紫杉醇放射增敏作用的分子机制

背景与目的:紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。方法:克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同剂量照射对KB细胞增殖抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因;荧光定量PCR验证芯片提示细胞分裂相关基因PRC1、cyclinB2的变化。结果:紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol/L药物协同射线作用时SERD0及SERDq分别为2.40±1.87、12.23±2.81。药物加照射处理后G1期细胞由48.32±2.40%下降为15.73±7.00%(P<0.01),G2/M期细胞由13.66±2.16%上升到52.51±5.02%(P<0.01)。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRC1和CyclinB2均下调表达,与芯片结果一致。结论:紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和CyclinB2表达特异性下调,导致双极纺锤体形成受阻,细胞无法完成正常的分裂,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。

氚水的内照射损伤实验研究

为探讨氚水染毒后小鼠外周血白细胞总数和骨髓嗜多染红细胞微核率的改变,小鼠腹腔注入不同初始量的氚水,2、4、6、10和28 d眼球摘除取血,处死后取两侧股骨,并计数外周血白细胞总数和骨髓嗜多染红细胞微核率。结果表明,随氚水初始注入量的增加,骨髓嗜多染红细胞微核率相应增高(p<0.05),外周血白细胞总数相应降低,但只有初始注入量为16.65×105Bq/g的剂量组差异有统计学意义。氚水初始注入量相同时,随注入后时间延长,骨髓嗜多染红细胞微核率持续增加,外周血白细胞总数第2天至第6天持续下降(p<0.05),第10天后已恢复。表明外周血白细胞和骨髓嗜多染红细胞微核,可作为氚水染毒后的早期辐射损伤指标。

^(131)I标记曲妥珠单抗对高表达HER-2/neu人卵巢癌的体内外实验研究

目的:观察131I标记的曲妥珠单抗(trastuzumab,商品名为Herceptin)在体内外,对高表达人表皮生长因子受体-2(human epidermal growth factor receptor-2,HER-2)/neu的人卵巢癌细胞的靶向治疗作用。方法:采用Iodogen法用131I标记Her-ceptin,制备获得131I-Herceptin。实验设131I-Herceptin与顺铂(cisplatin,DDP)联用组、131I-Herceptin组、Herceptin组、DDP组及空白对照组。MTT法检测各实验组中不同药物处理对人卵巢癌SKOV3细胞的生长抑制作用。成功种植人卵巢癌SKOV3细胞移植瘤后,将荷瘤裸鼠随机分为5组,每周经尾静脉用药,连续6周,每周测量1次小鼠肿瘤的长径、短径及体质量,用药结束1周后处死小鼠,计算抑瘤率;并且采用HE染色法观察肿瘤细胞凋亡的情况,TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡指数;最后采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中p53和HER-2蛋白的表达情况。结果:131I-Herceptin组的体外细胞生长抑制率及体内抑瘤率明显高于Herceptin组及DDP组;131I-Herceptin与DDP联用具有协同作用,131I-Herceptin和DDP联用组的体内肿瘤细胞凋亡指数显著高于其他各实验组,其p53和HER-2蛋白表达率则下降。结论:131I-Herceptin在体内外均能有效抑制高表达HER-2的人卵巢癌细胞生长,且与DDP联用具有协同作用。推测其可能的机制为,131I-Herceptin除影响体内HER-2蛋白表达外,还能通过内照射产生细胞毒作用,并参与p53基因调控。

塞来昔布对大鼠急性放射性脑损伤的保护作用

为探讨塞来昔布对电离辐射诱发的急性脑组织损伤的脑保护作用,将成熟的SD大鼠随机分为对照组、照射组(6 MeV电子线全脑单次垂直照射,吸收剂量为10 Gy)和照射加药物组(6 MeV电子线全脑单次垂直照射,吸收剂量为10 Gy+塞来昔布30 mg/kg体重灌胃给药)。实验大鼠分别在不同时间点处死、取脑组织。应用干-湿重法测定脑组织含水量,病理切片观察大鼠脑组织形态变化,免疫组化法观察脑组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果显示:与对照组相比,SD大鼠照射后脑组织含水量明显升高,照射加药物组大鼠各时间点脑组织含水量较照射组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。全脑照射后,照射组大鼠脑组织切片呈现典型脑水肿表现,照射加药物组脑水肿程度较照射组轻。照射加药物组大鼠各时间点脑组织中GFAP阳性细胞的数量较照射组显著减少,差异有统计学意义(P<0.05),两组全脑照射后大鼠脑组织中GFAP阳性表达均较对照组明显升高。塞来昔布能有效地降低脑组织含水量,减轻脑组织水肿的程度,保护脑组织,并能减轻胶质细胞的损伤程度,起到保护神经元的作用。

ELAC2对乳腺癌细胞MCF-7浸润转移和放射敏感性的影响

为了探讨ELAC2对乳腺癌细胞MCF-7浸润转移和放射敏感性的影响,利用脂质体转染法将ELAC2基因转入MCF-7细胞,Western blot法检测ELAC2、cyclinB、CDC2和P53蛋白表达水平,细胞划痕法和Boyden小室法检测细胞浸润转移能力,集落形成法检测细胞存活分数,流式细胞仪检测细胞周期。结果表明,成功构建了ELAC2高表达的MCF-7/ELAC2细胞株;ELAC2高表达明显抑制细胞的浸润和转移;细胞受X线照射后,ELAC2高表达使细胞放射敏感性增强,G2期细胞比例增多,同时cyclinB表达降低,P53和Tyr-15磷酸化CDC2表达升高。提示ELAC2高表达可明显抑制细胞浸润和转移;ELAC2高表达使细胞辐射敏感性增加很可能与下调cyclinB、上调P53和Tyr-15磷酸化CDC2蛋白水平有关。

离心超滤法测定蛋白质标记物的放射化学纯度

用高效液相色谱法(HPLC)、三氯醋酸(TCA)沉淀法和超滤法分离测定125I-AAFP(抗过敏融合蛋白)标记物的放射化学纯度(RCP),并对其进行比较。结果表明:三种方法均能有效分离标记物和游离碘,用超滤法、TCA沉淀法和HPLC三种方法测定125I-AAFP低、中、高放射化学纯度,样本的RCP分别为0.62%±0.21%、7.25%±1.38%、0.97%±0.12%,61.58%±0.52%、63.18%±1.98%、63.77%±1.23%,98.89%±0.31%、98.76%±0.41%、98.80%±0.82%。当RCP很低时,超滤法与HPLC法测得的RCP间无明显差异(P>0.05),而要低于TCA沉淀法(P<0.05);除此之外,三种方法无明显差异(P>0.05)。这说明离心超滤法可用于分离测定蛋白质标记物的放射化学纯度。

医学留学生《泌尿外科》教学实践探讨

随着信息化建设步伐的加快和推向纵深,软件技术人才的需求越来越大,培养符合企业需求的高技能应用型软件技术人才是关键。在分析目前国内职业教育存在问题的基础上,给出了高职软件技术专业教育工学结合解决思路及实施方案,方案的执行可为软件技术专业工学结合教学提供保障,提高教学质量。

新型促排剂WSC-DTPA纳米粒对内污染铀的促排和防护作用

研究水溶性低分子壳聚糖-二乙烯三氨五乙酸(WSC-DTPA)纳米粒对内污染铀的促排效果和防护作用。对大鼠采用腹腔注射硝酸铀酰(0.5 mgU·kg-1)染毒,即刻分别尾静脉注射92.7%WSC-DTPA纳米粒、1.59%WSC-DTPA纳米粒和WSC纳米粒和DTPA-CaNa3,给药剂量均为60mg·kg-1,ICP测量第1d、2d、3d的尿和粪中铀的排出量,以及给药3 d后肝、脾、肾和骨中铀蓄积量;相同方式的染毒(2.0 mgU·kg-1)和处理,测量给药5d后肝、脾、肾和骨中铀蓄积量,并通过肝、肾、脾的病理切片和骨髓细胞涂片,观察损伤程度。结果显示:92.7%WSC-DTPA纳米粒、1.59%WSC-DTPA纳米粒和DTPA-CaNa3有较好的促排效果,且1.59%WSC-DTPA纳米粒促排效果明显优于DTPA-CaNa3组,有显著性差异(p<0.05);0.5mgU·kg-1染毒给药组的组织蓄积量明显低于对照组;组织切片显示:92.7%WSC-DTPA纳米组对2.0mgU·kg-1染毒大鼠的肝、肾有保护作用。结果表明:92.7%WSC-DTPA纳米粒不仅有促排作用,而且对铀染毒的大鼠的肝、肾组织有辐射防护作用。

CT引导下3D共面模板辅助^(125)I放射性粒子植入近距离治疗纵隔淋巴结转移

目的:对比性分析CT引导下3D共面模板与非模板辅助^(125)I放射性粒子植入近距离治疗纵隔淋巴结转移瘤的方法和临床价值。方法:回顾性分析23例^(125)I放射性粒子治疗的纵隔淋巴结转移瘤患者的临床资料,其中13例为3D共面模板辅助放射性粒子植入,年龄23～77岁,平均(64±10)岁;10例为非模板辅助放射性粒子植入,年龄55～84岁,平均(68±13)岁。所有患者进行术前计划、术中优化及术后剂量学验证。采用配对t检验比较手术前后90%靶体积的最小吸收剂量(D90)、最小周边剂量(MPD)及100%、150%、200%处方剂量覆盖的靶区体积占靶区总体积的百分比(分别为V100、V150、V200)。并比较两组手术操作时间的差异及并发症的情况。结果:23例患者均成功完成治疗,未发生与手术相关的严重并发症。3D共面模板辅助放射性粒子植入组平均植入放射性粒子30粒,非3D共面模板辅助放射性粒子植入组平均植入放射性粒子23粒。3D共面模板辅助放射性粒子植入组和非模板辅助放射性粒子植入组V100术前计划分别为(97.16±2.74)%、(95.44±1.37)%,术后分别为(95.66±2.58)%、(90.40±3.56)%,术后均较术前计划减小,差异有统计学意义(t值分别为5.563、5.827,P <0.05)。两组D90、MPD、V150、V200手术前后比较差异均无统计学意义(P> 0.05)。手术操作时间,3D共面模板辅助放射性粒子植入组为(49.04±1.75)min,非模板辅助放射性粒子植入组为(66.13±1.77)min,两组比较差异有统计学意义(P<0.0001)。结论:使用3D共面模板辅助放射性粒子植入治疗纵隔淋巴结转移可以更精确地达到术前规划的优化,且缩短了手术操作时间,提高了患者的耐受度。

WSC-DTPA纳米粒辐射防护作用的初步研究

为研究WSC-DTPA(水溶性低分子量壳聚糖WSC,二乙烯三胺五乙酸DTPA)纳米粒的辐射防护作用,采用N-乙酰化反应和离子凝胶法制备不同游离氨基含量的WSC-DTPA纳米粒;MTT法检测其对6 Gy60Coγ射线照射后48 h BRL细胞存活率的影响;活细胞工作站观察BRL细胞摄取FITC-WSC-DTPA纳米荧光探针的情况。结果表明:成功合成了游离氨基含量分别为92.7%、74.3%、1.59%的WSC-DTPA聚合物;WSC、WSC纳米粒以及WSC-DTPA纳米粒(氨基含量为92.7%,浓度在6.25μg/mL以上),随着药物浓度的增加,BRL细胞存活率均显著高于单纯照射组,差别有统计学意义(p<0.05),而游离氨基含量为1.59%的WSC-DTPA纳米粒无辐射保护作用;活细胞工作站检验结果显示2 h内WSC纳米粒、WSC-DTPA纳米粒能够进入BRL细胞,而非纳米化的WSC-DTPA聚合物无法进入细胞。

基于GB 18871-2002的放射性核素肺吸收类别的选用

当核与辐射突发事件发生时,对相关人员进行内照射剂量快速估算,便于做出及时的处理和干预。本文主要针对使用肺吸收类别时可能会遇到的一些问题及GB 18871—2002附表中缺失核素的剂量转换系数的取值,结合福岛核电站事故污染情况进行简单的介绍,提出相关使用建议:(1)针对附表B3工作人员的肺吸收类别的选用可参考附表B5,后者给出了89种元素的不同化学形态的肺吸收类别。对于附表B3中氢、碳、硫的数据缺失可以选用ICRP第68号出版物中的具体数值。(2)针对附表B7公众人员的肺吸收类别的选用,可参考附表B8列出的ICRP出版物,后者还列出了肺吸收类别情况已知的31种元素及其参考缺省值。(3)对于公众吸入的其余60种元素,ICRP第71号出版物建议在具体资料未知的情况下使用M类别的系数进行计算,这样既不过分高估也不过分低估待积有效剂量。

17-AAG对HeLa细胞和V79细胞放射敏感性的影响

为研究17-AAG对肿瘤细胞和正常细胞辐射敏感性的影响,以人宫颈癌Hela细胞和中国仓鼠肺成纤维细胞V79为研究对象,用克隆形成实验观察细胞的存活率。结果表明,17-AAG能明显降低受X射线照射的Hela细胞的存活率,而对V79细胞的存活率则无明显影响,表明17-AAG对HeLa细胞具有放射增敏作用,对V79细胞无放射敏感影响。

AS1411对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性的影响

以宫颈癌细胞株HeLa为研究对象,采用CCK-8法检测AS1411对HeLa细胞生长的增殖-毒性作用,并利用克隆形成实验观察AS1411对Hela细胞放射敏感性的影响。结果表明:AS1411的细胞毒性很小,不同浓度(0nmol/L、50nmol/L、100nmol/L、250nmol/L、500nmol/L)AS1411在24h、48h、72h时间点的HeLa细胞存活率均>95%;克隆形成实验显示AS1411联合X射线能够降低照射后HeLa细胞的存活率,且HeLa细胞在药物浓度为100 nmol/L、250 nmol/L、500 nmol/L时的放射增敏比(SER)分别为1.06、1.58和1.89。本实验研究证实AS1411对HeLa细胞具有放射增敏作用。

双基因联合放射提高脑胶质瘤疗效的研究进展

基因方法治疗脑胶质瘤已成为生物学领域研究的热点,而双基因结合治疗研究倍受关注。基因–放射联合成为脑胶质瘤治疗的新思路,它实施放射治疗和基因治疗联合的策略。本工作在综述脑胶质瘤基因治疗研究的基础上,重点阐述双基因与放射联合的特点及最新研究进展。

凝溶胶蛋白在C57BL/6小鼠急性放射肺损伤中的表达

为研究小鼠辐射诱导肺损伤后凝溶胶蛋白(Gelsolin,GSN)在血浆和肺组织中的表达,分别采用4 Gy和20Gy剂量的X射线对C57BL/6小鼠进行全身及胸部单次照射。且在照射后取不同时间点ELISA Kit检测小鼠血浆型Gelsolin(Plasma GSN,pGSN)蛋白含量和Western blot法检测小鼠肺组织胞浆型Gelsolin(Cytoplasmic GSN,cGSN)蛋白含量。同时,检测20 Gy X射线胸部照射后不同时间点小鼠右肺肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中的细胞总数和总蛋白的含量。结果表明,全身照射组小鼠在照射后24 h时,pGSN水平降低,而胸部照射组pGSN水平在24-48 h持续降低,下降速度慢于全身照射组,之后两组pGSN均逐渐上升。在照射后24 h时小鼠肺组织cGSN含量低于正常水平,照射后48 h时则高于正常水平,48-96 h持续下降。但在照射后96 h时全身照射组cGSN含量恢复到正常,胸部照射组仍高于正常水平。小鼠胸部照射后在24 h时,右肺BALF中细胞总数和总蛋白浓度显著高于正常水平,约达正常值的16倍,24-96 h持续下降,与肺组织cGSN含量变化存在一定程度的负相关。推测GSN可能促进急性放射肺损伤的修复。

放射性实验室的安全管理

目的加强放射性实验室的安全管理,确保开展教学工作和完成科研任务。方法依据国家的相关法规和标准,结合高校的放射性实验室的特点和承担的任务。结果建章立制、设立机构、加强建设、严格管理。立措施、抓落实做到"预防为主,防治结合",确保辐射安全。结论放射性实验室的安全是所在高校维护正常教学秩序完成科研工作的重中之重。

用shRNA下调泛素表达抑制人肺癌H1299细胞生长并促进其凋亡

目的通过下调人肺癌细胞中泛素(Ub)基因的表达,研究其对肺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法设计沉默泛素基因表达的shRNA-UBB、shRNA-UBC质粒,用反转录PCR及Western blot法验证shRNA的沉默效果;研究泛素低表达后H1299细胞的生长和克隆形成能力的变化;采用annexin V-PE及DNA片段法检测细胞凋亡变化;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期的变化。结果敲减泛素基因(Ub-KD)48、72 h后,能明显抑制H1299细胞的增殖、降低细胞的克隆形成率;与对照组相比,Ub-KD(shRNA-UBB/UBC)组细胞凋亡率显著增加(shRNA-NC:5.60%,shRNA-UBB:9.07%,shRNA-UBC:11.70%,shRNA-UBB/UBC:17.82%)。联合shRNA-UBB、shRNA-UBC作用下能显著增加H1299细胞G1期比例(shRNA-NC:34.53%,shRNA-UBB:34.40%,shRNA-UBC:42.77%,shRNA-UBB/UBC:50.20%)。结论联合敲减UBB、UBC基因通过增加细胞凋亡及细胞G1期阻滞抑制肺癌细胞的生长及克隆形成能力。

青蒿素对人乳腺癌细胞MDA-MB-435辐照后微核的影响研究

本实验主要分析青蒿素作用后p53功能突变的人乳腺癌细胞MDA-MB-435微核的变化。通过MTT法测定不同药物浓度及不同药物作用时间对细胞毒性的影响,通过胞质分裂阻滞法(CB法)计数青蒿素作用联合不同剂量60Coγ射线照射后细胞的微核率(Micronucleus frequency,MNF)和微核细胞率(Micronucleus cell frequency,MNCF),将青蒿素作用的细胞与单纯照射细胞的微核率和微核细胞率的统计分析结果进行比较。实验结果表明,青蒿素对实验细胞MDA-MB-435毒性较小,在实验药物浓度为200μmol/L,作用时间为24h时,将CB微核法得到的数据进行回归拟合可以得到药物作用及未经药物作用的剂量效应曲线,比较两组曲线,青蒿素作用组的微核率及微核细胞率明显高于单纯照射细胞(p>0.05)。

顺铂作用HeLa细胞的蛋白质组学研究

目的:用双向电泳--质谱法分析顺铂作用于人宫颈癌HeLa细胞后蛋白质组的变化。方法:体外培养HeLa细胞,用MTT法观察不同时间、不同浓度顺铂对细胞的增殖抑制作用。加入10μg/mL顺铂作用于细胞24h,提取总蛋白,进行双向电泳测定,凝胶考染显色,用Image Master2D Platium5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质。切取差异点,胶内酶切后进行MALDI-TO-F-MS分析和数据库搜索,实现对蛋白点的定性鉴定。结果:顺铂可显著抑制HeLa细胞的生长,且具有一定的时效和量效关系。经双向电泳和质谱后,成功鉴定了7个蛋白质,包括原肌球蛋白、肌动蛋白、磷酸丙糖异构酶,磷酸甘油酸激酶和亲环蛋白A等。结论:顺铂可显著抑制HeLa细胞的生长,并引起HeLa细胞蛋白质组的改变,可能与顺铂的抗肿瘤作用有关。