微生物组与动物疫病防控

微生物组研究的发展推动了人类不断探索人体微生物群与疾病之间的相关性。然而,微生物组学在动物疫病防控中的研究尚处于起步阶段。本文对动物疫病防控领域中微生物组研究所发挥的6个作用进行了阐述:揭示疾病与菌群的相关性,鉴定新发病原体,确立有益于维持机体健康生长的菌群,筛选疾病防控的新药物和新制剂,开发新疫苗或改进疫苗的使用效果,提出更简单有效的防控措施。

江苏省猪流行性腹泻病毒的流行病学调查

[目的]分析江苏省猪流行性腹泻病毒（PEDV）的流行和变异情况。[方法]采用RT-PCR方法对2013年3月至2014年12月从江苏省9个不同地区采集的174份病料进行病原学检测和流行病学调查,并对来自不同地区9株病毒的部分M基因进行克隆、测序和分析。[结果]江苏省PEDV的个体阳性率为17.92%,猪场阳性率为61.54%;与经典病毒株CV777相比,9株病毒的核苷酸序列和氨基酸序列都有突变。同源性分析表明,江苏省内PEDV毒株的核苷酸同源性为97.8%~100.0%,但与欧洲毒株的同源性较低;遗传进化分析表明,江苏省PEDV流行株和参考株可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ3个群,7株江苏省毒株和一些其他国内毒株、泰国毒株、韩国毒株以及美国毒株属于Ⅰ群,而另外2株江苏株与2株泰国株构成了Ⅲ群,而现用疫苗株CV777则属于Ⅱ群。[结论]江苏省内PEDV有一定程度的进化和变异,并且需要选择更有效的疫苗株来控制PEDV的流行。

人兽共患寄生虫病候选疫苗分子筛选方法研究进展

人兽共患寄生虫种类多、宿主广泛且危害严重。血吸虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病、旋毛虫病、弓形虫病等是常见的重要人兽共患寄生虫病。人类和家畜饱受寄生虫病的危害,这对公共卫生和畜牧业造成了很大的影响。控制传染源、切断传播途径和保护易感群是控制人兽共患寄生虫病流行的综合防控措施。在综合防控策略中,疫苗的使用是切断循环链、控制乃至消灭人兽共患寄生虫病的理想和有效途径之一。选用高效的抗原筛选方法挖掘潜在的疫苗候选分子是开发疫苗的前提和关键。抗原筛选技术的更新换代使得研究者发掘出了更多新抗原和保护性多肽。现有的抗原筛选方法主要包括传统的粗抗原筛选法、cDNA文库筛选法、蛋白质组学筛选法、生物信息学及多组学技术联合筛选法。很多抗原筛选的方法是伴随寄生虫疫苗研究的发展应运而生的,粗抗原筛选法是基于抗原抗体相互反应的免疫学原理而设计的,此方法筛选的天然抗原可引起机体较强的免疫反应;cDNA文库筛选抗原的优势在于筛选更有针对性,所以候选产物的成分更单一、明确;蛋白质组学筛选法是基于质谱而兴起的一种筛选技术,它既可对未知蛋白组分进行鉴定,还可对鉴定结果进行差异比较,在未知分子的发现和功能特殊的靶分子筛选中发挥着重要作用;随着后基因时代的到来,生物信息学及多组学联合筛选技术使得抗原筛选逐步进入了多维、立体的筛选模式,也使得候选抗原及其表位的功能研究更加深入,这为基因工程疫苗和多肽疫苗候选分子的筛选提供了技术手段。

口蹄疫病毒多基因及猪α干扰素共表达载体的构建及其免疫豚鼠效果研究

为探讨口蹄疫病毒多基因及猪α干扰素(IFN-α)基因共表达真核质粒进入临床试验的可行性,本试验用PCR方法扩增了口蹄疫病毒P12A3C及部分2B基因(P12X3C)和猪IFN-α基因,克隆到真核表达载体pBudCE4.1中,经双酶切鉴定后,将重组质粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α转染BHK-21细胞中,观察目的基因的表达,并将重组质粒免疫豚鼠,检测豚鼠的血清抗体水平、中和抗体滴度及T淋巴细胞增殖情况。结果显示,经酶切鉴定及DNA序列分析成功构建了重组质粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α,转染BHK-21细胞后,通过Western blotting、间接免疫荧光试验鉴定证实重组质粒能有效表达。ELISA结果显示,重组质粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α比重组质粒pBudCE4.1-P12X3C能诱导机体产生更高水平的抗口蹄疫病毒的血清抗体,且中和抗体滴度也高于重组质粒pBudCE4.1-P12X3C组。MTT法检测结果表明,重组质粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α组淋巴细胞增殖可达15%,而重组质粒pBudCE4.1-P12X3C组则为11%。攻毒后重组质粒pBudCE4.1-P12X3C-IFN-α组和灭活疫苗组保护率达100%,高于重组质粒pBudCE4.1-P12X3C组的80%。本试验成功构建了重组质粒pBudCE4.1-P12X3CIFN-α,猪IFN-α作为佐剂可有效辅助口蹄疫DNA疫苗提高动物体内的免疫反应。

江苏省临床病猪弓形虫感染风险因素及PK1基因型分析

为了解江苏省临床病猪弓形虫病流行特征及虫株遗传多样性,采集江苏不同地区送诊的临床病猪肺门淋巴结组织,以529bp重复序列为靶基因进行弓形虫PCR检测,以确定病猪的感染率并分析其感染风险因素;检测为阳性的样本,选择弓形虫PK1遗传标记位点进行基因型鉴定。结果显示,采集的65例病猪中,18例确认感染弓形虫,感染率为27.69%;病猪日龄与季节是江苏省临床病猪弓形虫感染的主要风险因素;PK1-Ⅱ型是该地区猪感染弓形虫的优势基因型。研究结果在一定程度上揭示江苏省猪弓形虫病的流行特征。

猴结核病的流行与防控

非人灵长类(non-human primates,NHPs)是结核病的易感宿主,感染后,结核不仅会在种群中相互传播,也会传播给人类。目前尚无有效的疫苗预防NHPs结核。虽然目前的防控方案已经较为成熟,减少了圈养NHPs结核病的发病率,但疫情仍有发生。本文总结了世界范围圈养和野生环境下猴结核病的流行病学状况,对当前常用检测方法的优缺点进行分析,并总结当前NHPs的防控检测最常见做法。表明结核病对NHPs构成极大威胁,以提高NHPs饲养工作者、管理者对结核病的认知,为完善当前管理程序提供依据,以期为我国猴结核病的诊断防控提供参考。

动物源性沙门氏菌的耐药性分析及氟苯尼考类耐药基因的鉴定

为了解动物沙门氏菌的流行情况和药物敏感性及氟苯尼考耐药株的耐药基因分布,本试验对临床上疑似患沙门氏菌病的病料进行病原分离和细菌的多重PCR鉴定;采用K-B法测定分离株对23种抗菌药物的敏感性;选择氟苯尼考耐药菌株扩增floR、fexA、fexB、cfr和pexA基因。结果显示,共鉴定出61株沙门氏菌,其中肠炎沙门氏菌10株,鸡白痢沙门氏菌12株,鼠伤寒沙门氏菌39株。所有菌株对青霉素、红霉素、万古霉素耐药,90.16%对6种及6种以上抗菌药耐药。floR基因广泛存在于鼠伤寒沙门氏菌氟苯尼考耐药菌株中(8/12,66.67%),未发现其他耐药基因。研究结果表明鼠伤寒沙门氏菌是鹅源分离株中的优势血清型;floR基因主要介导沙门氏菌对氟苯尼考耐药性,但可能还存在其他机制。

江苏、山东部分地区禽致病性大肠杆菌流行病学调查

禽大肠杆菌病是造成家禽高发病率和死亡率的重要疾病,该病是由禽致病性大肠杆菌(Avian pathogenic Escherichia coli,APEC)感染引起的细菌性疾病。通过对2015~2016年分离自江苏和山东部分地区的173株禽大肠杆菌的血清型、致病性、耐药性等流行病学特征进行调查,结果表明:定型菌株135株,未定型菌株38株,定型率为78.03%;优势血清型有O78(21%)、O24(12%)、O1(10%),其余定型菌株涉及31种血清型;55个进行1日龄易感鸡致病性试验的分离株中,高致病性菌株39个,中度致病性菌株5个,低致病性菌株11个,其中80%分离株具有高中致病力;耐药性检测结果表明,APEC普遍存在耐药性,所有分离株对10种以上的抗生素耐药。调查结果为该地区禽大肠杆菌病的防控提供参考。

玉米赤霉烯酮对小鼠T淋巴细胞共刺激分子调节功能的影响

在原代培养的小鼠T淋巴细胞中加入刀豆蛋白A(Con A)作为活化刺激剂,研究不同浓度玉米赤霉烯酮(ZEA)对T淋巴细胞共刺激信号分子CD28和CD152,及PI3K-Akt-mTOR信号通路关键蛋白表达的影响。结果表明:染毒48h后,Con A组与细胞空白组相比,CD28和CD152均显著升高;染毒组与Con A组相比,10和20μmol·L-1ZEA组CD28表达量呈下降趋势但差异不显著,CD152表达量显著或极显著降低,40μmol·L-1 ZEA组CD28表达量显著降低,CD152表达量无显著差异。染毒24h后,Con A组与细胞空白组相比,PI3K等蛋白表达量显著或极显著升高;各染毒组与Con A组相比,PI3K等蛋白表达量均显著或极显著下降,且呈剂量依赖性。这一研究说明ZEA可通过干扰CD28/CD152表达及抑制PI3K-Akt-mTOR信号通路来干扰T淋巴细胞的活化过程。

兽医临床诊断学实验临床病例教学法探索

兽医临床诊断学是一门实践性很强的专业课程,以加强学生兽医临床诊断的实践能力,培养优秀兽医人才为出发点,结合目前实验教学的现状和问题,对实验教学进行创新。通过临床病例教学,充分调动了学生的学习积极性,培养了学生分析与解决实际问题的能力,提高了学生的综合知识水平和创新能力。

CBL模式在《兽医微生物学》教学中的应用探讨

基于病例的学习(Case-based learning,CBL)模式是以病例为载体,问题引导,学生为主体,教师为主导的教学模式。该教学模式通过病例介绍,采用问题引导学生思考、讨论和总结。在教师主导下,通过学生为主体的主动学习,达到学习知识和应用知识的学习目的。在兽医微生物教学中,应用该教学方法,可以极大地调动学生学习的主动性,培养学生应用知识进行学习和解决问题的能力,提高教学效果。

PBL模式在兽医影像学课程教学中的应用——以“骨折影像学诊断”教学为例

以扬州大学兽医学院2009和2010级选修兽医影像学课程的学生为研究对象,研究问题引导式教学法在该课程"骨折影像学诊断"教学中的应用效果。结果表明,与基于讲义的教学模式(LBL)相比,采用问题引导式教学方法(PBL),可显著提高学生的卷面考试成绩、读片考试成绩和病历书写成绩,有助于调动学生的学习积极性,加强学生对知识的掌握程度,提高学生的自主学习能力。

从活禽交易的干预效果看我国禽流感的流行与防控

我国当前的禽流感防控形势依然严峻,除高致病性禽流感的威胁外,还需要警惕能感染人的重组病毒。其中活禽交易市场在禽流感病毒传播中扮演重要角色,它是禽流感病毒重要的集散地和疫病传播环节,但禽流感的防控不能仅限于干预活禽交易市场,还有赖于行政部门和养禽企业多方共同努力。

10%磷酸替米考星可溶性粉在靶动物鸡的安全性试验

为评价10%磷酸替米考星可溶性粉对靶动物鸡的安全性,本试验选择40只25日龄健康白羽杂交肉鸡,随机分为4组,每组10只,公母各半。各组分别以0(0mg/L)、1(75mg/L,以替米考星计)、3(225mg/L,以替米考星计)和5(375mg/L,以替米考星计)倍推荐剂量的10%磷酸替米考星可溶性粉混饮给药,连用9d。试验期间观察鸡的临床表现、体重变化和饲料消耗,试验结束后进行病理学检查,并测定血液生理指标和血清相关生化指标的变化。结果显示,10%磷酸替米考星可溶性粉在本试验条件下以5倍以下剂量饮水给药对鸡的生长性能无显著影响(P>0.05),在血液生理指标及血清生化指标方面,不具有剂量依赖性的显著变化(P>0.05)。该试验结果表明,10%磷酸替米考星可溶性粉按推荐剂量(75mg/L)饮水给药对靶动物鸡具有较大的安全性。

《兽医内科学》课程研究性教学的探索

为提高《兽医内科学》课程的教学效果,进行了该课程研究性教学模式的探索,通过基于问题和临床病例讨论的研究性教学模式的实践,增强了学生对兽医内科学知识的认识与理解,提高了教学质量与教学效果,培养了学生的创新精神和实践能力。

磺胺氯吡嗪钠-二甲氧苄啶混悬液对鸡的靶动物安全性试验

为评价磺胺氯吡嗪钠-二甲氧苄啶混悬液对靶动物鸡的安全性,选择40只15日龄健康黄羽肉鸡,随机分成4组,每组10只。各组分别以0 mg/L、推荐剂量(300 mg/L)、3倍推荐剂量(900 mg/L)、5倍推荐剂量(1 500 mg/L)的磺胺氯吡嗪钠-二甲氧苄啶溶液饮水给药,连用5 d。试验期间观察临床表现和体重变化,试验结束后进行病理学检查,并测定血液学和血液相关生化指标的变化。结果表明,磺胺氯吡嗪钠-二甲氧苄啶溶液在鸡以3倍以下推荐剂量用药,连用5 d是安全的,在炎热季节可适当降低混饮时药物的浓度。

国内外奶牛疫病预警监测技术发展现状

为了解国内外奶牛疫病预警技术及其应用现状,归纳了奶牛疾病的预警要求,分析了国内外8种疫病预警技术的发展现状及其在奶牛养殖中存在的局限性。一是兽医巡检预警技术:该技术较为成熟,但不能满足大规模养殖牛场迅速、高效预警的需求。二是奶样体细胞数测定技术:可初步诊断隐性乳腺炎,但需要额外细菌培养和检测确诊。三是奶牛群体改良测定技术:以监测生产性能为主,仅可预警奶牛乳腺炎及酮病。四是计步器及发情、反刍项圈预警技术:同时具备发情与反刍监测功能,但仅适用于牛群的发情与反刍监测。五是大数据挖掘技术:在数据库基础上,利用各种模型或算法预测传染病的发生和发展,但预警效率受限。六是智能化体温连续远程监测及预警技术:可预警口蹄疫等重大传染病,但无法完全替代临床诊断,不能监测病原微生物。七是基于AI和群体热成像的奶牛行为分析技术:可以监视记录奶牛行为与温度特征,锁定病畜,但对发病初期无异常行为的牛只无效。八是生物气溶胶激光光谱测量技术:通过检测病原微生物种类和浓度,达到预警疫病的目的,目前主要用于军方监测人类重大疫病。未来的奶牛疫病预警技术需要进一步相互结合、取长补短,充分利用大数据、物联网等新兴技术进行奶牛重大疫病预警诊断。本文为预警监测技术的本地化发展提供了参考。

CVC1302对O型口蹄疫病毒细菌样颗粒疫苗的免疫增强作用

为探究免疫增强剂CVC1302对O型口蹄疫(FMD)细菌样颗粒(BLP)疫苗的免疫增强作用,本研究将革兰氏阳性增强基质(GEM)处理的口蹄疫病毒(FMDV)VP1结构蛋白表位的重组蛋白B(T1BT2)4B与CVC1302混合,与白油佐剂乳化制成疫苗,免疫4周龄ICR小鼠及45日龄FMDV抗体阴性仔猪。免疫后利用FMDV VP1结构蛋白ELISA抗体检测试剂盒检测小鼠血清中的特异性ELISA抗体水平;利用淋巴细胞增殖试验检测免疫小鼠淋巴细胞增殖情况;利用荧光定量PCR方法检测免疫小鼠相关细胞因子水平以及利用液相阻断抗体检测试剂盒检测免疫仔猪血清中的液相阻断抗体滴度。结果显示,免疫增强剂CVC1302可以显著提高GEM-B(T1BT2)4B免疫后小鼠血清中的抗体水平(p<0.05);小鼠T淋巴细胞增殖率及细胞因子IL-4、IFN-γ的转录水平均显著升高(p<0.05);仔猪血清中的液相阻断抗体水平也明显高于对照组。以上结果表明免疫增强剂CVC1302可以提高O型FMD BLP疫苗的细胞免疫和体液免疫水平,对FMD BLP疫苗具有较好的免疫增强作用。本研究为提高FMD亚单位疫苗的免疫效力提供了新的思路。

动物寄生性蠕虫基因组学研究进展

动物(人)寄生性蠕虫病主要由寄生性线虫、吸虫和绦虫引起,严重威胁着人和动物的健康,但目前尚无有效的防治措施。近年来,随着测序技术的不断发展,越来越多种类的寄生性蠕虫基因组序列被测定和解析,寄生性蠕虫的生物学特征也被更深层次地挖掘。本文中作者将就寄生性蠕虫全基因组测序现状、基因的组成及特征、功能基因组的研究等进行综述,为深入了解寄生性蠕虫的起源、进化和致病机制,以及为寄生性蠕虫病的诊断、新药设计和疫苗研发提供新的思路。

案例纠错教学法在兽医微生物学实验课程教学中的应用

兽医微生物学实验课程是兽医学、动物科学及其相关专业学生必修的一门专业基础实验课。为了提高兽医微生物学实验课程教学效果,将案例教学法与纠错教学法相结合并引入该课程教学中,探索了提高该课程教学质量和效果的教学方法。与传统教学方法相比,案例教学结合纠错教学极大地激发了学生的学习兴趣,充分调动了学生的学习积极性和主动性。从学习效果来看,无论是理论知识考试还是实验操作,该模式下的学生成绩均显著高于传统教学模式。问卷调查结果表明,案例纠错教学试验组学生对该教学方式的满意度较高。