苗)。以HA-VN.tPA转染293T细胞,应用蛋白质印迹法检测转染细胞中HA蛋白的表达。以HA-VN.tPA对2只新西兰兔进行DNA免疫,用ELISA方法检测分析免疫后兔血清中HA特异性抗体的产生。结果密码子优化的H5-VNHA基因中哺乳动物细胞偏爱的密码子频率高于野生型H5-VNHA基因。蛋白质印迹法分析结果表明,HA-VN.tPA转染293T细胞后,细胞裂解液中检测出HA蛋白的表达。ELISA分析结果表明,以HA-VN.tPA免疫3次后,实验兔体内产生了较高水平的HA特异性抗体(血清中平台期抗体滴度达1:13500)。结论成功构建了H5N1亚型禽流感病毒密码子优化的HA基因DNA疫苗,该疫苗可引导免疫后宿主体内产生高滴度特异性抗体。

H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究

目的研发一种具有良好免疫原性的H3N8型马流感血凝素(hemagglutinin,HA)核酸疫苗。方法根据马A型流感病毒A/Equine/Xinjiang/3/08(H3N8)的HA蛋白序列,经密码子优化后化学合成能够表达相应蛋白的基因片段,并将该片段克隆到核酸疫苗载体pJW4303中,构建带有天然信号肽的H3HA核酸疫苗,命名为H3HA/XJ3-08-wt;进一步对HA基因进行修饰,以人组织纤维蛋白酶原激活剂(human tissue plasminogen activator,tPA)取代H3HA天然信号肽,命名为H3HA/XJ3-08-tPA,或切除部分HA的基因片段使之只表达HA蛋白的胞外域,命名为H3HA/XJ3-08-dTM。用这3种重组质粒分别转染293T细胞,蛋白表达经蛋白质印迹检测得到确认。采用电转录法免疫新西兰白兔。ELISA方法检测免疫后兔血清中抗H3HA抗体滴度,血凝抑制实验(hemagglutination inhibition,HI)检测保护性抗体水平。结果 3种H3HA核酸疫苗均可在293T细胞中高效表达,并能够在新西兰白兔体内诱导产生特异性抗H3HA抗体,HI检测到不同水平的保护性抗体。其中以H3HA/XJ3-08-tPA的免疫原性最强。结论新构建的H3N8型马流感血凝素核酸疫苗具有良好的免疫原性,为此类疫苗的进一步研发奠定了基础。

华东部分地区12岁以下儿童5型腺病毒感染状况调查——用于Ad5型重组载体疫苗或者基因治疗剂的适宜人群筛选

目的调查12岁以下儿童腺病毒（adenovirus，Ad）感染所诱发的免疫力状况，尤其是针对5-型腺病毒（Ad5）的免疫力状况，旨在筛选应用Ad5重组疫苗和基因治疗剂的适宜人群。方法通过采集华东部分省市和地区12岁以下儿童的血清标本，采用ELISA方法检测Ad非特异性总抗体（Ad Total antibody，Ad-TAb），用蚀斑减少中和试验（Plague Reduction Neutralization Test，PRNT）来检测Ad5中和抗体（Ad5 neutralizing antibody，Ad5-NAb），用Stata9．0软件进行数据分析。结果经过ELISA和PRNT检测，发现Ad-TAb和Ad5-NAb的滴度水平以及各组标本的阳性率，均随着年龄的增长而呈上升的趋势。以低于2岁的年龄组各项数据最低，与其它各组有显著性差异（P〈0．05）。结论在12岁以下儿童人群中，以低于2岁的年龄组应用Ad5型重组疫苗或基因治疗剂是可行的。

华东部分地区12岁以下儿童5型腺病毒感染状况调查

目的调查12岁以下儿童腺病毒（adenovirus，Ad）感染所诱发的免疫力状况，尤其是针对5．型腺病毒（Ad5）的免疫力状况，旨在筛选应用Ad5重组疫苗和基因治疗剂的适宜人群。方法通过采集华东部分省市和地区12岁以下儿童的血清标本，采用ELISA方法检测Ad非特异性总抗体（Ad Total antibody，Ad-TAb），用蚀斑减少中和试验（Plague Reduction Neutralization Test，PRNT）来检测Ad5中和抗体（Ad5 neutralizing antibody，Ad5-NAb），用Stata9．0软件进行数据分析。结果经过ELISA和PRNT检测，发现Ad-TAb和Ad5-NAb的滴度水平以及各组标本的阳性率，均随着年龄的增长而呈上升的趋势。以低于2岁的年龄组各项数据最低，与其它各组有显著性差异（P〈0．05）.结论在12岁以下儿童人群中，以低于2岁的年龄组应用Ad5型重组疫苗或基因治疗剂是可行的。