江苏省实验动物行政许可现状

本文对江苏省实验动物行政许可的情况进行了调查,综述了近年来江苏省实验动物行政许可的具体数据,分析了江苏省实验动物行政管理的现状,并提出相应的对策和措施,为江苏省及其他地区实验动物行业管理提供参考。

染色体制备实验技术的优化

染色体制备实验技术是生命科学领域各专业学生都须掌握的一项基本实验技能。本文从实验前准备、标本的处理、制片方法、压片方法以及显微拍摄方法等各个实验课程环节进行了创新性优化和改进。在要求学生熟练掌握操作步骤的同时,强调指导学生开展自主探究性实验,帮助提高学生实验操作效率,激发学生对科学探究实验的兴趣,提高分析问题和解决问题的能力,为新形势下提升具体高校实验教学工作提供了借鉴。

高校染色体制备实验内容的改革与优化

本文通过从实验内容和实验教学模式两方面,对细胞染色体制备实验进行内容改革与优化,同时强调在实验课教学过程中增加课程思政内容,引导学生全程参与实验,鼓励学生积极开展自主合作探究性实验,促进学生素质和能力的全面提高。

Photoshop软件在免疫组化图像分析中的应用

[目的]结合教学与科研工作实践,探讨采用图像处理软件Photoshop分析免疫组化图像的使用规范。[方法]选用合适方法对免疫组化图像进行分割与灰度转换处理,再采用软件测量与分析免疫组化图像,同时与Image-Pro Plus、ImageJ专业软件分析结果比较。[结果]该方法操作便捷,数据准确可靠。[结论]该方法值得在实验教学和科学研究中推广使用。

Photoshop软件在荧光显微图像处理中的应用

结合教学与科研工作实践,探讨采用通用图像处理软件Photoshop处理荧光显微图像的可行性。利用Photoshop软件可对荧光显微图像进行荧光标记拆分与叠加、图像锐化、平场校正、景深扩展、噪点去除、强度分析等相关处理。结果显示处理后荧光显微图像质量得到明显改善,不但细节清晰,而且结果准确。

胰岛β细胞中PP2ACα基因失活小鼠模型的建立及初步表型分析

目的 :建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,对其表型进行初步观察。方法 :通过Ins2-Cre小鼠与PP2ACα^(^(flox/flox))小鼠交配,获得胰岛β细胞特异性失活PP2ACα基因小鼠(PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre)。PCR和Western blot鉴定PP2ACα基因第二外显子敲除小鼠(KO)。4月龄时行腹腔注射葡萄糖耐量试验(IPGTT),以PP2ACα^(flox/flox)小鼠为对照。结果 :1PP2ACα转录本在KO小鼠短于对照小鼠;2KO小鼠胰岛中PP2AC蛋白水平较对照小鼠显著下降(P<0.05);3IPGTT结果显示:4月龄KO小鼠30、60、120 min时血糖明显高于对照小鼠(P<0.05)。结论:成功建立胰岛β细胞特异性失活PPACα基因小鼠模型,4月龄PP2ACα^(flox/fIox):Ins2-Cre小鼠糖耐量受损。

一种新的显微图像半定量分析方法

随着数字图像技术在生物医学研究领域的广泛应用，实验教学及科研T作中常常涉及图像半定量分析工作，如组织切片观察、免疫组织化学测定及荧光图像分析等。尽管有多种图像分析软件，如Image-ProPlus，NorthernEclipse，ScionImage等软件，但存在价格昂贵，相关教程少，使用不便等缺点，难以在生物医学领域广泛应用，而实验人员尤其是学生更倾向于使用界面友好、操作简便及教程丰富的图像软件，AdobePhotoshop是著名图像软件，普及率高，兼容性好，该软件从CS3版本开始新增了图像分析及DICOM文件识别功能，但目前关于其在生物医学领域应用的相关文献较少，同时也存在明显的不足之处。因此本研究就Photoshop在显微图像半定量分析中的应用进行探讨，文中所涉及到的名词和使用方法可参考相关教程^[1]。

ERα基因敲除小鼠的繁育及子代小鼠基因型的鉴定

目的探讨雌激素受体α(ERα)基因敲除小鼠的优化繁育方法及ERα基因敲除小鼠子代鼠的鉴定方法,建立ERα基因敲除小鼠模型,为进一步研究ERα蛋白的功能奠定基础。方法用4种不同的交配方式观察子代鼠的各表型比率及雌、雄性ERα基因突变纯合子小鼠的繁殖能力;从子鼠鼠尾中提取基因组DNA,用PCR方法扩增ERα基因片段,琼脂糖凝胶电泳后观察结果。HE染色观察雌、雄性ERα-/-小鼠生殖系统表型变化。结果 WT、ERα+/-、ERα-/-各表型小鼠互交繁殖结果基本符合孟德尔遗传规律,且雌、雄性ERα-/-小鼠无繁殖能力。与WT比较,雄性ERα-/-小鼠睾丸脏器系数降低,睾丸病理变化表现为生精小管管腔膨胀,生精细胞层变薄,且排列不规则;雌性ERα-/-小鼠子宫脏器系数降低,子宫和卵巢病变明显,表现为:子宫浆膜、肌层、内膜层细胞排列不规则,卵巢有囊性病变、充血,无黄体。结论雌、雄性ERα+/-小鼠交配是繁育ERα-/-小鼠的较好方法;实验所用PCR方法能够精确鉴定ERα-/-小鼠,ERα-/-小鼠的获得为ERα蛋白功能的实验研究提供了较理想的动物模型。

调整精卵交汇时间提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率

目的通过调整精卵交汇时间,提高C57BL/6J小鼠超数排卵的受精率。方法实验一以常规超排方法作为对照组,计算受精率;实验二验证C57BL/6J雄鼠受精能力;实验三在合笼后三个时间点检栓,确定超排鼠交配时间,计算精卵相遇时间;实验四将C57BL/6J雌鼠超排处理,停留6.5 h后配雄鼠,计算受精率,比较方法改进的效果。结果对照组取受精卵10.88枚/只;实验二取受精卵20.55枚/只,表明雄鼠的精子可以使卵子高比例受精,精子、卵子交汇时间是影响受精率的关键因素;实验三,在合笼后4 h雌鼠见栓鼠最多,确定对照组精卵交汇时间需7 h;根据以上实验结果,实验四将合笼时间推迟6.5 h,取受精卵22.27枚/只,比对照组提高了105%。结论调整精子、卵子交汇时间可显著提高C57BL/6J小鼠超数排卵受精率。

ES细胞囊胚注射后脱透明带移植对小鼠产仔率和嵌合率的影响

[目的]提高ES细胞囊胚注射的移植出生率。[方法]对照组采用正常囊胚ES细胞注射,试验组注射后的囊胚经酸性台氏液消化透明带后直接移植,研究ES细胞囊胚注射后脱透明带移植对小鼠产仔率和嵌合率的影响。[结果]对照组产仔率为15.96%,嵌合率为57.89%。试验组小鼠产仔率为17.95%,嵌合率为57.14%,出生率提高2%。[结论]嵌合率无显著差异,酸性台氏液消化透明带的方法可简化操作流程。

Prkdc和Il2rg双敲除免疫缺陷小鼠的构建和初步应用

目的:构建NOD背景免疫缺陷小鼠,作为新的人源肿瘤异种移植(patient-derived xenograft,PDX)模型。方法:利用CRISPR/Cas9技术获得NOD背景Prkdc和Il2rg双基因敲除小鼠,通过正常繁育得到能够稳定遗传的纯合子后代(命名为NYG小鼠),流式细胞术检测小鼠外周血免疫细胞比例,移植接种新鲜肿瘤组织,观察记录肿瘤生长状况及HE染色观察传代PDX肿瘤形态学特点。结果:NYG小鼠外周血小鼠无成熟的T细胞、B细胞和NK细胞表达,对移植的患者肿瘤组织几乎没有排斥反应,组织病理学表型及免疫系统未见明显异常。结论:成功构建NYG小鼠免疫缺陷小鼠,为肿瘤学基础理论及应用研究提供了新的PDX动物模型。

金黄仓鼠在临床医学中的研究进展

动物模型是临床医学和新药研究的重要支撑条件。尽管小鼠模型应用广泛,但近年来的研究显示,小鼠并不能完全模拟人类疾病,亟需新的动物模型弥补小鼠在各类研究中的不足。相比于小鼠,金黄仓鼠(golden hamster,Syrian hamster),在生殖、肿瘤、病毒学、脂代谢及心血管疾病等研究领域均显示,其基因表达与人具有较高的相似性。随着基因编辑技术的进步,金黄仓鼠在临床研究中的应用得以进一步拓展。该综述重点探讨基因编辑金黄仓鼠在生殖医学、脂代谢及心血管疾病、传染病、肿瘤等研究领域的最新进展,阐明基因编辑金黄仓鼠模型在医学研究的应用,以助于更好地理解基因在人类健康和疾病中的作用。

细胞外囊泡在吸烟所致慢性阻塞性肺病中作用及其机制研究进展

慢性阻塞性肺病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种复杂的异质性呼吸系统疾病,其主要是因长期吸入有害颗粒引起的肺功能和肺结构的改变。香烟烟雾(cigarette smoke,CS)是COPD的主要危险因素,其引起的炎症、细胞应激和组织破坏在COPD中发挥关键作用。细胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)为一种具有功能活性的纳米级膜结合囊泡,近年来因其在许多疾病诊断和治疗中发挥重要作用而受到越来越多的关注,但其在吸烟所致COPD中的作用及其机制的研究仍处于起步阶段,为此本文对EVs在CS所致COPD中的作用及其机制的国内外研究作一概述。

赭曲霉毒素A分析方法研究进展

赭曲霉毒素A（ochratoxin A,OTA）是1种具有多种毒性的真菌毒素[1],广泛污染粮食和饲料[2],对人类和动物的健康及农业经济发展造成严重威胁[3]。OTA的检测方法正在不断发展,从灵敏度、准确性、重现性、简易性、批量性和可视性等各方面日益满足实际生产生活的需求。

PC12细胞缺血预处理模型的建立及一氧化氮的保护作用

目的以PC12细胞建立体外脑缺血预处理细胞模型，探讨NO在预处理脑保护中的作用。方法建立缺血预适应的细胞模型，随机分为四组，每组五碟细胞。正常对照组：常氧、低糖（〈1g／L）2％胎牛血清DMEM培养；缺血预适应组（IPC）：预先氧糖剥夺（OGD）6h，后经复灌和OGD处理；非缺血预适应组（NIPC）t常氧、低糖低血清培养6h，后经复灌和OGD处理；一氧化氮合酶抑制剂组（L-NAME）：OGD预处理前30min加L-NAME，OGD6h，后经复灌和OGD处理。通过细胞MTT代谢率、乳酸脱氢酶（LDH）释放量、细胞凋亡率来评判IPC模型是否建立，生化法观察各组一氧化氮合酶（NOS）活性变化。统计分析利用单因素方差分析，两两组间均数的比较用ISD法，以P〈0．05为差异具有统计学意义。结果与NIPC组比较，IPC组M＇IT代谢率明显增高（94．9％±15．1％，P〈0．05），LDH释放量减少（279．1％±28．1％，P〈0．01），细胞凋亡率降低；与对照组（100．0％±13．5％）比较，NIPC组及IPC组NOS活性均升高（190．0％±14．6％，P〈0．01；126．1％±10．6％，P〈0．01）；流式检测结果显示，对照组、IPC组、NIPC组和L-NAME组引起的细胞凋亡率分别为5．90％，8．71％，18．62％及11．73％。结论IPC减少PCI2细胞缺糖缺氧损伤后细胞的死亡与凋亡，且NO参与了此保护机制，但并非唯一因素。

人HCN2真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的:构建含有人HCN2基因的真核表达载体,并观察在人胚胎肾细胞(HEK293)中的表达情况。方法:对人HCN2基因全序列进行分析,进行oligo设计,通过PCR,扩增HCN2全长cDNA,通过双酶切(XhoI和BamHI)装入真核表达载体pIRES2-EGFP中,脂质体法转染入HEK293细胞中,利用真核表达载体中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,对转染效率进行监测,采用反转录-聚合酶链反应检测HCN2 mRNA表达,全细胞膜片钳技术检测HCN2通道电流。结果:测序及酶切结果表明HCN2基因正确,荧光显微镜下,转染细胞观察到绿色荧光,反转录-聚合酶链反应检测到HCN2 mRNA表达,膜片钳检测到hHCN2基因编码的通道电流。结论:成功地构建了HCN2真核表达载体并进行了起搏通道HCN2基因的异源性表达。