弓形虫B1基因套式PCR检测技术研究

本文以弓形虫多拷贝的Ｂ１基因为靶基因建立了套式ＰＣＲ检测技术。弓形虫ＲＨ株、新疆、上海、昆山分离株ＤＮＡ均能出现清晰条带，而人组织及其它微生物ＤＮＡ不出现任何条带，弓形虫套式ＰＣＲ较普遍ＰＣＲ敏感１００倍。昆山分离株经套式ＰＣＲ扩增并进行ＤＮＡ测序与ＲＨ株完全一致。８０例孕妇外周血经弓形虫套式ＰＣＲ扩增４例阳性，阳性率５％。

应用套式PCR技术检测阴道加德纳菌与女性尿路感染的关系研究

目的 探讨阴道加德纳菌与女性尿路感染的关系及临床意义。方法 应用套式聚合酶链反应(nPCR)检测171例尿路感染患者(研究组)和4 1例无膀胱刺激症状及尿液分析正常者(对照组)阴道分泌物及尿液阴道加德纳尔菌核酸。结果 研究组阴道分泌物阴道加德纳菌核酸阳性119例,阳性率6 9.6 % ,尿液阴道加德纳菌核酸阳性10 4例,阳性率6 0 .8% ;对照组阴道分泌物阴道加德纳菌核酸阳性8例,阳性率19.5 % ,尿液阴道加德纳菌核酸阳性8例,阳性率19.5 % ,两组比较差异均有显著性(P均<0 .0 1)。结论 阴道加德纳菌与女性尿路感染的发病关系密切,可能是引起女性尿路感染的重要原因之一。

鲍曼不动杆菌连续分离株耐药性与遗传学特征研究

目的了解鲍曼不动杆菌(ABA)连续分离株耐药性与遗传学特征。方法采用PCR检测85株ABA菌连续分离株耐药基因和整合子、转座子。结果85株中blaADC阳性73株(85.9%),blaOXA-23群阳性50株(58.8%),blaTEM阳性23株(27.1%),ant(3”)-Ⅰ阳性61株(71.8%),aac(6’)-Ⅰ阳性53株(62.3%),aac(3)-Ⅰ阳性39株(45.9%)。存在克隆传播现象。结论临床连续分离的ABA菌β内酰胺酶、氨基糖苷类修饰酶基因携带率高。ABA菌可导致克隆传播医院内感染,并存在暴发性流行。

株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法聚合酶链反应法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记（整合酶基因）、Tn21／Tn501转座子遗传标记（汞离子还原酶基因）检测。结果TEM、SHV型β-内酰胺酶基因，DHA型质粒AmpC酶基因，aac（6’）-I型氨基糖苷类修饰酶基因，qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因，整合子遗传标记（intIl整合酶基因），Tn21／Tn501转座子遗传标记（merA汞离子还原酶基因）检测阳性。结论多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和I类整合子、Tn21／Tn501转座子。

36株多重耐药鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药基因的流行病学研究

目的了解多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因的存在情况。方法收集2012年8—11月江苏大学附属医院和镇江市第一人民医院住院患者的临床标本中分离到的多重耐药鲍曼不动杆菌菌株36株。应用K-B纸片扩散法检测多重耐药鲍曼不动杆菌对抗菌药物的敏感性、应用PCR检测细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因。结果 36株多重耐药鲍曼不动杆菌对头孢哌酮-舒巴坦有较高的敏感率(33.3%),对其他抗菌药物的敏感率均较低(<20.0%)。36株多重耐药鲍曼不动杆菌中氨基糖苷类耐药基因aac(3)-I、aac(6’)-Ib、aph(3’)-I和16S rRNA甲基化酶基因armA的阳性率分别为72.2%(26株)、72.2%(26株)、80.6%(29株)和80.6%(29株)。结论本组多重耐药鲍曼不动杆菌多耐药情况比较严重,其对氨基糖苷类药物耐药与氨基糖苷类耐药基因的存在密切相关。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及β-内酰胺类耐药基因研究

目的分析该院2005年1～12月临床分离的34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征以及B～内酰胺类耐药相关基因存在状况。方法应用BDPhoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验，头孢哌酮／舒巴坦敏感性检测采用K—B法。应用PCR方法检测12种β-内酰胺类耐药相关基因，分别为TEM、SHV、CARB、OXA-10、PER、VEB、GES、DHA、IMP、VIM、GIM、SPM。结果亚胺培南耐药铜绿假单胞菌除对阿米卡星100．00％敏感外，对哌拉西林、哌拉西林／他唑巴坦敏感率为48．00％～55．00％，对第3、4代头孢菌素、氨曲南、喹诺酮类等抗生素抗菌活性差，敏感率为3．22％～29．03％。对美洛配能29．03％敏感，对氨苄西林／舒巴坦、氯霉素、四环素、复方新诺明全部耐药。β-内酰胺类耐药相关基因TEM、CARB、DHA、IMP阳性率分别为5．9％、32．4％、14．7％、17．6％，而SHV、0XA-10、PER、VEB、GES、VIM、GIM、SPM均为阴性。结论耐亚胺培南的铜绿假单胞菌除对阿米卡星敏感外，对其他常用抗生素耐药严重。携带TEM、CARB、DHA、IMP基因是本组试验菌株对β-内酰胺类抗生素和亚胺培南耐药的重要机制。

耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因分子流行病学研究

目的了解临床分离的92株耐药鲍曼不动杆菌ADC型β-内酰胺酶基因存在状况以及其基因进化分析。方法 92株耐药鲍曼不动杆菌分离自某省级医院痰液标本,药敏纸片法检测其药物敏感性,聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析ADC型β-内酰胺酶基因。结果 92株鲍曼不动杆菌对头孢噻肟、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林/三唑巴坦、阿米卡星、左氧氟沙星、米渃环素、复方磺胺甲噁唑的耐药率分别为:91.3%、91.3%、91.3%、89.1%、89.1%、90.2%、67.4%、83.7%、58.7%、84.7%;ADC型β-内酰胺酶的阳性率为93.5%;ADC型β-内酰胺酶基因分子进化显示,可分为4个簇群。结论 ADC型β-内酰胺酶基因在多重耐药的鲍曼不动杆菌中广泛存在,这有可能是造成青霉素、第一至第三代头孢类药物和单环类β-内酰胺类药物耐药的主要原因。

耐环丙沙星的产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌gyrA基因突变研究

目的为了解耐环丙沙星产超广谱β_内酰胺酶大肠埃希菌的gyrA基因突变状况。方法在大肠埃希菌gyrA基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)序列的两侧自行设计引物并建立PCR扩增和产物直接测序体系,对11株耐环丙沙星产超广谱β_内酰胺酶大肠埃希菌和1株环丙沙星敏感的TEM2型大肠埃希菌的QRDR序列进行检测。结果11株耐环丙沙星的大肠埃希菌均存在第83位和87位的氨基酸密码子的错义突变:TCG(丝氨酸)→TTC(亮氨酸);GAC(天冬氨酸)→AAC(天冬酰胺);其中3株菌株还同时存在第85位氨基酸密码子的同义突变:GTC(缬氨酸)→GTT(缬氨酸)。而环丙沙星敏感的TEM2型大肠埃希菌则无突变。结论耐环丙沙星表型的产超广谱β_内酰胺酶大肠埃希菌存在gyrA基因QRDR区的突变。表明ESBLs菌同时耐喹诺酮类药物的表型有其基因改变的基础。

耐甲氧西林葡萄球菌中耐氨基糖甙类基因的检测研究

目的研究该院耐甲氧西林葡萄球菌对氨基糖甙类药物耐药的相关基因型的流行情况。方法用MicroScan Auto SCAN4细菌鉴定仪对该院2002年1～12月分离的60株耐甲氧西林葡萄球菌进行鉴定，药敏试验采用K-B法；利用聚合物酶链反应（PCR）法进行aac（6’）／aph（2”）、aph（3’）-Ⅲ、ant（4’，4”）等耐药基因的检测。结果24株耐甲氧西林溶血葡萄球菌（MRSH）中检出aac（6’）／aph（2”）、aph（3’）-Ⅲ、ant（4’，4”）基因分别为21株（87．5％）、8株（33．3％）、7株（29．2％）；36株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）中检出aac（6’）／aph（2”）、aph（3’）-Ⅲ、ant（4’，4”）基因分别为33株（91．7％）、26株（72．2％）、3株（8．3％）。结论MRSH对氨基糖甙类抗生素的耐药机制主要是携带了aac（6’）／aph（2”）基因，表现在对庆大霉素和妥布霉素高度耐药，并与耐药表型基本相符；MRSA对氨基糖甙类抗生素的耐药机制主要是携带了aac（6’）／aph（2”）和aph（3’）-Ⅲ基因。表现在对庆大霉素、妥布霉素和阿米卡星高度耐药。MRSA对氨基糖甙类抗生素的耐药率比MRSH更高。MRSH和MRSA中的aph（3’）-Ⅲ、ant（4’，4”）基因检出率数据经统计软件处理，差异有统计学意义（P〈0．05）。

支原体科病原体分子检测方法学研究

支原体科微生物感染不仅可致人体炎症及并发症(不孕不育、妊娠不良结局等),近年并发现支原体是HIV感染的协同因子。支原体体外培养困难,且不同的支原体感染可有相同的疾病谱。为此我们建立了以外套通用扩增、内套种特异扩增的9种支原体套式聚合酶链反应(nPCR)检测方法,为满足进一步确认和变异株研究并建立了nPCR产物全自动DNA测序方法。方法学考核结果为本nPCR检测技术为支原体种特异、灵敏度可达1fg支原体DNA(约一个支原体菌体)。nPCR检测全流程仅需5小时。

鹦鹉热衣原体套式PCR和DNA测序方法研究

目的 建立特异、灵敏、快速的鹦鹉热衣原体 (Cps)分子生物学检测方法。 方法 采用套式PCR扩增检测和DNA测序方法 ,并进行实验室评价。结果 4株Cps均能被套式PCR扩增出 2 14bp目的条带 ,而沙眼衣原体、肺炎衣原体、肺炎支原体等其它微生物均不能检出 ;Cps套式PCR灵敏度高于CpsPCR ;模拟样本均能被检出。Cps(CS株 )套式PCR产物直接测序与Cps典型株序列完全一致。结论 套式PCR是检测Cps特异、灵敏 。

肺炎克雷伯菌耐药基因近年国内研究进展

近年来肺炎克雷伯菌（K.pneumoniae,KPN）已成为医院感染的重要病原菌。国家细菌耐药监测网和全国医院感染监控网报道,KPN分离率居第二或三位。KPN对包括-内酰胺类和氨基糖苷类在内的常用药物出现了严重的多重耐药性。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌耐药特征及β-内酰胺类耐药基因研究

目的 分析我院2005年1．12月临床分高34株耐亚胺培南铜绿假单胞菌对常用抗生素的耐药特征以及β-内酰胺类耐药相关基因存在状况。方法 应用BD Phoenix100全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感试验，头孢哌酮，舒巴坦采用K-B法。应用PCR方法检测12种β-内酰胺类耐药相关基因，分别为TEM、SHV、CARB、OXA．10、PER、VEB、GES、DHA、IMP、VIM、GIM、SPM。结果 亚胺培南耐药铜绿假单胞菌除对阿米卡星100％敏感外，对哌拉西林、哌拉西林，他唑巴坦敏感率为48％-54％，对三代、四代头孢菌素，氨曲南，喹诺酮类等抗生素抗菌活性差，敏感率为3％-29％。对美洛培能有29％敏感，对氨苄西林，舒巴坦、氯霉素、四环素、复方新诺明全部耐药。β-内酰胺类耐药相关基因TEM、CARB、DHA、IMP阳性率分别为5．9％、32．4％、14．7％、17．6％，而SHV、OXA-10、PER、VEB、GES、VIM、GIM．SPM均为阴性。结论 耐亚胺培南的铜绿假单胞菌除对阿米卡星敏感外，对其它常用抗生素耐药严重。携带TEM、CARB、DHA、IMP基因是本组试验菌株对β-内酰胺类抗生素和亚胺培南耐药的重要机制。

国内2003～2007年铜绿假单胞菌耐药相关基因研究进展

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA）广泛分布于自然界及健康人的皮肤、肠道和呼吸道。PA菌是条件致病菌,已是医院感染病原菌最常见菌种之一。国内首篇PA菌抗菌药物耐药相关基因报道已有6年，近5年来PA菌耐药相关基因研究有了不少进展。现综述如下。

耐亚胺培南铜绿假单胞菌β内酰胺类药物耐药相关基因的研究

目的为了解临床分离的耐亚胺培南的铜绿假单胞菌（imipenem—resistante pseudomon asaeruginosa，IMPRPa）β内酰胺类药物耐药相关基因存在状况。方法将分离所得的18株全部耐亚胺培南的PA菌株进行产金属β内酰胺酶表型检测，聚合酶链反应（PCR）法对耐亚胺培南的铜绿假单胞菌进行β内酰胺类药物耐药相关基因在检测，并对部分耐药基因进行了DNA测序。结果10（55．6％）株产金属β内酰胺酶纸片协同法检测阳性，IMP、VIM、DHA、GES、CARB、TEM阳性率分别为22．2％（4／18）、33.3％（6／18）、11．1％（2／18）、33．3％（6／18）、16．7％（3／18）、22．2％（4／18），oprD2缺失率77．8％（14／18）。结论铜绿假单胞菌可存携带2种以上β内酰胺酶基因，能在同种和不同种细菌间横向传播，并产生多重耐药，严重影响临床的抗感染治疗。

细菌抗菌药物耐药基因研究中值得注意的问题

随着抗菌药物的广泛应用，细菌的耐药率呈逐年上升，已成为全球关注的公共卫生问题。根据我们几年来累积的经验，并结合最近的文献资料，以下就细菌耐药和耐药基因研究的有关几方面问题作扼要的阐述。

1株泛耐药铜绿假单胞菌耐药基因研究

目的了解1株泛耐药铜绿假单胞菌（PDRPA）耐药基因携带状况。方法采用PCR检测该株PDRPA菌44种基因。结果该株PDRPA菌携带TEM-1、OXA．10、PER-1、aac（3）-Ⅱ、aac（6’）-Ⅱ、ant（3”）-Ⅰ、rmtB、sull、cmlA、intⅠ1、merA基因，且伴有oprD2缺失。结论该株PDRPA菌携带多种耐药基因是泛耐药原因。

铜绿假单胞菌IMP型金属β-内酰胺酶的基因研究

目的 研究铜绿假单胞菌产金属β- 内酰胺酶(metallo -β- lactamases,简称金属酶)的编码基因及亚型。方法 临床分离的铜绿假单胞菌用全自动微生物分析系统鉴定,纸片扩散法进行抗生素敏感试验,采用纸片协同法检测金属酶表型,PCR法扩增金属酶基因,并对PCR产物进行序列测定,确定亚型。结果 24株耐亚胺培南铜绿假单胞菌共检出产金属酶菌株7 株。该7 株细菌均扩增出IMP型金属酶,其扩增片段含500个核苷酸,核苷酸及氨基酸序列经GenBank分析,为IMP -1型金属酶(注册号:AY386702),但有3个位点的同义突变。结论 7 株临床分离的铜绿假单胞菌产生的金属酶为IMP -1亚型。

耐甲氧西林葡萄球菌红霉素甲基化酶编码基因研究

近年来,随着第三代头孢菌素、氟喹诺酮类、碳青霉烯类等针对革兰阴性杆菌的抗菌药物应用的增加和侵袭性治疗手段使用率的上升,革兰阳性球菌分离率逐年上升.其中耐甲氧西林葡萄球菌(meticillin-resistant staphylcoccus,MRS)分离率居前列.MRSA对常用药物的耐药率均在80%以上[1].MRS已是主要的医院感染病原菌,且具多重耐药特征,即同时耐青霉素类、氨基糖苷类和红霉素类药物.为了解MRSA、耐甲氧西林溶血葡萄球菌(MRSH)红霉素类耐药主要相关基因存在状况,我们检测了对36株MRSA菌、24株MRSH的红霉素甲基化酶编码基因(erm基因),现报告如下.

常见球菌红霉素耐药基因研究

目的 探讨常见球菌红霉素耐药基因存在状况。方法 对常见细菌国内分离株进行红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因（ermA／B／C／G／Q、errnTiB、crmF）、主动外排转运基因（mefA）检测。结果 肺炎链球菌、MRSA、MRCNS、粪肠球菌、屎肠球菌的crm基因检出率较高，其中肺炎链球菌并可检出mefA基因。结论 常见球菌国内分高株红霉素耐药的常见机制为携带红霉素梭糖体甲基化酶基因。