山羊MC1R基因克隆、表达及其多态性研究

为研究黑色素皮质素受体1(MC1R)基因与山羊毛色形成的相关性,以苏淮山羊和波尔山羊为研究对象,克隆测序获得了山羊MC1R基因编码区全序列,实时定量荧光PCR(Real-Time PCR)检测其在苏淮山羊和波尔山羊耳组织中的表达水平,DNA池方法筛选其在山羊群体中的SNPs位点。结果发现,MC1R基因在苏淮山羊中全长954 bp,编码317个氨基酸残基。波尔山羊和苏淮山羊MC1R基因核苷酸和氨基酸序列一致性为99.79%和98.77%;系统进化分析发现,波尔山羊与苏淮山羊聚在一起后再与绵羊聚在一起。在苏淮山羊群体中发现183C/T和748T/G 2个突变位点,在波尔山羊群体中检测到701G/A突变。MC1R基因在波尔山羊耳组织中的表达水平高于苏淮山羊,但差异不显著。该研究显示MC1R基因可能在调控山羊毛色形成中发挥一定的作用。

猪lincRNA-CXCL 6调控LPS诱导炎症反应的机制研究

[目的]本研究旨在探究猪长链非编码RNA lincRNA-CXCL 6调控脂多糖(LPS)诱导炎症反应的分子机制,为防御猪的细菌性疾病引起的炎症损伤提供新的思路。[方法]利用互补DNA(cDNA)末端快速扩增技术获得lincRNA-CXCL 6的全长序列,利用荧光定量PCR(qPCR)检测lincRNA-CXCL 6的表达模式。构建lincRNA-CXCL 6稳转的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7细胞),利用转录组测序分析lincRNA-CXCL 6对LPS刺激后的细胞信号通路影响;利用Western blot和qPCR验证lincRNA-CXCL 6通过细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)通路来调控LPS诱导的炎症因子表达。[结果]lincRNA-CXCL 6全长985 bp,包含2个外显子。lincRNA-CXCL 6在LPS和二酰脂肽(Pam2CSK4)刺激下表达量升高,并且随着LPS刺激时间的增加其表达量也逐渐升高;lincRNA-CXCL 6在猪成年组织中仅微弱表达于肺和小肠,且主要表达于细胞质中。lincRNA-CXCL 6过表达抑制了LPS诱导的白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)mRNA的转录。转录组数据显示,与对照相比,LPS刺激后,lincRNA-CXCL 6过表达组有104个基因上调和165个基因下调。基因本体分析(GO分析)显示:165个下调基因主要参与免疫相关的生物学过程。lincRNA-CXCL 6通过ERK1/2通路负调控IL-1β和趋化因子17(CCL 17)的转录表达。[结论]猪lincRNA-CXCL 6通过ERK1/2信号途径抑制LPS诱导的炎症因子表达。

微贮对油菜秸秆营养成分及其在山羊瘤胃中降解特性的影响

[目的]本试验通过研究乳酸菌微贮对油菜秸秆的感官指标、营养成分及其在山羊瘤胃里的降解特性的变化影响,旨在探索油菜秸秆饲料化利用的方法。[方法]将粉碎的油菜秸秆分成4组,对照组不做处理,3个微贮组分别添加不同比例(质量分数为40%、55%和70%)水分后,再添加200 mL乳酸菌液(1.6×105 CFU·g-1)进行微贮,于处理后0、7、14和21 d采集样品,进行感官指标和营养成分分析,并采用尼龙袋法对微贮前后油菜秸秆的粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解率和有效降解率进行比较研究。[结果]微贮处理21 d后油菜秸秆松软,有清香味,适口性改善显著;CP含量升高,NDF和ADF含量下降;CP、ADF的有效降解率显著升高(P<0.05)。随着水分添加量的增加,CP的瘤胃有效降解率显著升高,ADF的瘤胃降解率下降。[结论]乳酸菌微贮能改善油菜秸秆的适口性,改善油菜秸秆的营养成分及其在瘤胃的降解特性,添加40%水分的油菜秸秆微贮21 d的综合效果更好。

瘦素受体对苏钟猪脂肪沉积调控的影响

[目的]研究瘦素受体(leptin receptor,LEPR)的mRNA表达和编码序列单核苷酸多态性(c SNPs)对猪脂肪沉积性状的影响。[方法]本文旨在利用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)方法和免疫印迹方法检测了该基因在高脂猪和低脂猪背最长肌、背膘、心、肝和肾共5种组织样中的mRNA和蛋白表达量,利用直接测序方法检测了LEPR第18外显子c SNPs,并对LEPR表达量、编码序列单核苷酸多态位点与苏钟猪脂肪沉积相关性状进行了关联分析。[结果]RT-q PCR结果表明:LEPR mRNA在这5种组织中均有表达,且差异显著(P<0.05),其中背膘组织中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),其次为背最长肌中的表达量,高脂猪的mRNA表达量显著高于低脂猪(P<0.05)。Western blot结果表明,LEPR蛋白在背膘和背最长肌中显著表达,且高脂猪的蛋白表达量显著高于低脂猪(P<0.05),说明猪脂肪沉积量越高,LEPR mRNA和蛋白表达量越高。PCR-sequencing结果表明,在LEPR c DNA的c.2841C>T位点处,T等位基因为脂肪沉积的优势等位基因。[结论]LEPR的表达对苏钟猪脂肪沉积调控有显著影响,其c.2841C>T位点可作为苏钟猪脂肪沉积肉质性状改良育种的分子标记。

SIRT1基因对猪卵巢颗粒细胞中生殖激素受体基因表达量的影响

为了探讨SIRT1基因在猪卵巢颗粒细胞生殖激素分泌中的作用,采用白藜芦醇和尼克酰胺处理猪卵巢颗粒细胞,检测猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因和生殖激素受体表达水平,分析SIRT1基因与生殖激素受体表达量的相关性。结果表明,白藜芦醇和尼克酰胺可剂量依赖性地调节猪卵巢颗粒细胞中SIRT1基因表达,SIRT1基因表达量的升高可引起ER2、FSHR、LHR表达量上调,其相关系数分别为0.820 6、0.519 7和0.140 7。说明,SIRT1基因参与猪卵巢颗粒细胞生殖激素受体表达调控,可影响猪卵巢颗粒细胞生殖激素分泌。

去乙酰化酶SIRT1过表达对猪卵巢颗粒细胞中AMPK活性的影响

构建猪SIRT1基因全长编码区(coding region sequence,CDS)的真核表达载体,转染猪原代卵巢颗粒细胞,探讨SIRT1基因过表达对猪卵巢颗粒细胞中AMPK基因的转录及其蛋白活性的影响。测序结果表明,猪SIRT1基因的CDS区全长大小为2 229 bp,与NCBI发布的猪SIRT1基因m RNA序列(EU030283.2)一致;转染p EGFP–C1–SIRT1载体的颗粒细胞中SIRT1的m RNA表达水平和蛋白表达水平极显著高于空载体对照组(P<0.01);p EGFP–C1–SIRT1转染组细胞中,AMPK–α1和AMPK–α2基因的m RNA表达量显著高于空载体对照组,且细胞中AMPKαThr172位点的磷酸化水平显著升高(P<0.05)。结果表明,体外培养的原代猪卵巢颗粒细胞中的SIRT1基因过表达使AMPK的表达显著增加,影响AMPK的活性,推测SIRT1可能通过AMPK在猪卵巢颗粒细胞凋亡过程中发挥重要的调控作用。

猪单核源性巨噬细胞受FSL-1刺激后lncRNAs的鉴定与特征分析

lncRNA是新近发现的一种具有重要功能的RNA分子,在各种生理活动中发挥着重要作用。为鉴定猪单核源性巨噬细胞受FSL-1刺激后相关的lncRNA,利用二代测序技术结合生物信息学对lncRNA进行了组装与特征分析。结果显示FSL-1刺激成功地构建了细胞炎症模型,试验组与对照组共鉴定到1 056个lncRNA转录本,其对应于831个基因座,这些lncRNA的平均长度为1 643 bp,平均外显子数为2.4个。相对于对照组,试验组有51个lncRNA上调表达,44个lncRNA下调表达。在上调lncRNA两侧相邻的蛋白质编码基因参与免疫反应、炎症反应、病毒反应等通路,而在下调lncRNA两侧相邻的蛋白质编码基因参与的通路较少,不参与上述通路。定量PCR结果显示挑选的4个lncRNA的差异倍数与RNA-Seq的结果相似,其中上调的lncRNA呈现一定的组织特异表达,而下调的lncRNA呈现多组织表达。这些结果为进一步研究lncRNA在FSL-1介导的炎症反应中的作用奠定了基础。

猪PKM2基因在肺炎支原体感染3D4/21细胞后的互作蛋白质鉴定与分析

通过构建含有HA标签的PKM2过表达质粒转染3D4/21细胞,利用免疫共沉淀(Co-IP)与液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)技术分析与鉴定猪PKM2基因在肺炎支原体感染猪肺泡巨噬细胞3D4/21后的互作蛋白质,并对这些互作蛋白质进行GO与KEGG通路分析。结果显示肺炎支原体感染3D4/21细胞后,PKM2在mRNA水平和蛋白质水平上表达上调,其表达水平呈现剂量与时间依懒性。免疫共沉淀反应结果显示IP与IgG组共鉴定到72个蛋白质,这2组鉴定到的蛋白质数分别为60和19,其中7个蛋白质在2组中同时鉴定到。GO分析结果表明IP组的互作蛋白质主要参与了NAD代谢过程、NADH代谢过程、肌原纤维组装、NADH再生和葡萄糖代谢丙酮酸等生物过程,其中大多数与能量代谢有关。KEGG pathway分析结果表明互作蛋白质参与了致病性大肠杆菌感染、军团杆菌病、糖酵解/糖异生、丙酮酸代谢和癌症中的中枢碳代谢等通路,这些通路与细菌感染和能量代谢有关。

山羊MC4R基因多态性与体质量性状的关联性分析

为探讨黑素皮质素受体4(MC4R)基因多态性对山羊体质量的影响,以波尔山羊为研究对象,采用池DNA为模板,PCR扩增MC4R基因,Sanger测序法筛选其在波尔山羊中的SNPs位点,PCR-RFLP方法进行多态位点分型,单因素方差分析不同基因型间波尔山羊各月龄体质量的差异。结果表明,编码区502 bp处新检测到A/G单碱基颠换,位于Bse JⅠ酶切位点内,在波尔山羊群体中存在AA(0.7791)、AG(0.2025)和GG(0.0184)3种基因型,关联分析发现AA基因型个体初生体质量、1周龄体质量显著高于AG基因型(P<0.05),1周龄体质量极显著高于GG基因型(P<0.01),2周龄、2月龄、3月龄体质量显著高于GG型(P<0.05)。连锁分析发现,A502G、C693T、A946C和C986T位点共存在8种不同的基因型组合,AACCAACC型个体初生体质量显著高于AGCCAACC型(P<0.05),AACCAACT型个体周岁体质量显著高于AACTACCC型和AGCTACCC型(P<0.05)。综上所述,MC4R基因的A502G位点A基因对山羊早期体质量增加更有利,基因型组合AACCAACT对山羊周岁体质量增加更有利,可以作为山羊生长性状选择的候选分子标记。

6种进口猪精液常温保存稀释粉的效果比较

为了解进口猪精液常温保存稀释粉的实际应用效果,选购市场上常见的6种进口稀释粉进行比较试验。结果表明:随着常温保存时间的延长,不同稀释粉组间,活力下降速度存在差异,其中DILTEC和CXM下降最快,PRIMXCELL组下降最慢。精子有效存活时间差异很大,由长到短的顺序为PRIMXCELL>ACTIYE>XINZUAN>SpermPro>CXM>DILTEC;总存活时间也是PRIMXCELL最长,达到384h以上;保存120h顶体完整率存在显著差异,从高到低顺序为PRIMXCELL>SpermPro>XINZUAN>ACTIYE>CXM>DILTEC。说明法国的PRIMXCELL稀释粉最好,有效存活时间242h,总存活时间384408h,保存120h顶体完整率79.6%。

发酵床猪舍的改良设计与应用效果

为解决育肥猪后期粪尿量剧增造成发酵床死床的问题,对普通发酵床的布局进行了改良,在每个发酵床单元内增设1个定点排泄区,经测定有70%以上的猪粪尿经定点排泄区的漏粪地板排出发酵床外,从而可以提高发酵床养猪的密度,减少垫料用量。饲养试验结果表明,锯屑、稻壳和菌糠复合型垫料对猪粪的适宜承载量为1.40~1.86 kg/m^3,对尿的承载量为2.70~2.98 kg/m^3,垫料铺设厚度为60 cm的普通发酵床,在每头猪的最低占床面积2.24 m^2、占圈面积2.72 m^2时已出现轻度死床;而垫料铺设厚度为40 cm的改良型发酵床,每头猪占床面积为1.08 m^2、占圈面积1.36 m^2时,仍未出现死床。改良型发酵床单位面积及每头猪的一次性垫料投入量分别为普通发酵床的2/3和32%~64%,饲养过程中每头需添加的垫料量仅为普通发酵床的10.7%~16.0%,一次性垫料投入和饲养过程中的垫料添加均大幅下降。改良型发酵床提高了猪的增质量(10.2%~34.9%),提供了猪群清洁的拱翻和活动场地,保证了动物福利,有利于发酵床饲养方式的推广应用。

育肥猪发酵床增设定点排泄区的效果

为避免育肥猪后期粪尿量超过发酵床的可承载限度,在发酵床内增设了定点排泄区,发现有71%~76%的猪粪尿经定点排泄区的漏粪地板排出,可以提高发酵床养猪的密度,减少垫料用量。饲养试验显示,锯屑、稻壳和菌糠复合型垫料对猪粪的适宜承载量为1.40~1.86 kg/m^3,对尿的承载量为2.70~2.98 kg/m^3,垫料厚度60 cm的发酵床,在每头猪占床面积2.24 m2,占圈面积2.72 m2时已出现轻度死床;而增设定点排泄区的垫料厚度40 cm的发酵床,在每头猪占床面积为1.08 m2,占圈面积1.36 m2时,仍未出现死床现象。与原发酵床相比,增设定点排泄区后单位面积及每头猪的一次性垫料投入量分别为2/3和32%~64%,饲养过程中每头猪需添加的垫料量仅为10.7%~16.0%,且猪增重提高10.2%~34.9%,为猪群提供了更为清洁的拱翻和活动场地,保证了动物福利,有利于发酵床饲养模式的推广应用。