SYBR GreenⅠ染料法定量PCR用于人体疟原虫定量检测及虫种鉴别的研究

目的建立一种可用于疟原虫检测并同时鉴别虫种的荧光定量PCR方法。方法根据人体疟原虫18SrRNA基因序列特征,在疟原虫种特异性区域两侧的属特异性保守区设计引物,对4种人体疟原虫进行PCR扩增,将得到的扩增产物采用TA克隆法插入pGEMT载体制备标准质粒,用于制备标准曲线进行定量分析,并进行熔解曲线分析,测定各虫种扩增产物的熔解温度。结果 4种人体疟原虫均能扩增得到特异性片断,荧光定量PCR方法中建立的标准曲线相关关系较好(相关系数r=-1.00),熔解曲线分析结果显示,4种人体疟原虫的熔解温度相差较大,分别为三日疟原虫71.3℃、恶性疟原虫72.8℃、卵形疟原虫74.6℃和间日疟原虫75.8℃。结论建立的SYBR GreenI染料法荧光定量PCR技术可同时进行人体疟原虫的定量检测和虫种鉴别。

华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶基因克隆表达和血清学诊断效果

目的克隆、表达华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CSCP),并评价其免疫学诊断效果。方法根据已知的CSCP(Gen Bank序列号:AF093242)基因序列设计引物,从华支睾吸虫成虫总cDNA中扩增该目的片段,克隆入真核表达载体pPIC9K,转化至巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,甲醇诱导表达、纯化;采用Westernblot技术鉴定该重组蛋白;用纯化的重组CSCP(rCSCP)免疫小鼠,ELISA法检测抗体效价;应用DotELISA法和Western blot法评估该重组蛋白的诊断效果。结果从华支睾吸虫成虫cDNA中扩增获得长度为927bp的CSCP基因,并成功进行了真核表达、纯化,纯化的rCSCP免疫小鼠后的血清能被华支睾吸虫成虫可溶性抗原识别,其血清抗体效价达1∶64000;采用该重组蛋白建立的DotELISA法检测华支睾吸虫病人的敏感性为91.7%(55/60),检测正常人的特异性为97.6%(82/84);Western blot分析显示,rCSCP与日本血吸虫病人血清无交叉反应,与卫氏并殖吸虫病人交叉反应率为20.0%(2/10)。结论 rCSCP具有较好的诊断效果,是华支睾吸虫重组蛋白中一个有潜在诊断价值的抗原。

三格式化粪池粪便无害化处理的效果

目的评价三格式化粪池对人粪便的无害化处理效果,为农村改厕提供科学依据。方法2009年在江苏省内5个市选取130座三格式化粪池作为评价对象,采集三格式化粪池第1格和第3格样品,检测其中的粪大肠菌群(FC)、寄生虫卵(血吸虫卵、蛔虫卵和钩虫卵)、化学需氧量(COD)、五日生化需氧量(BOD5)和氨氮(NH3-N),观察各指标的变化情况,用统计软件SPSS 13.0对数据进行统计分析。结果三格式化粪池第1格、第3格粪液FC达标率分别为3.1%和100%,两者差异有统计学意义(P=0.000 1,P<0.01)。分别有1座和4座化粪池第1格检测到钩虫卵和蛔虫卵,密度为1～2个/100 ml。第3格FC、COD、BOD5和NH3-N去除率分别为(99.96±0.03)%,(60.69±21.77)%,(60.13±23.20)%和(44.14±24.61)%。与第1格相比差异均有统计学意义(P均<0.01)。结论三格式化粪池对人粪便处理达到了无害化卫生标准要求,可作为农村粪便无害化处理的有效形式进行推广。

华支睾吸虫天然蛋白的纯化及其在免疫诊断中应用

已从华支睾吸虫粗抗原中纯化获得多种纯化抗原,其中部分纯化抗原已初步应用于华支睾吸虫病免疫诊断。本文就华支睾吸虫纯化抗原的纯化方法、免疫诊断效果及应用前景作一综述。