鸭坦布苏病毒江苏XZ株的分离和鉴定

从江苏徐州地区分离到的以引起樱桃谷鸭产蛋下降和死亡为特征的1株病毒，命名为XZ株。对该病毒进行电镜观察、血凝试验、ELD50测定、RT—PCR扩增特异性目的基因、序列比对分析和动物回归试验。结果显示，分离毒株能致死鸭胚和鸡胚，电镜下观察到球形病毒粒子，不具有血凝性，对病料和接毒鸭胚尿囊液进行RT—PCR，均可扩增出基因片段，其核苷酸序列与坦布苏病毒奉贤株的相似性最高，为98．7％，与其他坦布苏病毒的毒株也具较高同源性，为86％～98％。用鸭胚分离毒株接种健康产蛋鸭，能复制出同样的疾病。结果表明分离病毒为鸭黄病毒属的坦布苏病毒。

NDV江苏分离株F蛋白潜在抗原表位分析

从可塑性、亲水性、表面可能性、抗原性、二级结构等5项参数指标来综合预测1株基因Ⅶ型新城疫病毒（Newcastle disease virus,NDV）,NDV JSXZ株F蛋白的潜在B细胞抗原表位,并比较其与疫苗株La Sota抗原表位的差异,同时对F基因序列进行分析。综合预测显示：NDV JSXZ株F蛋白预测抗原表位有23处;La Sota F蛋白预测抗原表位分别有19处。与La Sota F蛋白相比,NDV JSXZ毒株在222~228、260~267、308~314、401~413位氨基酸处多出4处抗原表位,而在29~37、104~113、482~488位氨基酸有3处抗原表位不同。其中29~37、104~113aa这2处抗原表位位于裂解位点之前,可能对病毒蛋白水解酶的敏感性、毒力等造成影响。应用Protein-TM-Plot软件预测到NDV JSXZ株F蛋白有3个跨膜区域,分别位于9~27,115~143,497~525位氨基酸处,与La Sota株的三个跨膜区位置接近。结果提示,NDV JSXZ株F蛋白与La Sota株F蛋白相比,可能具有相近或更强的抗原性。

现代信息技术在《家畜传染病》课程建设中的应用

主要通过创设信息化教学环境、利用网络系统进行课程教学、移动学习模式三个方面进行《家畜传染病》课程教学与学习模式的探索,并取得较好的效果。

新型鸭坦布苏病毒病亚单位疫苗的研究

为评价真核表达的鸭坦布苏病毒(DTMUV)融合表位蛋白的免疫原性,本研究通过生物信息学技术,对DTMUV E蛋白序列进行分析,筛选2段T细胞表位和8段B细胞表位,采用柔性肽将10条多肽进行拼接,人工合成串联表位基因,利用杆状病毒表达系统对该融合表位蛋白(rTBE)进行表达。经western blot和间接免疫荧光试验证明rTBE能够在在Sf9细胞中有效表达。重组蛋白经镍柱纯化,并采用Al(OH)3乳化(0.1μg/mL),分别以0.3 mL、0.6 mL和0.8 mL的剂量免疫雏鸭,ELISA抗体检测结果表明,rTBE可以诱导雏鸭产生高水平的IgG血清抗体;MTT结果表明,rTBE能够刺激雏鸭脾脏T淋巴细胞增殖;中和抗体试验结果表明,表达的rTBE和DTMUV病商品活疫苗均能够刺激机体产生针对DTMUV的中和抗体。Al(OH)3对照组雏鸭均未产生IgG血清抗体与中和抗体。攻毒保护试验结果显示,0.3 mL rTBE免疫组对雏鸭的保护率为70%,0.6 mL、0.8 mL和商品化疫苗免疫组对雏鸭的保护率均为100%,而Al(OH)3对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中4只死亡。以上结果表明,本研究预测及表达的DTMUV E蛋白融合表位蛋白rTBE具有免疫原性及保护力。以上研究结果为DTMUV新型亚单位疫苗的研究奠定了基础。

杆状病毒表面展示鸭坦布苏病毒E蛋白的免疫原性及保护效果的研究

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭的产蛋量急剧下降。为评价真核表达DTMUV的E蛋白的免疫原性,本研究利用杆状病毒表面展示技术,构建表面展示DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒(r BV-DTMUV-E),将其感染昆虫细胞,从而将E蛋白展示在杆状病毒的表面,并对表达的重组E蛋白(r E)的免疫原性和保护效果进行研究。经western blot和间接免疫荧光试验证明r E能够在Sf9细胞中有效表达;并且呈可溶性表达。重组蛋白经镍柱纯化,并采用氢氧化铝乳化(0.1μg/m L),分别以0.2 m L、0.4 m L和0.6 m L的剂量免疫雏鸭,通过ELISA抗体检测结果证明,r E可以诱导产生高水平的Ig G血清抗体;MTT试验结果表明,r E能够刺激T淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示,其0.2 m L组免疫保护率为80%,0.4 m L和0.6 m L组保护率均为100%,而对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中4只死亡。以上研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定了基础。

鸭坦布苏病毒E基因在昆虫细胞中的分泌表达及免疫原性与保护性研究

鸭坦布苏病毒(DTMUV)为新出现的病毒,主要引起鸭产蛋量急剧下降。本研究通过杆状病毒表达系统,利用蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,Mels)构建分泌表达DTMUV JSXZ株E蛋白的重组杆状病毒,将其感染Sf9昆虫细胞,从而分泌表达DTMUV E蛋白,并对该表达E蛋白的免疫原性和保护效果进行了研究。经Western blotting、IFA试验证明E蛋白可以在Sf9昆虫细胞培养上清中分泌表达;通过免疫雏鸭试验、间接ELISA结果证明E蛋白可以诱导产生高水平的IgG血清抗体;MTT试验结果显示E蛋白能刺激T淋巴细胞增殖;攻毒保护试验结果显示0.3mL组免疫保护率为80%,0.6mL组和0.8mL组保护率均为100%,而PBS对照组雏鸭均表现为典型的DTMUV感染症状,其中3只死亡。上述研究结果为DTMUV亚单位疫苗的研究奠定基础。

鸭坦布苏病毒病诊断方法及防治措施

鸭坦布苏病毒病是一种以出血性卵巢炎为主要病变特点的新发、急性、烈性传染病该病,给我国养鸭业造成了巨大的经济损失.论文就鸭坦布苏病毒病临床诊断方法、病毒分离鉴定、防治措施进行综述,以期为鸭坦布苏病毒病的诊断与防控提供参考.

小反刍兽疫病毒F蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及免疫原性分析

利用Bac-to-Bac杆状病毒昆虫表达系统,构建含有小反刍兽疫病毒(PPRV)F基因的重组质粒F-p Fast Bac HTA,转化大肠杆菌DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒F-Bacmid,转染昆虫Sf9细胞,获得含有PPRV F基因的重组杆状病毒。用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出59 ku左右的表达蛋白,Western blot与间接免疫荧光试验(IFA)检测该蛋白具有很好的反应原性。通过免疫BALB/c小鼠,ELISA结果证明F蛋白可以诱导产生高水平的血清抗体;MTT试验结果显示F蛋白能刺激T淋巴细胞增殖;说明表达的F蛋白具有良好的免疫原性。以上研究结果为小反刍兽疫病毒的检测方法及亚单位疫苗的研究奠定基础。

徐州地区宠物犬饲养存在的问题及对策

随着人们生活水平的提高,城市乡村到处都有宠物犬的身影,宠物犬的养殖数量逐年递增。宠物犬在带给人们欢乐的同时,也引发了一些问题。笔者走访徐州市相关企业和部门,就徐州宠物犬饲养状况进行了调查,仅供大家参考。

鸭坦布苏病毒E蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

鸭坦布苏病毒（DTMUV）为新出现的病毒，主要引起鸭的产蛋量急剧下降。本研究通过杆状病表达系统，表达DTMUVJSXZ株E蛋白的重组杆状病毒，将其感染昆虫细胞，从而表达重组E蛋白，经Westem blott、间接免疫荧光试验证明E蛋白可以在Sf9细胞中正确表达。

1株鸭源新城疫病毒HN蛋白潜在抗原表位的分析

为了比较鸭源新城疫病毒(NDV)XZ株的HN蛋白的抗原表位与La Sota疫苗株间的差异,试验采用可塑性、亲水性、表面可能性、抗原性、二级结构等5项参数指标来综合预测鸭源NDV XZ株与疫苗株La Sota株HN蛋白的潜在B细胞抗原表位。结果表明:鸭源NDV XZ株HN蛋白预测抗原表位有26个,La Sota株HN蛋白预测抗原表位有25个。与La Sota株HN蛋白相比,多出2个抗原表位,缺失1个抗原表位。这3个表位的变化可能会对病毒识别细胞膜上的唾液酸受体及机体的免疫应答造成影响。两者HN蛋白都只有1个跨膜区域,位置接近。说明鸭源NDV XZ株HN蛋白与La Sota株HN蛋白相比,可能具有相近的抗原性,还需要进一步验证。