紫杉醇放射增敏作用的分子机制

背景与目的:紫杉醇作为一种放射增敏剂,能稳定微管系统,把细胞阻断在G2/M期从而改变肿瘤细胞的放射反应性。但其分子机制目前还未完全阐明,本文旨在研究紫杉醇的放射增敏作用及其分子机制。方法:克隆形成实验分析不同浓度紫杉醇联合不同剂量照射对KB细胞增殖抑制率的影响,多靶单击拟合模型方程测定各组细胞放射增敏比并评价增敏效果;流式细胞仪检测KB细胞经紫杉醇及射线共同作用后细胞周期分布变化;采用基因芯片技术筛选与紫杉醇放射增敏作用相关的差异表达基因;荧光定量PCR验证芯片提示细胞分裂相关基因PRC1、cyclinB2的变化。结果:紫杉醇与射线协同作用能明显抑制KB细胞增殖,20nmol/L药物协同射线作用时SERD0及SERDq分别为2.40±1.87、12.23±2.81。药物加照射处理后G1期细胞由48.32±2.40%下降为15.73±7.00%(P<0.01),G2/M期细胞由13.66±2.16%上升到52.51±5.02%(P<0.01)。基因芯片结果显示的差异变化基因中共有176条与紫杉醇放射增敏作用相关,10条在调控细胞分裂过程中起作用,其中上调表达2条,下调表达8条。荧光定量PCR证实与细胞分裂相关的PRC1和CyclinB2均下调表达,与芯片结果一致。结论:紫杉醇对KB细胞有明显的放射增敏作用,其机制可能是使细胞有丝分裂相关基因PRC1和CyclinB2表达特异性下调,导致双极纺锤体形成受阻,细胞无法完成正常的分裂,从而使细胞增殖受到抑制并最终死亡。

离心超滤法测定蛋白质标记物的放射化学纯度

用高效液相色谱法(HPLC)、三氯醋酸(TCA)沉淀法和超滤法分离测定125I-AAFP(抗过敏融合蛋白)标记物的放射化学纯度(RCP),并对其进行比较。结果表明:三种方法均能有效分离标记物和游离碘,用超滤法、TCA沉淀法和HPLC三种方法测定125I-AAFP低、中、高放射化学纯度,样本的RCP分别为0.62%±0.21%、7.25%±1.38%、0.97%±0.12%,61.58%±0.52%、63.18%±1.98%、63.77%±1.23%,98.89%±0.31%、98.76%±0.41%、98.80%±0.82%。当RCP很低时,超滤法与HPLC法测得的RCP间无明显差异(P>0.05),而要低于TCA沉淀法(P<0.05);除此之外,三种方法无明显差异(P>0.05)。这说明离心超滤法可用于分离测定蛋白质标记物的放射化学纯度。

医学留学生《泌尿外科》教学实践探讨

随着信息化建设步伐的加快和推向纵深,软件技术人才的需求越来越大,培养符合企业需求的高技能应用型软件技术人才是关键。在分析目前国内职业教育存在问题的基础上,给出了高职软件技术专业教育工学结合解决思路及实施方案,方案的执行可为软件技术专业工学结合教学提供保障,提高教学质量。

基于GB 18871-2002的放射性核素肺吸收类别的选用

当核与辐射突发事件发生时,对相关人员进行内照射剂量快速估算,便于做出及时的处理和干预。本文主要针对使用肺吸收类别时可能会遇到的一些问题及GB 18871—2002附表中缺失核素的剂量转换系数的取值,结合福岛核电站事故污染情况进行简单的介绍,提出相关使用建议:(1)针对附表B3工作人员的肺吸收类别的选用可参考附表B5,后者给出了89种元素的不同化学形态的肺吸收类别。对于附表B3中氢、碳、硫的数据缺失可以选用ICRP第68号出版物中的具体数值。(2)针对附表B7公众人员的肺吸收类别的选用,可参考附表B8列出的ICRP出版物,后者还列出了肺吸收类别情况已知的31种元素及其参考缺省值。(3)对于公众吸入的其余60种元素,ICRP第71号出版物建议在具体资料未知的情况下使用M类别的系数进行计算,这样既不过分高估也不过分低估待积有效剂量。

放射性实验室的安全管理

目的加强放射性实验室的安全管理,确保开展教学工作和完成科研任务。方法依据国家的相关法规和标准,结合高校的放射性实验室的特点和承担的任务。结果建章立制、设立机构、加强建设、严格管理。立措施、抓落实做到"预防为主,防治结合",确保辐射安全。结论放射性实验室的安全是所在高校维护正常教学秩序完成科研工作的重中之重。

苏州市放射工作人员2011年体检与防护培训状况分析

目的了解放射工作人员性别、行业、文化程度、工种对体检与培训的影响。方法对2011年苏州市职业健康体检数据库和防护培训数据库相关项目进行筛选,按照性别、从事行业、文化程度、工种计数,分析其对体检和培训的影响。结果参加培训中工作人员的体检率女性高于男性,而参加体检的工作人员中培训情况是没有性别差异;参加培训的医学类放射工作人员比工业类有更高的体检率;培训人员中体检率并不随着文化程度提高而增高,高中和大专学历组体检率最高;体检人员的培训率在工种上有差异,操作工培训率最低。结论体检和培训工作之间是相互联系,相互影响,有着同等重要的地位。

用shRNA下调泛素表达抑制人肺癌H1299细胞生长并促进其凋亡

目的通过下调人肺癌细胞中泛素(Ub)基因的表达,研究其对肺癌细胞生长的影响及其作用机制。方法设计沉默泛素基因表达的shRNA-UBB、shRNA-UBC质粒,用反转录PCR及Western blot法验证shRNA的沉默效果;研究泛素低表达后H1299细胞的生长和克隆形成能力的变化;采用annexin V-PE及DNA片段法检测细胞凋亡变化;PI染色结合流式细胞术检测细胞周期的变化。结果敲减泛素基因(Ub-KD)48、72 h后,能明显抑制H1299细胞的增殖、降低细胞的克隆形成率;与对照组相比,Ub-KD(shRNA-UBB/UBC)组细胞凋亡率显著增加(shRNA-NC:5.60%,shRNA-UBB:9.07%,shRNA-UBC:11.70%,shRNA-UBB/UBC:17.82%)。联合shRNA-UBB、shRNA-UBC作用下能显著增加H1299细胞G1期比例(shRNA-NC:34.53%,shRNA-UBB:34.40%,shRNA-UBC:42.77%,shRNA-UBB/UBC:50.20%)。结论联合敲减UBB、UBC基因通过增加细胞凋亡及细胞G1期阻滞抑制肺癌细胞的生长及克隆形成能力。

脂质体法pcDNA3-ELAC2质粒转染乳腺癌细胞MCF-7和MDA-MB-231以及前列腺癌细胞Du-145

目的:构建稳定、高效表达ELAC2基因的乳腺癌细胞模型MCF-7/ELAC2、MDA-MB-231/ELAC2,以及前列腺癌细胞模型Du-145/ELAC2,为探索ELAC2基因的生物学功能奠定实验基础。方法:将构建pcDNA3-ELAC2的质粒采用脂质体法转染乳腺癌细胞和前列腺癌细胞,用RT-PCR和WesternBlot分别检测ELAC2基因在细胞中的mRNA表达和蛋白表达。结果:pcDNA3-ELAC2质粒构建成功并顺利导入乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中,且检测到ELAC2基因的mRNA和蛋白高表达。结论:构建的pcDNA3-ELAC2重组质粒能够在转染的乳腺癌细胞和前列腺癌细胞中稳定、持续和高效地表达,为进一步研究ELAC2基因的生物学功能提供了理想的实验模型。

顺铂作用HeLa细胞的蛋白质组学研究

目的:用双向电泳--质谱法分析顺铂作用于人宫颈癌HeLa细胞后蛋白质组的变化。方法:体外培养HeLa细胞,用MTT法观察不同时间、不同浓度顺铂对细胞的增殖抑制作用。加入10μg/mL顺铂作用于细胞24h,提取总蛋白,进行双向电泳测定,凝胶考染显色,用Image Master2D Platium5.0软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异表达的蛋白质。切取差异点,胶内酶切后进行MALDI-TO-F-MS分析和数据库搜索,实现对蛋白点的定性鉴定。结果:顺铂可显著抑制HeLa细胞的生长,且具有一定的时效和量效关系。经双向电泳和质谱后,成功鉴定了7个蛋白质,包括原肌球蛋白、肌动蛋白、磷酸丙糖异构酶,磷酸甘油酸激酶和亲环蛋白A等。结论:顺铂可显著抑制HeLa细胞的生长,并引起HeLa细胞蛋白质组的改变,可能与顺铂的抗肿瘤作用有关。

氡及其子体诱发大鼠体细胞HPRT基因位点的突变

[目的]用多核细胞法研究氡及其子体诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HPRT)基因位点突变情况。[方法]Wistar雄性大鼠24只,采用HD-3型多功能移动式氡室进行动态吸入染毒,按照氡染毒的累计暴露量,分为3个实验组和1个对照组;获取大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞,以多核细胞法检测该两种细胞的HPRT基因突变频率。[结果]大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变频率均随氡累积暴露剂量的增加而相应增加,剂量-效应关系明显,拟合的函数分别为(?)=1.785×10^(-5)D^2+ 1.174×10^(-3)D+1.054和(?)=3.538×10^(-5)D^2+8.338×10^(-4)D+1.032。[结论]氡及其子体能诱发大鼠外周血淋巴细胞和气管-支气管上皮细胞的HPRT基因突变,呈现一定的剂量-效应关系。

活性炭结构改性对氡吸附能力差异的分析研究

活性炭是吸附氡的主要吸附剂,但对于活性炭吸附氡的研究目前主要集中在外界环境条件、氡浓度的改变等对其吸附氡效率的影响。为了从活性炭自身结构分析其对氡吸附的影响程度,通过对普通活性炭进行氧化活化,比较二者的氡吸附能力,最后从二者自身结构的差异分析其与氡吸附能力的关系。

^(125)I标记的[Tyr^3]-Octreotide在小鼠体内的分布及其药代动力学研究

目的探讨125I Ch-T法标记生长抑素类似物奥曲肽的方法,观察其在小鼠体内的生物学分布。方法用Ch-T法进行[Tyr3]-octreotide的125I标记,标记完成后加入NH4HAc以防止标记物的再氧化。Sephadex G-10分离纯化,纸层析测定放化纯,并行小鼠体内分布和药代实验。结果125I-[Tyr3]-octreotide比活度为5.92 TBq/mmol,标记率为76%,放化纯为95%。注射后1.0 h血液中放射性下降了90%,肠道、肝脏和肾脏中均有浓集,标记物24 h内排出体外。结论125I的Ch-T法标记[Tyr3]-octreotide放化纯高,方法简便,标记物的稳定性尚可1。25I-[Tyr3]-octreotide在小鼠体内血液清除快,药代动力学符合二室开放模型,T12α为5.28 min,T12β为141.3 min,经肠-肝途径和泌尿系统排除。

Tamoxifen联合γ线照射对脑胶质瘤细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用

研究三苯氧胺(Tamoxifen,TAM)对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用3H-TdR掺入法、免疫组织化学法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞DNA合成、雌激素受体表达、细胞凋亡及凋亡的形态学特征。结果表明,TAM能抑制细胞DNA合成,与60Coγ线联用抑制作用增强,表现出协同作用。TAM能诱导细胞凋亡,其凋亡率随TAM浓度的升高而增高,凋亡细胞核固缩和核碎裂,可见凋亡小体。而免疫组化结果显示SHG-44细胞不表达雌激素受体。以上结果表明TAM可能通过诱导细胞凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性,而与雌激素受体途径无关。

吸烟大鼠淋巴细胞蛋白质组的双向电泳分析

目的应用双向凝胶电泳(Two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)方法分析烟染毒大鼠外周血淋巴细胞蛋白质组表达的改变。方法雄性Wistar大鼠随机分正常对照组和烟染毒组,烟染毒组分小、中、大剂量,分离各组大鼠的外周血淋巴细胞,提取总蛋白,2-DE分离总蛋白,电泳凝胶银染显色,用ImageMaster 2D Platinum软件对获得的蛋白图谱加以分析,寻找差异蛋白点。结果与正常对照组大鼠图谱比较,烟染毒组图谱中与剂量有相关性变化的差异表达蛋白点有10个,其中6个随烟染毒剂量增加表达下降,4个随烟染毒剂量增加表达增强。结论2-DE可以有效分离大鼠外周血淋巴细胞蛋白质,大鼠烟染毒后淋巴细胞蛋白质的表达发生改变。

微剂量学模型的建立及应用

微剂量学是研究微观体积内辐射能量的时空分布的学科。本文从微剂量学的基础剂量学量开始,针对微剂量学领域模型的建立方法展开综述,主要探讨了目前广泛应用的生物效应模型,并对物理因子和生物因子进行详细分析,最后介绍了微剂量学模型当前的国内外研究进展。

hnRNPD在食管鳞状细胞癌的表达及意义

目的研究食管鳞状细胞癌(ESCC)组织异质性胞核核糖核蛋白D(hnRNPD)的表达与ESCC临床病理特征的关系,通过下调人ESCC细胞中hnRNPD水平,观察对ESCC细胞生长的影响及可能机制。方法用免疫组织化学染色法检测ESCC组织及癌旁组织中hnRNPD的蛋白表达;转染siRNA-hnRNPD下调hnRNPD基因表达,用Western blot法验证沉默效果;MTT法及克隆形成实验检测下调hnRNPD基因表达后ESCC细胞生长情况的变化;采用藻红蛋白标记的膜联素Ⅴ/7-氨基放线菌素D(annexinⅤ-PE/7-AAD)双染色法结合流式细胞术检测基因下调后细胞凋亡变化。结果 hnRNPD在ESCC组织中高表达;hnRNPD在ESCC组织中表达水平与肿瘤分期存在相关性;hnRNPD基因表达的下调能明显抑制ESCC细胞的生长和克隆形成能力;下调hnRNPD基因表达后,与对照组相比,ESCC细胞凋亡明显增加。结论下调hnRNPD基因表达通过增加细胞凋亡抑制ESCC细胞生长及克隆形成能力。

转录因子Yin Yang1(YY1)在食管癌中的表达及其对食管癌细胞功能的影响

目的:探讨转录因子Yin Yang 1(YY1)在正常食管组织和食管鳞癌组织中的表达及其在食管癌发生发展中的作用。方法:免疫组化染色检测15例正常食管组织,39例食管癌旁组织和88例食管癌组织样品中YY1蛋白表达水平;噻唑蓝(MTT)和克隆实验检测食管鳞癌细胞(TE-1细胞)增殖和生长变化;蛋白质印迹(Western blot)技术检测转染后转录因子YY1和p21表达水平;细胞划痕实验和Transwell实验检测TE-1细胞迁移、侵袭能力的变化。结果:与正常食管组织和食管癌旁组织相比,YY1蛋白在食管鳞癌组织样品中的表达显著提高。此外,转染了YY1过表达载体后明显抑制TE-1细胞生长,而干扰YY1表达则可促进细胞的生长;同时伴随着YY1靶基因p21(也称p21WAF1/Cip1)的变化。TE-1细胞转染YY1过表达载体后,细胞的侵袭、迁移能力增强。结论:食管鳞癌组织中YY1表达显著上调,YY1可调节细胞的生长和转移侵袭能力。因此,YY1有望成为食管癌诊断和发展的分子标志物,也有可能是食管癌基因治疗的一个潜在靶点。

细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒对小鼠亚致死剂量辐射损伤的预防作用

为研究细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒(C60(OH)24-SLN-E)对亚致死剂量60Coγ射线照射致小鼠辐射损伤的防护作用,采用SPF级雄性ICR小鼠,连续7天腹腔注射细胞核靶向富勒醇硬脂质纳米粒,于第7天送往辐照中心接受60Coγ射线全身均匀照射,照射剂量为6 Gy,照射剂量率为0.42 Gy/min,观察照后小鼠一般情况、体重变化,测定照后14天小鼠外周血液学参数的变化。结果表明,细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒(C60(OH)24-SLN-E)能有效减轻亚致死剂量60Coγ射线所引起的小鼠体重、外周血白细胞的降低,还可以促进照射后小鼠骨髓红系造血的恢复,与照射对照组相比差异有统计学意义(p<0.05)。说明细胞核靶向富勒醇固体脂质纳米粒(C60(OH)24-SLN-E)对受亚致死剂量60Coγ射线照射的小鼠具有一定的保护作用。

槲皮素和17-AAG对大鼠外周血淋巴细胞辐射敏感性的影响研究

为研究槲皮素和17-AAG对大鼠外周血淋巴细胞增殖与辐射敏感性的的影响,采用CCK-8试验检测槲皮素和17-AAG对体外培养的大鼠外周血淋巴细胞的毒性作用和它们对淋巴细胞辐射敏感性的影响。结果表明,槲皮素对体外培养的大鼠外周血淋巴细胞有一定的保护作用,保护作用与药物浓度和作用时间呈明显负相关。17-AAG对体外培养的大鼠外周血淋巴细胞具有一定的增殖抑制作用,与药物的浓度和作用时间成正相关。且槲皮素和17-AAG对照射后大鼠外周血淋巴细胞无明显的增殖抑制或保护作用。

用罐装氡气校准测氡仪的方法研究

为满足测氡仪校准和检定周期内的期间核查的需要,研制用罐装氡气校准测氡仪的方法。该方法采用氡的衰变规律和氡的测量原理,研制了动态标准物质——罐装氡气,可有效地克服标准镭源的缺乏和缺点,实现测氡仪质量控制活动。实验测试表明,该方法满足《测氡仪检定规程》JJG 825—2013中氡源的要求,用该方法校准测氡仪是可行的。