MR动脉自旋标记成像技术在脑血管病及相关认知障碍疾病中的应用进展

动脉自旋标记(ASL)为无需对比剂的MR脑灌注成像技术,与金标准对比剂灌注成像具有良好的相关性。随着ASL在中枢神经系统重大疾病中的广泛应用,尤其是多延迟ASL、4D ASL和超选择单支血管标记技术在脑血管病及相关认知障碍疾病中的应用,大幅提升了ASL的应用效能。就ASL的技术进展及其在脑血管病和相关认知障碍疾病中的应用进行评述,以期在临床上进一步推广ASL新技术,为病人提供简便易行和经济的影像检查方法,为个体化诊断及治疗决策提供支持。

人脐带间充质干细胞通过GDF-15/FOXO3a治疗小鼠卵巢功能不全的研究

目的:探讨人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)改善卵巢功能不全(premature ovarian insufficiency,POI)小鼠的卵巢损伤及机制。方法:采用足底注射透明带3多肽(zona pellucida3 peptide,pZP3)方法构建POI小鼠模型,将小鼠分为对照组、佐剂对照组、pZP3组和hUC-MSCs组,每组10只。以阴道涂片监测动情周期、以酶联免疫吸附测定检测血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)和雌二醇(estradiol,E_(2))水平,以HE染色观察卵巢组织学,以蛋白质印迹(Western blotting)检测叉头框转录因子O3a(forkhead box O3a,FOXO3a)、p-FOXO3a、p53、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、Bax表达水平,以实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测POI的标志物骨形态发生蛋白15(bone morp hogenetic protein 15,BMP15)、抗米勒管激素(anti-Müllerian hormone,AMH)、WNT、卵泡刺激素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)以及促炎因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β的表达水平,以RNA-seq检测生长分化因子-15(growth differentiation factor-15,GDF-15)的表达水平。通过环磷酰胺(cyclophosphamide,Cy)构建体外模型。结果:(1)造模6周后,与对照组相比,pZP3组和hUC-MSCs组动情周期出现紊乱,且血清FSH水平升高,血清E_(2)水平降低,表明模型构建成功。(2)相较于对照组,pZP3组闭锁卵泡增加,原始卵泡数目降低,hUC-MSCs干预后小鼠原始卵泡比例和数目均高于pZP3组(P<0.05)。(3)与对照组相比,pZP3组卵巢中凋亡蛋白p53、Bax表达水平上调,hUC-MSCs干预后小鼠凋亡蛋白p53、Bax表达较pZP3组下调(均P<0.05);pZP3组体内Caspase-3变化与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。pZP3组炎症因子IL-1β、TNF-α表达上调,hUC-MSCs干预小鼠的IL-1β、TNF-α表达较pZP3组显著下调(均P<0.05)。(4)pZP3组体内Treg细胞数量降低(P<0.01),hUC-MSCs干预后小鼠Treg细胞数量较pZP3组升高(P<0.0001)。pZP3组卵巢组织中BMP15、AMH、WNT以及FSHR的mRNA表达水平较对照组降低,hUC-MSCs干预后小鼠的表达水平较pZP3组升高(均P<0.05)。(5)pZP3组FOXO3a磷酸化水平高于对照组(P<0.0001),hUC-MSCs干预后,FOXO3a磷酸化水平较pZP3组下降(P<0.0001)。测序结果提示,pZP3组GDF-15表达上调,hUC-MSCs组中GDF-15表达较pZP3组下调。结论:POI小鼠体内GDF-15和p-FOXO3a表达上调,h UC-MSCs通过下调GDF-15的表达和降低FOXO3a的磷酸化水平,改善POI小鼠的卵巢组织形态,实现对POI小鼠的治疗作用。

阿魏酸钠对移植皮瓣缺血再灌注损伤保护的实验研究

目的:通过建立大鼠皮瓣移植损伤的动物模型,观察阿魏酸钠对皮瓣存活率的影响。方法:利用H&E染色分析皮瓣的损伤程度,利用免疫组化检测皮瓣组织中COX-2及HO-1的表达水平,利用ELISA法检测皮瓣组织中MPO、MDA、NO的含量以及外周血中TNF-α的表达水平。结果:在移植皮瓣缺血再灌注损伤模型中,相比于生理盐水处理组,阿魏酸钠处理可显著提高皮瓣的存活率,同时上调皮瓣组织中HO-1的表达水平,抑制COX-2通路的活化。在阿魏酸钠的作用下,皮瓣组织的MPO、MDA的含量明显下降,同时NO的合成增加,阿魏酸钠可显著抑制外周血中TNF-α的表达水平。结论:阿魏酸钠对移植皮瓣缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其作用机制与减少炎症反应,抑制氧化应激损伤密切相关。

蛋白质异戊二烯化关键酶GGPPS结合小分子筛选模型的构建

蛋白质的基本翻译后修饰包括磷酸化、糖基化、乙酰化、棕榈酸化等^([1]),而异戊二烯化修饰是蛋白质的基本翻译后修饰之一,属于蛋白质的脂质修饰^([2]).甲羟戊酸途径中的关键分支酶——香叶基香叶基焦磷酸合成酶(Geranylgeranyl diphosphate synthase,GGPPS)能够催化法尼基焦磷酸盐(Farnesyl diphosphate,FPP)生成香叶基香叶基焦磷酸盐(Geranylgeranyl diphosphate,GGPP),介导蛋白质异戊二烯化的平衡^([3]).导致包括胰岛素抵抗^([4])、胰岛功能失调^([5])、生殖代谢异常^([6])等各种疾病的发生.GGPPS作为调节蛋白质异戊二烯化的重要靶点,因其在调节机体能量代谢稳态中的重要作用,促使构建筛选模型得到靶向GGPPS的小分子治疗药物,具有重要实践意义.实现EGFP荧光标记GGPPS原核蛋白的纯化以及表达,结合微量热泳动技术进行GGPPS结合天然化合物小分子的筛选模型构建.根据筛选模型对于检测蛋白稳定荧光的要求,分别构建含有GGPPS和EGFP基因的重组pET28a质粒以及对照质粒pET28a-EGFP.筛选高水平分泌表达GGPPS-EGFP-His蛋白的菌株,并对该菌株的目的基因整合位置及拷贝数进行测序.将含有目的基因的重组质粒的BL-21菌株大规模培养,表达的目的蛋白上带有His标签,利用镍(Ni)柱的亲和层析原理纯化获得重组蛋白GGPPS-EGFP-His,测定蛋白浓度留存.随后基于微量热泳动技术进行小分子结合筛选.重组GGPPS蛋白与梯度浓度化合物小分子在红外激光作用下发生热泳动,通过中心区域荧光检测可得出GGPPS与小分子化合物的结合状况.重组表达质粒GGPPS-EGFP-His经电泳及测序鉴定构建正确.纯化获得的重组蛋白纯度约为80%,在微量热泳动实验中,经GGPPS底物小分子法尼基焦磷酸(Farnesyl pyrophosphate,FPP)浓度梯度测试呈现良好结合.重组蛋白GGPPS-EGFP-His能够在微量热泳动技术下显示与小分子底物FPP的结合,该系统的构建对于筛选出GGPPS结合天然化合物小分子以及靶向GGPPS的小分子治疗药物具有重要意义.

脂肪组织棕色化与动脉粥样硬化的关系研究进展

脂肪组织棕色化会影响动脉粥样硬化的进展。本综述首先介绍环境温度改变对动脉粥样硬化的影响,接着介绍多种方法诱导脂肪组织棕色化对动脉粥样硬化的影响,最后介绍铁代谢在脂肪组织棕色化中的作用以及通过铁代谢调节脂肪组织棕色化治疗动脉粥样硬化的新思路,总结了脂肪组织棕色化与动脉粥样硬化的关系研究进展。

MRI在鉴别胶质母细胞瘤治疗相关反应与复发中的应用进展

胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme, GBM)是最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤,目前临床常用治疗手段包括手术切除及后续的放化疗。GBM患者接受放疗和化疗后出现的相关反应包括假性进展、放射性坏死和假性反应,因其与肿瘤复发的影像学表现相似导致在临床上常易混淆。GBM治疗相关反应与肿瘤复发的准确诊断与鉴别有助于及时评估患者疾病进展、制订治疗方案和提高治疗效果,对改善患者预后和远期生存期至关重要。本文简要阐述了磁共振常规成像和高级成像技术如弥散加权成像、弥散张量成像、弥散峰度成像、动态磁敏感对比增强成像、动态对比增强成像、动脉自旋标记、磁共振波谱、酰胺质子转移成像等在鉴别GBM治疗相关反应与复发中的应用进展。本文将帮助临床医生和科研人员理解GBM复发与治疗相关反应影像学表现的差异以及相关血流动力学、代谢水平及组织微结构的差异,进而提高GBM患者总体预后,也为后续磁共振新技术在该领域中的应用奠定基础。

敌草快中毒性脑病一例报道及影像学分析

敌草快是一种非选择性速效灭生性除草剂,与百草枯同属联吡啶类化合物。据报道,美国敌草快中毒以职业相关因素为主(8%~44%),且病死率低(<1%~3%)。我国是于近年来禁止百草枯后,敌草快才在市场中普及,因此对敌草快中毒的认识不足,病死率显著高于发达国家。敌草快主要损害靶器官为肝和肾,对中枢神经系统也有累及。本文主要报道一例年轻女性误服敌草快致严重的中枢神经系统损伤的案例,该患者存在典型的敌草快中毒性脑损伤临床及影像学表现,具有一定指导意义。

靶向宿主代谢重编程的溶瘤病毒调控策略

溶瘤病毒是一类天然的或经过基因编辑后能特异性在肿瘤细胞中复制、发挥抗肿瘤效应的病毒。溶瘤病毒的抗肿瘤效应主要通过以下两个方面实现:a.直接的溶瘤效应,例如诱导肿瘤细胞发生凋亡、促使细胞裂解等;b.溶瘤病毒作为一种激活免疫的药物,通过诱导机体产生强烈的抗肿瘤免疫,达到清除肿瘤的目的。溶瘤病毒疗法作为免疫疗法的一个重要分支,因其具有肿瘤特异性,便于基因改造等优点,成为该领域的研究热点。截至目前,处在临床实验招募和完成阶段的溶瘤病毒疗法虽然已达100多例,但已批准上市的产品仅有4款。溶瘤疗法应用于肿瘤治疗领域还面临着诸多挑战。因此,系统性回顾溶瘤病毒的改造策略,深入了解溶瘤病毒的生物学过程显得尤为必要。病毒依赖于宿主完成复制、增殖过程,其生物学过程与宿主的代谢状态密切相关。肿瘤的标志性特征为代谢重编程,即肿瘤细胞重新构建代谢网络以满足指数生长和增殖的需求并防止氧化应激的过程。通常包括糖酵解的增强和谷氨酰胺分解,以及线粒体功能和氧化还原稳态的变化。通过靶向宿主代谢重编程增强溶瘤病毒的复制、溶瘤能力是当前极具前景的方向。本文综述溶瘤病毒的临床应用现状及与代谢相关的调控机制,为进一步开发新型溶瘤病毒以及联用方式提供新的思路。

SCD1在TFE3-rRCC中的表达及其对TFE3-rRCC细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨SCD1在TFE3-rRCC中的表达及对TFE3-rRCC细胞增殖和迁移的影响。方法:通过GEPIA数据库分析SCD1在不同肿瘤中的表达水平以及对患者预后的影响。通过QPCR和Western印迹检测SCD1在TFE3-rRCC患者和细胞系UOK109、UOK120的表达水平。利用shRNA敲低细胞系中SCD1的表达。通过CCK-8、Transwell等实验,检测细胞在敲低SCD1前后的增殖、迁移能力的变化。结果:SCD1在3种常见肾癌中的表达水平均较高,且SCD1高表达的患者生存期更短,预后更差(Logrank P<0.001)。在TFE3高度表达患者的肾癌组织以及TFE3-rRCC细胞系UOK109、UOK120中,SCD1在mRNA和蛋白水平也均显著提高。敲低SCD1后,UOK109和UOK120细胞的增殖和迁移能力均明显下降。结论:SCD1在TFE3-rRCC中高度表达,并且能够促进TFE3-rRCC细胞系的增殖和迁移能力,可能是促进TFE3-rRCC发生发展的关键分子。

不同首发表现的Trousseau综合征2例

Trousseau综合征是指恶性肿瘤患者由于凝血和纤溶机制异常导致的血栓性事件,急性脑梗死作为Trousseau综合征的一种表现形式,可出现在恶性肿瘤的首发表现中或恶性肿瘤的病程中,相较于传统脑梗死人群,Trousseau综合征相关脑梗死患者的预后较差。但由于大多数临床医生没有意识到卒中与恶性肿瘤之间的联系,Trousseau综合征相关脑梗死在临床上容易被忽略。本文主要报道两例不同首发表现的Trousseau综合征,对临床医生对该综合征的诊疗具有一定指导意义。

TFE3基因易位相关性肾癌中TFE3融合蛋白亚细胞定位失调的机制研究

目的探究TFE3基因易位相关性肾癌(TFE3 tRCC)中TFE3融合基因的TFE3片段1号外显子丢失对TFE3融合蛋白亚细胞定位的影响。方法免疫组织化学方法对TFE3 tRCC和肾透明细胞癌(ccRCC)临床样本中TFE3蛋白进行定位观察;数据库和文献调研统计TFE3 tRCC中TFE3基因外显子保留情况;pCDH-MCS-EGFP-Puro慢病毒过表达载体构建分别含TFE3片段全长及1号外显子缺失的增强绿色荧光蛋白(EGFP)融合重组质粒;LipoFiter TM试剂转染含不同TFE3片段重组质粒进入人胚肾细胞系HEK293T,共聚焦显微镜观察EGFP的亚细胞定位;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测不同TFE3蛋白片段在胞浆胞核中的表达;实时荧光定量检测技术(q-PCR)检测不同TFE3蛋白片段对其下游靶基因转录的影响。结果病理切片显示TFE3融合蛋白在TFE3 tRCC细胞核中定位;共聚焦显微镜观察及Wsertern blotting结果显示全长TFE3蛋白平均分布在细胞质和细胞核,而缺失1号外显子的TFE3蛋白片段则主要定位于细胞核;q-PCR分析结果显示,TFE3蛋白的下游靶基因转录水平在缺失1号外显子的TFE3蛋白片段组显著上调。结论TFE3基因1号外显子在阻止TFE3蛋白进入细胞核的过程中发挥着重要作用。TFE3 tRCC中,1号外显子丢失的TFE3片段导致融合型TFE3蛋白在细胞核定位,并激活其下游靶基因的表达,该机制有望解释TFE3 tRCC肿瘤的发生和进展。

双酚A对多囊卵巢综合征发病机制的影响

多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)是以高雄激素表型为典型特征的育龄期女性常见的内分泌疾病,其发病机制尚不明确,现多认为雄激素对其发病具有重要影响。双酚A(bisphenol A,BPA)作为环境内分泌干扰物,能够上调相关雄激素合成酶的表达,通过过量雄激素暴露来诱导PCOS的发生。研究表明BPA暴露能够抑制芳香化酶的活性,阻止雄激素与受体的结合,从而诱导高雄激素血症。BPA还可通过氧化应激、雌激素相关途径、下丘脑-垂体-卵巢轴以及对肥胖和胰岛素抵抗的调节等途径调控PCOS患者的卵巢功能。综述BPA通过调控高雄激素诱发PCOS的神经内分泌机制及相关信号通路,以期阐述BPA具体的生物学功能,为后续研究提供参考。

健脾化痰方对PCOS大鼠胰岛素抵抗及慢性炎症因子的影响

目的:建立由脱氢表雄酮诱导的PCOS大鼠模型,观察健脾化痰方对PCOS大鼠胰岛素抵抗及慢性炎症因子水平的影响。方法:23日龄雌性SD大鼠皮下注射脱氢表雄酮6 mg/100 g体重/天,建立PCOS大鼠模型,成模大鼠随机分为4组:模型对照组、二甲双胍组、中药组(健脾化痰方)和二甲双胍+中药组,每组10只,分别给予相应药物进行干预,为期28 d。另设10只同龄SD大鼠为正常对照组。实验结束时,行腹腔糖耐量实验,测定0分、120分血糖及胰岛素水平;隔日将大鼠麻醉后下腔静脉取血,酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清睾酮(T)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、性激素结合球蛋白(SHBG)、白细胞介素-6(IL-6)、内脂素(visfatin)和色素上皮衍生因子(PEDF)的水平,HE染色观察大鼠卵巢的组织学改变及排卵情况。结果与正常组比较,模型组大鼠血清T、LH、LH/FSH、血糖、胰岛素、HOMA-IR、IL-6、PEDF水平均显著升高(P<0.05),卵巢组织HE染色光镜下可见各级发育期卵泡及黄体减少,囊性扩张的卵泡增多,卵巢颗粒细胞层数减少;与模型组比较,各治疗组大鼠血清T、LH、LH/FSH、血糖、胰岛素、HOMA-IR、IL-6、PEDF、visfatin水平均显著降低(P<0.05),FSH、SHBG水平均显著升高(P<0.05),卵巢HE染色光镜下见囊性扩张的卵泡明显减少,黄体及各级发育期卵泡增多,卵巢颗粒细胞层数增厚。结论健脾化痰方对PCOS大鼠具有明显改善胰岛素抵抗及降低慢性炎症因子水平的作用,并能够改善卵巢功能、恢复排卵。

半夏醇提取物对人肝癌HepG2细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨半夏醇提物对人肝癌细胞(HepG2)的抑制作用及其机制。方法:用半夏醇提物(PTE)与体外培养的人肝癌HepG2细胞共培养,采用MTT比色法测定不同剂量组PTE对HepG2细胞生长的影响;采用流式细胞术分析PTE对其细胞周期分布的影响;免疫细胞化学法观察细胞周期调控相关蛋白cyclin D1、c-myc和β-catenin的表达。结果:PTE作用24 h、48 h和72 h对HepG2细胞的增殖均有显著抑制作用(P<0.05),随剂量增加抑制作用增强,其中400μg/mL PTE作用72 h,其抑制率达54.7%;PTE使HepG2细胞阻滞于G0/G1期,400μg/mL剂量组的比例达到(66.5±2.1)%,与对照组(58.6±1.3)%相比有显著性差异(P<0.01);PTE还使cyclin D1、c-myc和β-catenin蛋白表达显著下降,与对照组相比其阳性面积百分比和光密度值均有显著性下降(P<0.05)。结论:PTE可抑制HepG2细胞的增殖及周期调控相关蛋白cyc-lin D1、c-myc和β-catenin的表达,并使HepG2细胞周期阻滞于G0/G1期。

肥胖与青少年多囊卵巢综合征

多囊卵巢综合征(PCOS)是育龄妇女常见生殖内分泌疾病。近年发现,随着儿童肥胖患病率增加,青少年PCOS发病率也逐年提高。肥胖可通过增加外周循环胰岛素水平影响PCOS发病机制,PCOS患者高雄激素血症也会增加内脏脂肪沉积。肥胖会增加与PCOS相关的代谢和心血管方面的并发症的患病风险,如胰岛素抵抗(IR)、高脂血症、高血压以及临床症状不明显的动脉粥样硬化等。早期识别青春期PCOS,有利于及时纠正、阻断其内分泌紊乱,防止近期及远期并发症发生。

肠道内Th17细胞的特征及其在炎症性肠病中的作用

Th17细胞是近几年发现的一类能够分泌白介素17(interleukin 17,IL-17)的CD4+T细胞,与自身免疫性疾病以及慢性炎症关系密切。Th17细胞在肠道内的增殖、分化、成熟具有一定的特征性,是肠道免疫屏障的重要组成部分,同时Th17细胞又能根据肠道内的变化分泌细胞因子来维持肠道免疫稳态,如IL-17、IL-22等。另一方面,肠道免疫机制异常在炎症性肠病的发病机制中占重要地位,Th17细胞及其相关细胞因子参与炎症性肠病的免疫反应,调节Th17细胞在肠道内的动态平衡对于治疗肠道疾病意义重大。本文就Th17细胞在肠道内的增殖分化、生物学功能、与炎症性肠病的关系以及关于Th17细胞动态平衡的调节做一综述。

灵芝孢子油对人肺腺癌细胞LTEP-a-2的抑制作用

灵芝（Ganoderma lucidum）是中药宝库中的珍品。近年来对其化学成分及作用机制进行了大量的研究,发现它具有调节和增强人体免疫力及对肿瘤等有良好的协同治疗作用。灵芝孢子油是灵芝孢子粉中的脂溶性物质,主要包含三萜类、多糖类及核苷类等有效成分。

Pokemon在人贲门癌中的表达及其意义(英文)

Pokemon基因是一种转录抑制因子,它在癌症发生发展过程中起重要作用.目前已发现Pokemon在人淋巴瘤、乳胶癌、肺癌、结肠癌、前列癌以及膀胱癌中高表达.但是在贲门癌中表达水平未见报道.本研究采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和实时定量多聚酶链反应(real-timePCR)方法检测了56例贲门癌(EGJ)和10例正常人贲门组织标本的Pokemon基因mRNA表达水平.结果显示所有组织标本均表达Pokemon.但是肿瘤组织及其配对的远离肿瘤的瘤旁组织Pokemon基因的mRNA表达水平显著高于正常人的贲门组织(P=0.0002,P=0.0069).结果显示Pokemon基因可能对贲门癌的发生发展及致癌性转化有重要作用.

新化合物D261抑制非小细胞肺癌NCI-H460细胞增殖及其作用机制

肺癌是当今恶性肿瘤死亡率最高的癌症。早期肺癌主要以手术治疗为主,并辅以放疗化疗。但是化疗药物毒副作用大,且抗药性在一些肿瘤靶向性药物中逐渐显现。因此,亟需新的抗肿瘤药物。天然产物是小分子新药的主要来源。我们在对天然小分子化合物的筛选过程中发现D261（从固体发酵物中提取,纯度大于95%）具有潜在的抗肿瘤活性,且对非小细胞肺癌的抑制作用最显著。因此,本文对D261影响非小细胞肺癌NCI-H460及其相关机制作了初步探讨。

HBsAg和抗HBs抗体同时阳性患者病毒学特征分析

目的分析HBsAg和抗HBs抗体同时阳性的HBV感染者病毒学特征及其临床意义。方法总计13 080例HBsAg阳性病例中,HBsAg与抗HBs抗体同时阳性476例,分析资料完整的113例患者(研究组)HBV血清标志物(HBVM)和HBVDNA定量、抗HBc IgM抗体及ALT结果,并与76例普通HBV感染者(对照组)进行比较。结果研究组与对照组在年龄、男女性别比及HBeAg阳性率间差异无统计学意义。研究组HBsAg水平显著低于对照组(P<0.05)。研究组抗HBc IgM抗体阳性率为30.9%,抗HBc IgM抗体阳性患者的血清HBsAg与HBV DNA水平、HBeAg阳性率及ALT水平均显著高于抗HBc IgM抗体阴性患者(P<0.05)。结论 HBsAg与抗HBs抗体同时阳性感染者HBsAg水平显著低于普通感染者,提示患者体内的抗HBs抗体可能仍起到一定作用;约30%患者可能处于HBV急性发作状态,应对其进行随访,观察疾病转归。