转染Lgr5基因对结肠癌细胞株体外生物学特性影响的研究

目的构建pIRES2-EGFP-Lgr5重组表达载体，获得SW480／Lgr5瞬时基因转染细胞株，并探讨转染Lgr5基因对结肠癌细胞株生物学特性的影响。方法运用逆转录聚合酶链式反应（RT—PCR）技术从结肠癌组织中获得Lgr5全长基因，经双酶切（XhoI和BamHI）连接入真核表达载体pIRES2-EGFP中，利用脂质体法转染SW480细胞，经流式细胞术、Westernblot、免疫细胞化学法检测Lgr5分子的表达；CCK-8法和悬滴实验分析Lgr5对结肠癌细胞增殖率和成球能力的影响，划痕实验分析Lgr5对结肠癌细胞迁移能力的影响。结果成功构建真核表达载体pIRES2。EGFP／hLgr5，并获得SW480／Lgr5瞬时基因转染细胞株；转染Lgr5基因的结肠癌细胞体外增殖速度加快，形成的细胞球大而紧密但迁移能力下降。结论Lgr5基因转染促进结肠癌细胞株体外的生长，为进一步研究人Lgr5分子的生物学特性及其在结肠癌中的作用机制奠定了基础。