免疫增强剂提高禽流感疫苗效力的研究

为评价免疫增强剂（VA5）对鸡的免疫效力,将不同剂量免疫增强剂与H9禽流感抗原混合后制备疫苗,评价对SPF鸡的免疫效力.根据筛选结果,将最适剂量的免疫增强剂与H9禽流感抗原以共同混合的形式配制疫苗,并将免疫增强剂以伴侣形式与H5或H9禽流感疫苗混匀免疫商品鸡,评价免疫增强效果.结果表明,免疫增强剂与H9疫苗共同混匀,或将免疫增强剂制备成疫苗伴侣形式与H5或H9商品疫苗共同混合免疫商品鸡,均能使H5或H9疫苗免疫后抗体提前1周达到7lg2,免疫后2～3周抗体效价显著高于不含免疫增强剂的常规疫苗组.该免疫增强剂能提高H5和H9亚型禽流感疫苗对鸡的免疫效力,具有较好的应用前景.

免疫增强剂对禽流感疫苗免疫持续期、安全性和鸡淋巴细胞转化的影响

在配制H9亚型禽流感疫苗过程中添加免疫增强剂VA5制成VA5-H9疫苗免疫鸡,或将VA5制备成油乳剂以疫苗伴侣形式与商品化H5亚型禽流感疫苗混合(VA5-H5)后免疫鸡,监测鸡的抗体持续期、疫苗安全性和鸡淋巴细胞的转化情况。抗体检测结果表明,VA5与H5或H9亚型禽流感疫苗混用能有效延长抗体持续期4周,H5抗体提前1周达到7lg2。安全性研究表明,以VA5-H9疫苗经一次单剂量、一次2倍剂量和单剂量间隔2周重复免疫这3种方式免疫鸡后,含VA5的疫苗与常规疫苗的吸收类似,说明VA5不影响鸡体对疫苗的吸收。淋巴细胞转化试验结果显示,VA5能提高免疫鸡淋巴细胞转化效率。可知,获得的VA5免疫增强剂能有效延长抗体持续期,且不影响疫苗的安全性,并提高免疫鸡的淋巴细胞转化活性。

免疫增强剂提高H9亚型禽流感灭活疫苗在SPF鸡体中细胞因子的免疫应答

为探讨免疫增强剂(VA5)提高SPF鸡免疫功能的机理,将SPF鸡分别免疫H9亚型禽流感灭活疫苗、含VA5的H9灭活疫苗、含IL-4和/或IFN-γ真核质粒的H9亚型禽流感灭活疫苗,另设空白对照。检测免疫鸡外周血CD4^+、CD8^+T淋巴细胞亚群数目及IL-4和IFN-γ细胞因子含量的变化及血清抗体效价。结果显示,在14日龄、17日龄和21日龄和28日龄,免疫IL-4和H9、IL-4与IFN-γ和H9以及VA5佐剂与H9组的CD4^+淋巴细胞亚群上升快且比例高于其他组,免疫IFN-γ和H9、IL-4与IFN-γ和H9以及VA5增强剂与H9组的CD8^+淋巴细胞亚群上升快且比例高于其他组,IL-4的上升趋势与CD4^+细胞类似,IFN-γ的上升趋势与CD8^+类似。免疫含VA5的禽流感(H9亚型)灭活苗组在免疫后第2周、3周和4周血清HI效价达到7lg2以上,高于其他各免疫组。说明,与直接添加IL-4和IFN-γ的细胞因子质粒组相比,VA5免疫增强剂能够促进SPF鸡外周血淋巴细胞增值,提高CD4^+、CD8^+T淋巴细胞的比例,并诱导IL-4和IFN-γ细胞因子分泌。

无血清微载体培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒

为了获得用生物反应器无血清培养基微载体悬浮培养Vero细胞增殖传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus,IBDV)的工艺参数,通过驯化Vero细胞适应无血清微载体悬浮培养后,再优化传染性法氏囊病毒在此细胞上的增殖工艺参数,包括初始细胞密度、微载体浓度、IBDV的感染复数(MOI)、接种时间和病毒收获时间。结果表明:获得适应无血清培养的细胞株——V0株,建立细胞库。获得3 L反应器中培养V0细胞增殖IBDV工艺参数,其初始接种密度为3×105cell/m L、微载体浓度为3 g/L、细胞培养1 d后按MOI为0.2接种IBDV,接毒后120 h收获病毒,可达最高病毒效价109.307TCID50/m L。本研究获得的Vero细胞、IBDV以及各项工艺参数为后续大规模悬浮培养制备法氏囊疫苗提供了生物材料和技术支持。