中药复方开心散调控慢性压力应激小鼠海马神经新生抗抑郁作用机制研究

目的评价开心散调控慢性不可预知压力应激模型小鼠海马神经新生抗抑郁效用,探讨作用机制。方法采用慢性不可预知压力应激构建抑郁小鼠模型,给以开心散水提取物。通过糖水偏嗜率检测、强迫游泳实验、悬尾实验等评价模型小鼠抑郁样行为。采用免疫荧光法检测模型小鼠海马区神经新生情况。采用蛋白免疫印迹法检测小鼠海马神经干细胞标志物巢蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。采用ELISA法检测相应组织中压力应激因子如促肾上腺皮质激素释放因子、促肾上腺皮质激素、皮质醇与神经营养因子如脑源性神经营养因子、神经生长因子的表达。采用小鼠原代神经干细胞,采用免疫荧光法检测开心散对原代神经干细胞增殖情况,采用蛋白免疫印迹法检测巢蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达。结果开心散水提取物显著增加抑郁模型小鼠糖水偏嗜率,降低强迫游泳与悬尾不动时间;同时促进海马组织神经元新生,降低压力应激因子表达,提高神经营养因子表达,上调巢蛋白表达并调控Wnt/β-catenin信号通路。开心散提取物还可促进小鼠原代神经干细胞增殖及蛋白表达,并促进β-catenin入核,调控Wnt/β-catenin信号通路。结论开心散具有改善小鼠抑郁样行为效用,促进海马神经新生以及调控Wnt/β-catenin通路可能是其抗抑郁的重要作用环节与机制。

枸杞叶改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习与记忆能力的效应部位与作用机制研究

目的研究枸杞叶改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习与记忆能力的效应部位与作用机制。方法建立D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型,制备枸杞叶不同溶剂提取部位,通过Y迷宫实验和新物体识别实验评价枸杞叶不同溶剂提取部位对模型小鼠学习与记忆能力的影响;苏木素-伊红(HE)以及尼氏(Nissl)染色观察小鼠海马区病理形态学变化;酶联免疫吸附法检测小鼠海马组织脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)、胶质细胞源性神经营养因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)以及肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素10(IL-10)的含量;试剂盒检测小鼠海马组织中超氧化物歧化酶(SOD)的活力,丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量;TUNEL法检测小鼠脑组织海马区细胞凋亡情况;蛋白印迹法检测小鼠海马组织抗氧化蛋白Nrf2、HO-1以及凋亡蛋白Caspase-3、Caspase-9的表达。结果枸杞叶水提部位和80%醇沉上清部位显著改善模型小鼠学习与记忆能力,改善小鼠海马区组织病理损伤,增加小鼠海马区尼氏体数目,并促进神经营养因子BDNF、NGF、GDNF的表达;下调致炎因子TNF-α、IL-1β、IFN-γ的表达,上调抗炎因子IL-10表达;提升SOD活力和GSH表达,降低MDA表达;提高Nrf2、HO-1抗氧化蛋白的表达;降低Caspase-3、Caspase-9凋亡通路蛋白的表达;抑制模型小鼠脑组织海马区细胞凋亡。结论枸杞叶水提部位和80%醇沉上清部位是枸杞叶改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习与记忆能力的效应部位,其作用途径与抑制中枢氧化应激与炎性应激导致的神经元凋亡有关。

开心散联合氟西汀改善慢性压力应激小鼠抑郁样行为的效应评价研究

目的考察中药复方开心散联合用药氟西汀改善慢性压力应激小鼠抑郁样行为的效用与作用机制。方法采用慢性压力应激构建抑郁小鼠模型,通过糖水偏嗜实验评价开心散与氟西汀联合用药改善模型小鼠抑郁样行为的效用。采用ELISA法测定受试动物血清、海马组织和下丘脑组织中皮质醇(Cortisol)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)的表达。采用HE染色、尼氏染色和TUNEL染色法,观察模型小鼠海马神经元损伤情况。采用Western blot法考察小鼠海马组织中Caspase-3和Caspase-9等凋亡信号通路关键蛋白的表达情况。结果开心散与氟西汀联用能显著上调模型小鼠糖水偏嗜率;同时,联合用药可抑制脑内和血清中压力应激因子的上调,减少小鼠海马区因抑郁导致的细胞凋亡,调控海马区的凋亡信号通路。结论开心散联合氟西汀可有效改善抑郁模型动物的抑郁样行为,减少氟西汀临床用量。两者联用后抑制压力应激轴激活可能是联合用药抗抑郁的作用环节。

杞参益智方改善D-半乳糖注射亚急性衰老模型小鼠学习与记忆能力的效应评价研究

目的评价杞参益智方对D-半乳糖注射亚急性衰老模型小鼠学习与记忆能力的改善效应。方法小鼠皮下注射D-半乳糖构建亚急性衰老动物模型,分别给予阳性药多奈哌齐(2 mg·kg^(-1)·d^(-1))、杞参益智方低剂量组(1.33 g·kg^(-1)·d^(-1))、高剂量组(2.67 g·kg^(-1)·d^(-1)),连续给药30 d。通过水迷宫和Y迷宫实验评价模型小鼠学习与记忆行为;采用HE染色考察模型小鼠海马损伤情况;采用TUNEL法检测小鼠海马组织凋亡情况;采用ELISA法检测小鼠海马组织中氧化应激因子与炎症因子表达水平;采用Western blot法检测小鼠海马凋亡、氧化应激与炎性应激相关信号通路蛋白表达。结果杞参益智方水提取物显著缩短模型小鼠水迷宫测试中潜伏期和上台前路程(P<0.01),增加穿越平台次数(P<0.01);增加模型小鼠Y迷宫新臂探索时间和次数(P<0.05);抑制模型小鼠海马TUNEL荧光表达(P<0.01);上调氧化应激因子超氧化物歧化酶(SOD)活力(P<0.05)与谷胱甘肽(GSH)含量(P<0.05),下调丙二醛(MDA)含量(P<0.05);下调白细胞介素(IL)-1β、IL-6与肿瘤坏死因子(TNF-α)表达水平(P<0.05,P<0.01);下调凋亡信号通路蛋白Cleaved Caspase-3与Caspase-3表达(P<0.05),上调氧化应激信号通路蛋白Nrf2与HO-1表达(P<0.05),下调炎性应激信号通路蛋白p-NF-κB与NF-κB表达(P<0.05)。结论杞参益智方具有改善D-半乳糖注射亚急性衰老模型小鼠学习与记忆能力的作用,可能与其抑制海马氧化应激与炎性应激作用相关。

杞参益智方改善Aβ_(1-42)海马区注射小鼠学习与记忆能力的效用评价与作用机制研究

目的评价杞参益智方对Aβ_(1-42)海马区注射小鼠学习与记忆能力的改善作用,初步探索作用机制。方法小鼠海马区注射b淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))构建拟阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease,AD)动物模型,给予杞参益智方水提取物。通过Morris水迷宫实验和Y迷宫实验评价模型小鼠的学习与记忆能力。采用HE染色观察小鼠海马组织损伤情况。采用TUNEL法检测小鼠海马组织细胞凋亡情况。检测痴呆模型小鼠海马组织中氧化因子、炎症因子的表达和相关的抗氧化蛋白及凋亡蛋白的表达。结果杞参益智方水提取物低剂量组和高剂量组均可显著改善海马A1-42注射小鼠学习与记忆能力,抑制模型动物海马组织细胞凋亡,抑制模型小鼠氧化应激并下调炎症因子IL-6、IL-1β与TNF-α的表达,上调抗氧化蛋白Nrf2与HO-1蛋白的表达并调节凋亡信号通路相关蛋白Caspase-9、Caspase-3、Bax、Bcl-2的表达。结论杞参益智方改善痴呆模型小鼠的效用可能与其调控中枢氧化应激、抑制炎症因子表达并且增加抗氧化蛋白的表达有关。

开心散与氟西汀联合用药快速抗抑郁效用评价研究

目的探讨开心散与氟西汀联合用药快速抗抑郁的效用,并分析其增效机制。方法建立悬尾小鼠抑郁模型,给予开心散与氟西汀0.5 h后,通过测试悬尾不动时间评价联合用药对小鼠抑郁行为的快速改善效果。采用酶联免疫吸附(ELISA)方法测定受试小鼠血清中的促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)、促肾上腺皮质激素(ATCH)、皮质醇(COR)水平,以及海马组织中的COR水平。结果开心散联合氟西汀可显著缩短小鼠悬尾不动时间(P<0.01),并显著降低小鼠血清与海马组织中的COR水平(P<0.01),联合用药效果均优于单独给药。结论开心散与氟西汀联合用药可发挥快速抗抑郁效果,两者的协同效应可能通过抑制压力应激因子COR的表达来实现抗抑郁效果。

近三年抑郁症的中医研究进展

抑郁症(depressive disorder,DD),是一种现代社会常见的心理健康疾病,严重危害患者的身心健康,并给患者及其家庭带来了巨大的心理和经济负担。相较于西医治疗,中医药在治疗DD方面具有独特优势:不良反应小、易于患者接受,并且能够明显改善临床症状。该文将从DD的病因病机、辨证分型以及治疗方法等多个方面探讨近三年来中医药在治疗DD方面的研究进展,为临床抑郁症治疗提供参考支持。

基于GC-MS代谢组学的牛黄解毒片配伍减毒机制研究

目的采用气相色谱-质谱联用(GC-MS)的代谢组学技术探讨牛黄解毒片复方配伍的减毒作用及机制。方法将24只小鼠随机分为空白组、雄黄组(1.0 g·kg^(-1))和牛黄解毒片组(7.8 g·kg^(-1)),每组8只,连续口服给药14 d,采集各组小鼠的肝脏和肾脏,观察病理形态学变化;测定肝脏中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)和肾脏中肌酐(Cr)、尿酸(UA)的含量;GC-MS代谢组学分析肝脏和肾脏中内源性代谢物的差异。结果与雄黄组比较,牛黄解毒片组小鼠肝脏中ALT、AST和肾脏中Cr、UA含量发生显著变化(P<0.05),肝脏和肾脏病理损伤减轻;筛选出柠檬酸、抗坏血酸、天冬酰胺、左旋多巴、苯丙氨酸等17种与减毒相关的生物标志物,涉及谷氨酰胺和谷氨酸代谢、精氨酸的生物合成、色氨酸代谢、酪氨酸和色氨酸的生物合成、苯丙氨酸代谢等通路。结论牛黄解毒片复方配伍降低了雄黄的肝肾毒性,减毒作用可能与回调氨基酸代谢有关。

方剂现代研究的思路与方法

就方剂现代研究方面的一些共性问题并结合本实验室工作的实践,提出集中医与中药、传统与现代、基础与应用的综合优势和多学科的技术手段,探讨方剂现代研究的一些思路和方法,介绍了方剂配伍规律及生物效应研究、方剂活性物质基础研究、新技术在方剂中的应用、方剂信息资源挖掘与利用等研究框架。

中药及方剂量效关系的研究进展与思考

方药量效关系的现代研究是当前中医药研究领域亟待解决的关键科学问题之一。分析了中药及方剂量效关系的研究现状,从研究思路、研究方法等方面进行了思考与探讨,以期为阐明基于中医临床实践经验积累的方药量效关系的基本特征与内在规律提供参考,为中医临床规范合理用药、提高临床疗效,以及为创新中药研究与发现提供借鉴。

茅根炭止血机理的实验研究

目的:研究茅根炭的止血机理。方法:以SD大鼠为研究对象,观察各供试品对凝血系统、纤溶系统、血小板聚集的影响。结果:茅根炭及其活性部位对大鼠凝血系统、血小板聚集功能有显著影响,而对纤溶系统则影响不显著。结论:茅根炭主要通过影响大鼠凝血系统和血小板聚集而增强止血作用。

代谢组学的研究现状及其在方剂量效关系中的应用

代谢组学能够准确、灵敏地反映生物体系的整体功能状态,同时克服了传统中医依赖医生个人经验进行诊疗的不确定性。方剂剂量的变化对其疗效乃至功用的改变都将在代谢组图谱的不同变化趋势中得到体现,从而能够对方剂的量效关系及其物质基础给出全新的解释,获得深入系统的认识。本文综述了代谢组学在中医药现代研究中的应用进展,并针对目前方剂量效关系研究中,方剂的疗效评价只能定性不能定量,导致量效关系不明的困境,提出以代谢组学技术作为方剂的整体疗效评价方法,通过追踪代谢组在病理发展过程中以及药物干预下的变化,开展方剂量效关系研究的新思路。

麦门冬汤合苇茎汤抑制小鼠Lewis肺癌生长的体内实验研究

目的研究麦门冬汤合苇茎汤(简称金方/JIN)对Lewis肺癌小鼠移植瘤的抑制作用并初步探讨药物作用机制。方法皮下注射LLC(Lewis lung carcinoma,Lewis肺癌细胞)于C57/BL6小鼠右腋下,观察小鼠生存期、抑瘤率、胸腺指数和肿瘤组织EGFR/Raf/MEK的表达。结果金方可以显著延长小鼠的生存时间,与对照组相比有显著性差异(P<0.01),金方、DDP组对荷瘤小鼠的抑瘤率分别为35%、89%,金方组胸腺指数明显升高,DDP组胸腺指数明显下降,金方、DDP组的EGFR表达均下降(P>0.05,P<0.01),而各组Raf和MEK表达无显著性差异。结论金方可以显著延长荷瘤小鼠的生存期,有一定的抑制肿瘤增长和增强免疫能力的作用,其机制可能与其下调肿瘤组织中EGFR的表达进而影响其下游信号通路的传导相关。

方剂配伍规律数据挖掘的研究现状及思考

从金·成无己于《伤寒明理论》中以君臣佐使研究张仲景方剂至今，为了把握中医方剂应用历史嬗变的轨迹，寻找中医方剂的配伍方法及组方思路，人们利用哲学、数学等其他学科的方法或手段对方剂配伍规律的研究从未间断过。尤其是近年来，以大量经方、成方或个人临床经验组方中蕴含的配伍规律为分析对象，数据挖掘、人工智能等现代信息技术在中医方剂配伍理论研究中得到了广泛的应用，

蒲黄炭对大鼠凝血系统影响的实验研究

目的观察蒲黄炭对大鼠凝血系统的影响,探讨其发挥止血作用的机理。方法以Wistar大鼠为研究对象,通过测定其凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、血浆纤维蛋白原(FIB)四项指标观察蒲黄炭品对实验动物凝血系统的影响。结果蒲黄炭品对实验动物凝血系统有显著影响;蒲黄正丁醇部位以及蒲黄炭品正丁醇部位对实验动物凝血系统的部分环节有影响;蒲黄生品对实验动物凝血系统无影响。结论通过炮制的蒲黄炭品可以通过影响实验动物凝血系统的多个环节发挥其止血作用。

方剂性味归经配伍规律的图形化知识挖掘研究

主要研究了用于治疗不同证型的方剂的药物性味归经配伍规律。分别以用于治疗血虚血瘀证和血虚血瘀兼有血热证的方剂为研究对象,将方剂中的中药分别按性味归经进行分布,应用计算机图形化技术形成分布图。总结分析了不同证型方剂性味归经分布图的共同特征和差异点,与用于各种证型的方剂相对应,研究其配伍规律。通过该方法得到了治疗血虚血瘀证及兼有血热时的不同方剂作用特点,与传统中医理论一致。该方法用于方剂性味归经配伍规律研究,可以将中医理论转化为数字化的图形研究,更加直观、形象,便于从中发现规律,为中医方剂理论研究提供了新的研究手段。

荆芥穗炭及其有效部位对大鼠凝血系统影响的实验研究

目的:考察荆芥穗炭及其有效部位对大鼠凝血系统的影响,筛选荆芥穗炭的止血活性部位并初步探讨其止血作用的机理。方法:以SD大鼠为研究对象,观察荆芥穗炭及其提取部位对大鼠凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、血浆纤维蛋白原(FIB)的影响。结果:荆芥穗炭品组、荆芥穗炭品鞣质组均可缩短实验动物凝血酶原时间(PT)(P<0.01、P<0.05)、活化部分凝血活酶时间(APTT)(P<0.05、P<0.05)、凝血酶时间(TT)(P<0.05、P<0.05),同时均能提高血浆中纤维蛋白原(FIB)的含量(P<0.05、P<0.05),荆芥穗炭品乙酸乙酯组能缩短实验动物活化部分凝血活酶时间(APTT)(P<0.05),荆芥穗生品则无明显影响(P>0.05)。结论:荆芥穗炭品及其鞣质部位通过影响实验动物的内、外源性凝血途径的共同发挥其止血作用,荆芥穗炭品乙酸乙酯提取物通过影响内源性凝血系统发挥止血作用。

中医方剂物质基础现代研究的策略

方剂是中医临床用药的主要形式和手段,是中医理论整体观和辨证施治的最佳体现,在整个中医药体系中具有举足轻重的地位;开展方剂的现代研究是中医药现代化研究的重要组成部分。本文在总结方剂物质基础研究现状的基础上,提出了方剂物质基础研究的基本思路和对中医方剂现代化研究的策略。

玄参总苷对电凝法致实验性大鼠局灶性脑缺血模型的实验研究

目的探讨玄参总苷对缺血性脑中风的药效学作用。方法采用电凝法致实验性大鼠局灶性脑缺血模型,对电凝中动脉大鼠的行为学进行评分,对梗死指数、脑含水量进行测定,研究玄参总苷对电凝法致实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用。结果玄参总苷可以改善大鼠因中动脉缺血所致的行为学障碍;缩小脑部缺血大鼠的脑梗死面积,降低梗死率;可以降低中动脉栓塞模型大鼠的脑组织含水量。结论玄参总苷对局灶性脑缺血具有较好的保护作用。

类方研究在方剂现代研究中的意义探析

在方剂现代研究中应该关注中医药理论的认识特点,深入探讨具有中医特色的研究思路和方法,使方剂现代研究更吻合于中医药治疗的认识思路,从而有效地反映中医药的优势所在。类方体系是认识中医组方思想和辨证方法科学依据的门径之一。分析了类方研究在方剂现代研究中的重要性,认为类方研究有益于方剂复杂体系的系统认知,有益于对方剂组成原则等核心问题的理解,通过探讨类方组成的灵活性可以为研创新药建立基础。按照中医理性思维认识类方、解读方剂并指导复方研究,将会为复方研究提供一些比较好的研究途径。